郝光啟，郁樹濤，孫彥余

(魯南制藥集團股份有限公司，臨沂 276006)

米格列醇(C8H17NO5)為去氧野尻霉素衍生物，是一種新型口服α-葡萄糖苷酶抑制劑。如按國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(YBH00592010)對該藥進行檢測，會出現(xiàn)的諸多問題而無法正常檢測[1]。本文通過研究，改變了原流動相組成及pH值，建立了新方法，解決了上述問題。該方法專屬性強、靈敏度高、準(zhǔn)確度和重復(fù)性好、方法簡便，可同時用于米格列醇片有關(guān)物質(zhì)和含量的定量測定。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1100高效液相色譜系統(tǒng)：G1379A脫氣機、G1311A四元泵、G1313A自動進樣器、G1316A柱溫箱、G1315B DAD檢測器、A 10 01化學(xué)工作站(美國安捷倫公司)，SHH-100GD藥品強光照射試驗箱(重慶市永生實驗儀器廠)，YB系列真空恒溫干燥箱(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠)，TTL-10B超純水系統(tǒng)(北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司)，PHS-3C型精密pH計(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，XS204型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2試藥 米格列醇對照品(本公司生產(chǎn)的原料藥，經(jīng)HPLC面積歸一化法測定純度為99.8%以上)，米格列醇片(本公司生產(chǎn)，批號：081201、081202、081203)。乙腈為色譜純(山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司)，磷酸二氫銨、三乙胺均為分析純，實驗用水為超純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性 色譜柱：Lichrospher氨丙基硅烷鍵合硅膠色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)(江蘇漢邦科技有限公司)；流動相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫銨溶液(三乙胺調(diào)pH至7.5)(65∶35)；檢測波長：210 nm；流速：1.0 ml/min；進樣量：20 μl；柱溫：25 ℃；檢測器：二極管陣列檢測器(DAD)。理論塔板數(shù)按米格列醇峰計算應(yīng)不低于1 000。

2.2溶液制備

2.2.1有關(guān)物質(zhì)供試品溶液 取本品細粉適量(含米格列醇約200 mg)，精密稱定，加流動相溶解并稀釋至100 ml，精密量取此液，用流動相稀釋成每1 ml含有600 μg的溶液，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.2有關(guān)物質(zhì)對照溶液 精密量取供試品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3含量測定供試品溶液 取本品20片，精密稱定，研細，混合均勻；精密稱取適量(相當(dāng)于米格列醇約100 mg)，加流動相適量溶解并稀釋成每1 ml中含米格列醇約100 μg，搖勻，濾過。

2.2.4含量測定對照品溶液 取經(jīng)60 ℃減壓干燥至恒重的米格列醇對照品適量，精密稱定為10.6 mg，置50 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取溶液5 ml置于10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.3專屬性試驗

2.3.1空白輔料干擾試驗 取米格列醇片空白輔料適量(約相當(dāng)于200 mg的米格列醇處方量)，按有關(guān)物質(zhì)供試品制備法配制溶液，照上述色譜條件依法測定，結(jié)果見圖1。由圖可見，空白輔料對米格列醇的測定無干擾。

2.3.2樣品破壞性試驗

2.3.2.1酸破壞 取樣品適量(相當(dāng)于米格列醇約15 mg)，置25 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液5 ml，100 ℃水浴加熱5 h，冷卻，加堿中和后，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液依法檢查。

2.3.2.2堿破壞 取樣品適量(相當(dāng)于米格列醇約15 mg)，置25 ml量瓶中，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液5 ml，100 水浴加熱3 h，冷卻，加酸中和后，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液依法檢查。

2.3.2.3熱破壞 取樣品適量(相當(dāng)于米格列醇約15 mg)，置25 ml量瓶中，于140 ℃恒溫箱中放置5d，冷卻，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液依法檢查。

2.3.2.4氧化破壞 取樣品適量(相當(dāng)于米格列醇約15 mg)，置25 ml量瓶中，加30%過氧化氫溶液0.5 ml，常溫放置1 min，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液依法檢查。

2.3.2.5光照破壞 取樣品適量(相當(dāng)于米格列醇約15 mg)，置25 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，置于照度為4 500 Lx強光照射試驗箱中照射20 d，濾過，取續(xù)濾液依法檢查。

強制降解結(jié)果表明：本方法專屬性強，米格列醇與破壞后的輔料峰及降解產(chǎn)物完全分離，說明本色譜條件適用于米格列醇片的檢測。色譜圖見圖1。

1.米格列醇

2.4有關(guān)物質(zhì)檢查 依“2.2.1”和“2.2.2”項下方法分別配制有關(guān)物質(zhì)供試品溶液和對照溶液。精密量取對照溶液20 μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%～20%；再準(zhǔn)確量取供試品溶液20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液色譜圖中如顯示雜質(zhì)峰，扣除輔料峰外，單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的1/2(0.5%)，各雜質(zhì)峰峰面積的和，不得大于對照溶液主峰面積(1.0%)。三批樣品(批號081201、081202、081203)最大單個雜質(zhì)結(jié)果分別為：0.08%、0.08%和0.07%，總有關(guān)物質(zhì)分別為：0.60%、0.55%和0.51%，結(jié)果均符合規(guī)定。

2.5含量測定

2.5.1線性試驗 取“2.2.4”項下對照品儲備液，分別精密量取1.0、3.0、5.0、7.0和9.0 ml，各置于10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。依法測定，以米格列醇峰面積對其濃度(μg/ml)進行線性回歸，回歸方程為：Y=0.13X-3.13(r=0.999 5)。由此可見：米格列醇濃度在21.2～190.8 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.2精密度試驗 取“2.2.4”項下對照品溶液，依法連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，結(jié)果米格列醇峰面積的RSD為0.074%(n=6)，說明方法重復(fù)性良好。

2.5.3重復(fù)性試驗 取一批樣品(批號：081201)，分別依“2.2.3”和“2.2.4”項下方法配制6份供試品溶液和1份對照品溶液，在確定的色譜條件下測定，米格列醇片的平均含量(占標(biāo)示量)為99.1%，RSD為0.083%(n=6)。

2.5.4溶液穩(wěn)定性試驗 取“2.2.3”項下含量測定供試品溶液，依法分別于0、1、3、5、8和10 h后進樣分析。結(jié)果米格列醇峰面積的RSD為0.13%(n=6)，表明米格列醇溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5回收率試驗 分別精密稱取經(jīng)60 ℃減壓干燥至恒重的米格列醇對照品16、20和24 mg各3份，各置于100 ml量瓶中，并按處方量比例分別加入空白輔料，加流動相溶解并稀釋至刻度，然后依“2.2.4”項下對照品溶液配制方法制備9份回收率試驗溶液。取“2.2.4”項下對照品溶液，按外標(biāo)法以峰面積計算依法測定，結(jié)果平均回收率為100.1%，RSD為1.07%，見表1。

表1 含量回收率試驗結(jié)果(%,n=9)

2.5.6定量限和檢測限試驗 精密稱取米格列醇對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成一系列不同濃度的溶液，依法測定。當(dāng)信噪比S/N =10時，米格列醇濃度為0.19 μg/ml，米格列醇的定量限為3.80 ng；當(dāng)信噪比S/N =3時，米格列醇濃度為0.062 μg/ml，米格列醇的檢測限為1.24 ng。

2.5.7含量測定結(jié)果 取3批樣品(批號081201、081202、081203)依法測定，結(jié)果三批樣品含量(占標(biāo)示量)分別為99.1%、98.6%和100.3%，均符合規(guī)定。

3 討論

依國家藥監(jiān)局批準(zhǔn)的米格列醇片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(YBH00592010)，如前言所述情況，該產(chǎn)品無法正常檢測,而本文建立的方法專屬性強、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可同時用于米格列醇片的有關(guān)物質(zhì)檢查和含量測定，經(jīng)實驗證實本法亦可作為米格列醇原料藥的有關(guān)物質(zhì)檢查和含量測定的檢測方法。

1 郝光啟，李進啟，葛梅，等.米格列醇片溶出度HPLC檢測方法改進研究.天津藥學(xué),2011,23(1): 16