韓 峰 周亞麗

1.內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市紅山區(qū)中醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000

富馬酸比索洛爾為新一代選擇性β1受體阻滯劑，它具有選擇性高、藥理作用強(qiáng)、藥效持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)及毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。目前已在國(guó)內(nèi)外廣泛用于高血壓、心絞痛及其他心血管疾病的治療，療效確切、安全性好。

1 實(shí)驗(yàn)與方法

1.1 試劑試藥

富馬酸比索洛爾對(duì)照品，純度：99.7%；酒石酸美托洛爾對(duì)照品，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：100084-200101；富馬酸比索洛爾片：市售，規(guī)格為5 mg/片。試驗(yàn)用水為純化水，甲醇為色譜純；其他試劑為AR級(jí)。

1.2 儀器及設(shè)備

Agilent 1100液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀，柱溫箱、四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器。色譜工作站：Agilent Chem Station。

1.3 受試者及標(biāo)本采集

健康成年男性19例。在受試前兩周內(nèi)未服過任何藥物，無食物和藥物過敏史，均為自愿參加試驗(yàn)。

受試者禁食過夜后于次日晨7：00空腹給藥，用溫開水送服，服藥后4 h統(tǒng)一進(jìn)食。口服藥物前抽取空白血樣4 mL，在服藥后的 0.5、1、1.5、2、3、4、6、9、14、24、36、48 h 分別采集靜脈血 4 mL。

1.4 質(zhì)譜條件

離子檢測(cè)方式：選擇性離子檢測(cè)（SIM）；離子極性：正離子（positive）；離子化方式：氣動(dòng)輔助電噴霧離子化（ESI）；比索洛爾，[M+H]+離子，m/z 326.4；內(nèi)標(biāo)：美托洛爾，[M+H]+離子，m/z 268.4；傳輸區(qū)電壓：70 V；干燥氣流速：10 L/min；霧化室壓力：40 psig；干燥氣溫度：350 ℃。

1.5 血漿樣品的處理

于10 mL離心管中精密加入血漿樣品1 mL，內(nèi)標(biāo)溶液（0.5040 μg/mL）50 μL，旋渦，加入 1M 氫氧化鈉 100 μL，旋渦，加入乙酸乙酯5 mL，旋渦1 min，于4000 r/min離心5 min，取上層有機(jī)相轉(zhuǎn)移至另一10 mL離心管中，于40 ℃水浴中氮?dú)饬鞔蹈?。殘?jiān)?00 μL流動(dòng)相溶解，于16000 r/min離心3 min，吸取上清液進(jìn)樣10 μL，進(jìn)行HPLC-MS分析。

1.6 方法學(xué)考察

1.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取10 mL離心管數(shù)支，分別精密加入不同量的比索洛爾對(duì)照品溶液后以氮?dú)饬鞔蹈桑尤肟瞻籽獫{1 mL，旋渦，配成含比索洛爾的濃度分別為0.05071、0.09961、0.2998、0.9980、2.990、9.980、29.81，59.66，119.6 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿，計(jì)算比索洛爾As和內(nèi)標(biāo)Ai的比值（=As/Ai）。以血漿中比索洛爾濃度對(duì)比索洛爾峰As和內(nèi)標(biāo)Ai的比值進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明，在0.0507～119.6 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性良好， 回歸方程 = 0.0007099+ 0.04300C，r=0.9981，最低定量限為0.0507 ng/mL。

1.6.2 準(zhǔn)確度及精密度試驗(yàn) 按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法配制含比索洛爾濃度分別為0.1494、14.94、99.60 ng/mL的低、中、高3種濃度的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法分別處理測(cè)定，分別精密加入不同量的比索洛爾對(duì)照品溶液，以氮?dú)饬鞔蹈桑芗尤? mL空白血漿，旋渦30 s混勻，配成含比索洛爾濃度分別為0.1494、14.94、99.60 ng/mL的含藥血漿，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法分別于日內(nèi)和日間處理測(cè)定，并計(jì)算日內(nèi)和日間精密度（n=5）。本研究建立的血藥濃度測(cè)定方法準(zhǔn)確度在93.6%～108.8%范圍內(nèi)，精密度RSD均不大于7.0%。

1.6.3 樣本穩(wěn)定性考察 按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法配制含比索洛爾濃度分別為0.1494和99.60 ng/mL的含藥血漿，每種濃度各配制適量，然后每種濃度分取12份，每份1 mL。3份于配制好后按“血漿樣品的處理”項(xiàng)下操作立即分析；3份于室溫放置8 h后分析；3份于配制好后放入冰箱冰凍后取出化凍，反復(fù)凍融后分析；3份于配制好后放入冰箱中于-20℃冷凍保存4周后取出化凍，按“血漿樣品的處理”項(xiàng)下操作分析，考察反復(fù)凍融條件下穩(wěn)定性。結(jié)果表明，比索洛爾血漿樣品在上述條件下穩(wěn)定性均良好。

1.6.4 提取回收率試驗(yàn) 配制成0.1494、14.94、99.60 ng/mL的三種濃度的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿，按1.6.3項(xiàng)下操作，進(jìn)樣。另取對(duì)照品溶液配制成濃度相同的比索洛爾標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)樣。求得相應(yīng)的提取回收率，平均回收率為94.6%，RSD=3.9%。

1.6.5 質(zhì)量控制 在每批血漿樣品測(cè)定的同時(shí)建立相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線（即隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線）及質(zhì)控樣品，隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制方法見“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下，質(zhì)控樣品為含比索洛爾濃度分別為0.1494、14.94、99.60 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿，每批血漿樣品的濃度數(shù)據(jù)用隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線求得。在血漿樣品測(cè)定過程中，于每日平行測(cè)定低、中、高3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品，其測(cè)得值均維持在對(duì)應(yīng)真實(shí)值的±20%范圍內(nèi)。

2 討論

本試驗(yàn)中采用的參比藥物為進(jìn)口的富馬酸比索洛爾片，并為原研發(fā)單位，在國(guó)內(nèi)外同類上市的產(chǎn)品，占主導(dǎo)地位，其質(zhì)量穩(wěn)定可靠。試驗(yàn)方法采用兩制劑雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，抵消了試驗(yàn)周期和個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。4批隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均達(dá)到0.997，質(zhì)控樣品均在真實(shí)值的基礎(chǔ)加減20%，因此本試驗(yàn)的結(jié)果供試制劑與參比制劑生物等效的結(jié)論是可以信服。通過本方法質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)，說明提取方法可行，能夠考察人體內(nèi)的藥物代謝情況。

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[3]劉錫鈞，陳鷺穎，楊正管，等.國(guó)產(chǎn)富馬酸比索洛爾膠囊的人體相對(duì)生物利用度研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，16（1）：40-42.