李家峰 李 越

新輔助化療的廣泛應用提高了腫瘤綜合治療的效果，尤其以乳腺癌最為顯著。但新輔助化療對腫瘤患者圍手術期及預后的影響尚無明確定論。筆者以前的研究結(jié)果表明，靜脈輸注環(huán)磷酰胺可導致正常大鼠圍手術期血漿兒茶酚胺濃度明顯升高，這種影響隨時間的延長而減弱[1]。為進一步了解新輔助化療對乳腺癌大鼠模型應激反應的影響，本研究通過對術前接受靜脈輸注紫杉醇的乳腺癌大鼠的血漿兒茶酚胺（包括腎上腺素和去甲腎上腺素）濃度及部分免疫指標進行測量，以期為新輔助化療后擇期手術時機的選擇提供證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 成年健康二級SD大鼠70只，購自北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部，雌雄各半，體質(zhì)量200 g左右，平衡飼養(yǎng)1周。

1.1.2 試劑與儀器 腎上腺素及去甲腎上腺素標準品（美國SIGMA公司），內(nèi)標物（B）：98%的氫溴酸3，4-二羥基芐胺（DHBA）對照品（ALDRICH公司）；紫杉醇規(guī)格5 mL：30 mg（北京協(xié)和藥廠）。日本島津LC-10A高效液相色譜儀，L-ECD-10A電化學檢測器，分析之星色譜工作站。

1.2 方法

1.2.1 實驗設計 將walker-256腫瘤細胞接種于大鼠左側(cè)腋下，20只大鼠因死亡或未形成滿意腫瘤結(jié)節(jié)而淘汰，采用隨機數(shù)字表的方法將剩余的50只大鼠隨機分為4個實驗組（分別為第1、2、3、4組）和1個對照組，每組10只。實驗組大鼠通過尾靜脈注射紫杉醇（25 μg/g）[2]，對照組大鼠輸注等量生理鹽水。4個實驗組分別于注藥后第1、2、3及4周末給予水合氯醛（300 μg/g）腹腔注射麻醉，通過內(nèi)眥靜脈取血2 mL備用，手術切除腫物造成外科應激刺激，術后通過股動脈取血5 mL備用，對照組于注藥后第1周末實施相同的處理。

1.2.2 指標測定 血漿兒茶酚胺濃度測定采用高壓液相色譜法；采用流式細胞儀（Coulter EPICSXL，美國）測定自然殺傷（NK）細胞計數(shù)和CD4+/CD8+細胞比值。血腫瘤壞死因子（TNF）-α和白細胞介素（IL）-6測定采用放射免疫法。

1.3 統(tǒng)計學處理 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料均以±s表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 手術前后各組乳腺癌大鼠血腎上腺素和去甲腎上腺素濃度比較 各組術前和術后腎上腺素濃度差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），第1、2組術前術后去甲腎上腺素濃度均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），第3、4組術前術后去甲腎上腺素濃度與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

2.2 手術前后各組大鼠免疫指標比較 各實驗組術前和術后NK值與對照組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；第1、2組術前和術后CD4+/CD8+均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，第3組術前CD4+/CD8+低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.011），見表2。

表1 各組手術前后大鼠腎上腺素和去甲腎上腺素濃度比較 （n=10，μg/L±s）

表1 各組手術前后大鼠腎上腺素和去甲腎上腺素濃度比較 （n=10，μg/L±s）

P值為各組與對照組相比所得；**P<0.01，表2、3同

對照組第1組第2組第3組第4組F術前55.78±14.69 47.03±23.49 65.01±21.85 56.25±9.18 64.80±12.46 1.881術后93.54±12.62 105.50±32.35 95.35±14.67 107.23±24.04 92.96±9.42 1.135術前14.69±2.22 34.21±5.02 58.51±13.14 16.51±6.81 15.51±4.45 66.672**P-<0.001<0.001 0.582 0.803術后30.11±4.12 54.63±16.82 67.84±11.26 24.08±9.05 31.92±4.59 32.832**P-<0.001 0.002 0.197 0.696腎上腺素 去甲腎上腺素組別

表2 各組手術前后大鼠免疫指標比較 （n=10 ±s）

表2 各組手術前后大鼠免疫指標比較 （n=10 ±s）

對照組第1組第2組第3組第4組F術前10.43±2.50 9.77±1.86 10.02±1.24 10.39±1.73 10.39±1.73 0.274術后9.33±0.86 9.64±1.29 9.74±1.09 10.09±1.26 9.91±1.74 0.496術前1.67±0.08 1.48±0.06 1.54±0.08 1.59±0.05 1.63±0.03 14.555**P-<0.001<0.001 0.011 0.275術后1.76±0.02 1.69±0.03 1.71±0.03 1.74±0.04 1.73±0.03 5.988**P-<0.001 0.002 0.154 0.076 NK（%） CD4+/CD8+組別

2.3 手術前后各組大鼠細胞因子水平比較 各實驗組術前和術后TNF-α值與對照組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），第1～3組術前和術后IL-6值均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），第4組與對照組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表3。

表3 各組手術前后大鼠細胞因子水平比較（n=10，μg/L ±s）

表3 各組手術前后大鼠細胞因子水平比較（n=10，μg/L ±s）

對照組第1組第2組第3組第4組F術前0.806±0.016 0.797±0.015 0.804±0.008 0.804±0.012 0.806±0.010 0.896術后0.815±0.018 0.805±0.009 0.812±0.029 0.808±0.005 0.807±0.009 0.565術前20.57±2.85 13.15±3.37 15.26±2.88 15.67±2.17 19.32±2.09 12.746**P-<0.001<0.001<0.001 0.313術后27.77±2.47 18.86±2.76 19.60±2.97 24.27±2.78 27.68±2.27 25.709**P-<0.001<0.001 0.005 0.935 TNF-α IL-6組別

3 討論

靜脈注射紫杉醇同靜脈注射環(huán)磷酰胺一樣對大鼠是一個強烈而持久的應激性刺激，紫杉醇使血漿去甲腎上腺素濃度升高的時限為2周；由于大鼠受到傷害性刺激時腎上腺素濃度升高的時限較短，在測定時已經(jīng)恢復至正常水平，因此各組腎上腺素濃度和NK細胞計數(shù)沒有差異。有研究證實，在創(chuàng)傷性刺激和大量失血導致休克時，內(nèi)源性兒茶酚胺分泌明顯增加；或同時給予外源性腎上腺素或去甲腎上腺素時，血漿兒茶酚胺水平明顯升高，全系淋巴細胞下降，其中CD8＋下降明顯，因此CD4+/CD8+比值加大；脾淋巴細胞的凋亡加速、細胞因子的分泌及脾淋巴細胞的增殖受到抑制，致使NK細胞計數(shù)明顯增加[3-4]。本研究術前CD4+/CD8+在輸注紫杉醇后的3周內(nèi)均低于對照組，術后第1、2周也低于對照組，且NK細胞計數(shù)無明顯變化，提示紫杉醇對大鼠免疫系統(tǒng)的抑制依然存在。各組間TNF-α無差異，而各組間IL-6的變化趨勢與CD4+/CD8+相近，可能與T細胞受化療抑制有關。

近年來，免疫系統(tǒng)在應激反應中的作用逐漸被重視。研究表明，免疫系統(tǒng)主要通過IL-1、IL-6及TNF-α等細胞因子和促腎上腺皮質(zhì)激素等調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的活動[5]。外科損傷以及傷害性刺激均可導致機體應激反應，其中交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)尤為活躍，是創(chuàng)傷首先發(fā)生的反應。血漿兒茶酚胺水平的變化是機體應激反應的重要指標之一。研究證實兒茶酚胺是重要的機體免疫調(diào)節(jié)機制，減少兒茶酚胺的分泌能夠減少血管外科術后血栓形成、改善胸外科手術后肺功能、增強圍手術期患者的抗感染能力[6]。同時有報道認為組織兒茶酚胺含量長期升高可以促進腫瘤細胞的生長[7]。因此，新輔助化療后選擇合適的手術時機，使機體處于較佳的免疫狀態(tài)，避免過度的應激反應，對于保證圍手術期安全及改善腫瘤預后有重要意義。本研究結(jié)果提示紫杉醇作用2周后機體的免疫狀態(tài)未完全恢復正常，但與外科應激密切相關的兒茶酚胺系統(tǒng)基本恢復正常，因此，此時期為擇期手術的較佳時機。

[1]李越，李家峰，查振起，等.靜脈輸注環(huán)磷酰胺對大鼠圍手術期血漿兒茶酚胺濃度的影響[J].中華外科雜志,2007,45(16):1136-1138.

[2]黃繼漢，黃曉暉，陳志揚，等.藥理實驗中動物間和動物與人間的等效劑量換算[J].中國臨床藥理學與治療學，2004，9（9）：1069-1072.

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