李華強，徐外蘭，柯 威，文德鑒

1.湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院(湖北恩施445000)

2.湖北民族學(xué)院科技學(xué)院(湖北 恩施445000)

魚腥草中黃酮類化合物為其主要活性成分之一，具有抗病毒、降血脂、抗炎、抗氧化、抗過敏等作用［1，2］。目前針對恩施魚腥草總黃酮的研究大多是提取工藝的比較及改進，對其成分的地域性區(qū)別深入研究較少，本實驗采用紫外分光光度法測定恩施不同產(chǎn)地魚腥草中的總黃酮含量，為恩施自治州魚腥草藥材的種植與開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 藥材與試劑 魚腥草分別為2010年10月采自恩施、利川、巴東、來鳳、宣恩、建始、鶴峰、咸豐8縣(市)。經(jīng)湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院文德鑒副教授鑒定為三白草科植物蕺菜(Houttuynia cordata Thunb)的全草;蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號100080－200707)，其它試劑均為分析純。

1.2 儀器 Tu－1901雙光束紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);BS224S電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 取120℃干燥至恒重的蘆丁對照品50 mg，精密稱定，置25 ml量瓶中，加甲醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取10 ml置于100 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得(每1 ml含蘆丁0.2 mg)。

2.2 最大吸收波長的測定 取對照品溶液適量，置25 ml量瓶中，加水至6 ml，再加5%亞硝酸鈉溶液1 ml，搖勻，放置 15 min，加 10% 硝酸鋁溶液 1 ml，搖勻，放置15 min，照紫外－可見分光光度法(2010版《中國藥典》附錄VA)，在400～600 nm波長段進行掃描，測得在500 nm處有最大吸收值，與文獻［4］報道的510 nm有一定差異。

2.3 標準曲線的制備 量取對照品溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 ml，分別置 25 ml量瓶中，按“2.2”項下制備，以相關(guān)試劑溶液為空白，在500 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為:y=0.0011x－0.0003，R2=0.9997。結(jié)果見表1。

表1 不同濃度蘆丁對照品的吸光度值

2.4 供試品溶液的制備 分別取恩施自治州8個縣(市)的藥材粗粉1 g(各5份)，精密稱定，置索式提取器中，加乙醚適量，加熱回流至提取液無色，放冷，棄去乙醚液。加甲醇90 ml，加熱回流至提取液無色，轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中，用少量甲醇洗滌容器，洗液轉(zhuǎn)移至量瓶中，繼續(xù)加甲醇至刻度，搖勻。精密量取10 ml置100 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液，備用。

2.5 精密度試驗 用移液管移取供試品溶液2 ml于25 ml量瓶中，精密量取，以相關(guān)試劑溶液為空白對照，按2.2項下自“加水至6 ml”起分別依法測定吸光度。重復(fù)5次，經(jīng)計算，相對標準偏差RSD=1.14%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 用移液管移取供試品溶液2 ml于25 ml量瓶中，精密量取，以相關(guān)試劑溶液為空白對照，按2.2項下自“加水至6 ml”起分別依法測定吸光度。經(jīng)計算，在30 min內(nèi)的相對標準偏差RSD=2.24%，在35 min內(nèi)的相對標準偏差RSD=3.30%，故在30min內(nèi)測定總黃酮的含量是穩(wěn)定的。

2.7 重復(fù)性試驗 對采自恩施市的藥材按照供試品溶液的制備方法依法制備5份，分別供試品溶液2 ml于25 ml量瓶中，以相關(guān)試劑溶液為空白對照，按2.2項下自“加水至6 ml”起分別依法測定吸光度。經(jīng)計算，5份的相對標準偏差RSD=2.16%。

2.8 回收率試驗 取采自恩施市的藥材(已知含量為46.00%)5份，每份1 g，精密稱定，分別添加8 mg精密稱定的蘆丁對照品。按供試品溶液的制備方法制備。分別精密量取2 ml置25 ml量瓶中，以相關(guān)試劑溶液為空白對照，按2.2項下自“加水至6 ml”起分別依法測定吸光度。得平均加樣回收率為102.4%，相對標準偏差 RSD=1.47%。

2.9 含量測定 分別精密量取2.4項下供試品溶液2 ml，以相關(guān)試劑溶液為空白對照，按2.2項下自“加水至6 ml”起分別依法測定吸光度。平行測量5次，計算總黃酮含量。結(jié)果見表2。

表2 恩施地區(qū)不同產(chǎn)地魚腥草中總黃酮的含量(n=5)

3 結(jié)論

恩施自治州產(chǎn)魚腥草中總黃酮含量相對四川雅安(GAP基地)較高［3］，可能與本地區(qū)獨特的土壤、氣候等條件有關(guān)，為恩施自治州發(fā)展魚腥草的規(guī)?；N植提供了依據(jù)。本次測定結(jié)果也表明恩施自治州不同產(chǎn)地魚腥草總黃酮含量也存在較大差異，從分布特征看，以恩施市為中心，包括相距較近的周邊縣市(如宣恩縣、建始縣、利川市)含量較高，這為種植區(qū)域的選擇指明了方向。魚腥草作為藥材市場需求量巨大，而且在恩施自治州有將魚腥草的鮮嫩根莖經(jīng)過涼拌后直接食用的習(xí)俗，這為恩施自治州發(fā)展魚腥草產(chǎn)業(yè)提供了非常廣闊的市場開發(fā)和應(yīng)用前景。

［1］龔乃超，干信.魚腥草黃酮類化合物的研究進展［J］.微量元素與健康研究，2008，25(3):61－64.

［2］邱江勻，楊亞玲，楊國榮，等.魚腥草總黃酮提取及其抗過敏活性的研究［J］.云南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，20005，27(3):239－244.

［3］宗曉萍，董小萍.魚腥草中總黃酮的含量測定研究［J］.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，31(3):61－62.