楊春雨 ，魏建和 ，，張 爭 ，馮錦東 ，甘炳春

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所·海南省南藥資源保護(hù)與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 萬寧 571533;2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193)

廣藿香是重要的南藥之一，是唇形科植物廣藿香 Pogostemon cablin(Blanco)Benth.，以葉、梗入藥，味辛，性微溫，歸脾、胃、肺經(jīng)，功能芳香化濕、和胃止吐、祛暑解表，主治濕阻中焦之脘腹痞悶、食欲不振、嘔吐、泄瀉，外感暑濕之寒熱頭痛，濕溫初起的發(fā)熱身困、胸悶惡心，鼻淵，手足癬[1]。青枯病是廣藿香的毀滅性病害。為更好地防治廣藿香青枯病，我所對(duì)該病原菌的生物變種和生理小種分布進(jìn)行了深入的調(diào)查研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

廣藿香青枯病原菌為青枯(茄)假單胞桿菌 Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith.[2]，海南省萬寧市廣藿香種植區(qū)采樣(表1)，分離培養(yǎng)、鑒定獲得。樣本采集1～3級(jí)的新鮮病株，常規(guī)處理樣本。病株的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):病害葉片少于10%為1級(jí)，11% ～20%為 2級(jí)，21% ～50%為3級(jí)，51% ～80%為4級(jí)，大于81%(至死亡)為5級(jí)。實(shí)驗(yàn)苗木有芭蕉(二倍體香蕉)、貢蕉(三倍體香蕉)、煙葉、茄子、番茄、馬鈴薯、廣藿香等，育苗獲得。實(shí)驗(yàn)室設(shè)備為常規(guī)設(shè)備。

表1 病原菌編號(hào)及采樣點(diǎn)(海南省萬寧市)

2 方法與結(jié)果

2.1 生物變種鑒定

廣藿香青枯病原菌生物變種鑒定方法參考文獻(xiàn)[3]進(jìn)行。如果接種菌株能利用“三糖三醇”，產(chǎn)酸時(shí)菌種培養(yǎng)液顏色比對(duì)照淺，產(chǎn)堿時(shí)菌種培養(yǎng)液顏色比對(duì)照深;如果接種菌株不能利用“三糖三醇”，則菌種培養(yǎng)液顏色與對(duì)照相同。生物變種鑒定表見表2。參考文獻(xiàn)[3]，配制Ayers培養(yǎng)基;分別加入乳糖、麥芽糖、纖維二糖、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)茅醇，消毒;加入按要求配制的菌液，裝管，培養(yǎng)3～4周。將不接種的培養(yǎng)液設(shè)為對(duì)照。結(jié)果編號(hào)為1－8的每支試管菌種培養(yǎng)液顏色都比對(duì)照管淺，表明廣藿香青枯病原菌8個(gè)菌株都能利用“三糖三醇”產(chǎn)酸，都屬于青枯菌生物變種Ⅲ。

表2 青枯菌生物變種鑒定表[3]

2.2 生理小種鑒定

青枯菌生理小種鑒定表[2－4]:見表3。

致病性鑒定[2－3]:采用輸液接種法，將在KBA培養(yǎng)基上培養(yǎng)24～48 h的菌苔稀釋為1×107～1×108個(gè)/mL的菌種懸浮液，用0.55×20型靜脈輸液針頭導(dǎo)入植物體內(nèi)。寄主為廣藿香、二倍體香蕉(芭蕉)、三倍體香蕉(貢蕉)、煙葉、茄子、番茄、馬鈴薯;茄子、番茄、馬鈴薯、廣藿香等苗木均為10～15 cm，二倍體香蕉和三倍體香蕉主干20～25 cm。田間溫度30～32℃，相對(duì)濕度85% ～90%，土壤相對(duì)濕度15% ～18%。1～2周后觀察結(jié)果。以無菌水代替菌種懸浮液，設(shè)為對(duì)照。結(jié)果見表4?？梢?，編號(hào)1－8的菌株對(duì)廣藿香、番茄、茄子、煙葉、馬鈴薯等致病力較強(qiáng)，但對(duì)二倍體香蕉和三倍體香蕉無致病力，表明8個(gè)菌株都是青枯菌生理小種1。

表3 青枯菌生理小種鑒定表

表4 廣藿香青枯病原菌生理小種寄主致病性鑒定結(jié)果

煙葉過敏試驗(yàn):采用1×107～1×108個(gè)/mL的菌種懸浮液，以注射針頭注入煙葉的支葉脈，每點(diǎn)間距0.01～0.03 cm，1～2周后觀察結(jié)果。結(jié)果編號(hào)1－8的菌株對(duì)煙葉都有較強(qiáng)的致病力，接種點(diǎn)都出現(xiàn)壞死斑，表明8個(gè)菌株都是青枯菌生理小種1。

黑色素反應(yīng)檢測:將 L－酪氨酸培養(yǎng)基鋪成平板后，分別接種各菌株，1周后觀察結(jié)果。結(jié)果培養(yǎng)1周后，盡管編號(hào)1－8的菌株產(chǎn)生黑色素的多少略有差異，出現(xiàn)時(shí)間遲早也略有不同，但總體上都能產(chǎn)生大量黑色素，故8個(gè)菌株都鑒定為生理小種1。

3 討論

在海南省萬寧市各種植區(qū)，廣藿香青枯病原菌都為青枯(茄)假單胞桿菌 Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith.生物變種Ⅲ、生理小種1;廣藿香青枯病原菌生物變種和生理小種的種類單一，可能與各種植區(qū)的苗木來源相同有關(guān)。本研究采用的是隨機(jī)采樣法。該法自有其合理性，但與全面采樣法相比仍存在差異。

[1]中醫(yī)藥管理局《中華本草》編輯委員會(huì).中華本草(7冊(cè))[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999:130－134.

[2]文衍堂，鄭小波.海南島廣藿香、沙姜青枯病病原鑒定[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，1984(2):113－120.

[3]任欣正.植物病原細(xì)菌的分類和鑒定[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，1999:16－17，142－143.

[4]鄒 陽，肖崇剛.重慶地區(qū)煙草青枯病菌生理小種的初步鑒定[J].煙草科技，2008(5):60－64.