姚淑紅 (山東省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局 271000)
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雞金黃色葡萄球菌的分離鑒定
姚淑紅 (山東省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局 271000)
本試驗對從病雞分離到的病原進(jìn)行微生物經(jīng)細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察、鑒別培養(yǎng)、生化試驗、血漿凝固酶試驗、過氧化氫酶試驗,結(jié)果鑒定為金黃色葡萄球菌。
雞 金黃色葡萄球菌 分離 鑒定
雞葡萄球菌病是由葡萄球菌所引起的一種傳染病,一般認(rèn)為金黃色葡萄球菌是主要的致病菌,該病有多種類型,是養(yǎng)雞業(yè)中危害嚴(yán)重的疾病之一。2009年9月,泰安市岱岳區(qū)某雞場雞群陸續(xù)發(fā)病,雞群出現(xiàn)精神沉郁、呆立、拍黃綠色糞便、關(guān)節(jié)腫大,并且有的出現(xiàn)急性死亡。為確診本病特進(jìn)行了該試驗。
普通肉湯、普通瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基,均按常規(guī)方法配制。微量生化發(fā)酵管、3%過氧化氫均有杭州天和微生物試劑有限公司提供。
1.2.1 病料來源 病例來源于泰安市岱岳區(qū)某雞場急性死亡的肉雞和同場發(fā)病雞。
1.2.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定 無菌取病料接種到5%綿羊血瓊脂培養(yǎng)板中,經(jīng)37℃培養(yǎng)24h,觀察菌落形態(tài)、生長情況和溶血現(xiàn)象。將純培養(yǎng)菌株進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。依據(jù)菌落形態(tài)和鏡檢情況,將分離純培養(yǎng)的菌株中疑似葡萄球菌屬的菌株做生化反應(yīng),并用標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌作參照,37℃培養(yǎng)24~72h,觀察其生化特性、培養(yǎng)特性,進(jìn)一步鑒定。
1.2.3 細(xì)菌的生化鑒定 將細(xì)菌純化后,取典型單個菌落分別接種于蔗糖、麥芽糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇、硝酸鹽、靛基質(zhì)、硫化氫、MR、VP生化管,37℃培養(yǎng)24h。
1.2.4 血漿凝固酶試驗 無菌采取健康家兔血液4份,加1份滅菌的3.8%枸櫞酸鈉,3 000rpm離心10min,取上清液即血漿備用。吸取1:4生理鹽水稀釋的新鮮兔血漿0.5ml,放入小試管中,再加入培養(yǎng)24h的分離菌株肉湯培養(yǎng)物0.5ml,振蕩搖勻,放37℃水浴培養(yǎng),每30min觀察1次,觀察6h判斷結(jié)果。同時用已知的血漿凝固酶陽性和陰性的葡萄球菌作為對照。
1.2.5 過氧化氫酶試驗 勾取少許菌落于載玻片上,滴加1滴3%過氧化氫,觀察結(jié)果。
分離菌37℃培養(yǎng)24h,在普通肉湯上生長迅速。剛開始渾濁,管底有少量沉淀,輕輕振蕩,沉淀物上升,隨即消散,不產(chǎn)生菌膜。在普通瓊脂培養(yǎng)基上形成光滑、濕潤、隆起、邊緣整齊、不透明的圓形菌落,直徑1~3mm,初呈白色,繼續(xù)培養(yǎng)變成金黃色。在血液瓊脂培養(yǎng)基上,菌落周圍可見明顯的溶血環(huán)。經(jīng)革蘭氏染色后鏡檢,可見革蘭氏陽性球菌,圓形,呈單個短鏈和葡萄串狀排列,無鞭毛,無芽孢,無莢膜。
細(xì)菌生化鑒定結(jié)果如表1。
表1 葡萄球菌生化鑒定結(jié)果
注:+表示產(chǎn)酸或陽性,-表示不產(chǎn)酸或陰性。
陽性菌株和待檢菌株使血漿呈膠凍狀凝固,而陰性菌株無凝固現(xiàn)象。判斷分離菌株的血漿凝固酶為陽性。
滴加3%過氧化氫與玻片上,迅速產(chǎn)生氣泡,過氧化氫酶陽性。
根據(jù)分離菌株的形態(tài)學(xué)觀察、分離鑒別培養(yǎng),以及生化試驗、血漿凝固酶試驗結(jié)果,確診該雞場雞群發(fā)病的病原為金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌廣泛分布于自然界,存在于正常皮膚、鼻咽部等,對外界環(huán)境抵抗力較強(qiáng)。該菌是一種條件性致病菌,常因氣候異常、皮膚傷口或注射疫苗等應(yīng)激因素影響,引起動物發(fā)病。雞場飼養(yǎng)人員應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和無菌意識,進(jìn)出雞舍應(yīng)更衣消毒,注射疫苗或藥物時應(yīng)注意注射部位和用具的消毒,盡量減少各種應(yīng)激因素。同時應(yīng)注意飼養(yǎng)場的清潔衛(wèi)生,對雞舍和用具進(jìn)行定時消毒,減少疾病傳播;嚴(yán)格淘汰感染動物,防止疾病傳播。
(2011–05–14)
S852.61+4
A
1007-1733(2011)08-0013-01