葛根素微丸制備及含量測(cè)定方法

常乃丹，于 輝，彭海生，張 寧

哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)藥學(xué)系，黑龍江大慶 163319

葛根素微丸制備及含量測(cè)定方法

常乃丹，于 輝，彭海生，張 寧

哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)藥學(xué)系，黑龍江大慶 163319

目的：制備葛根素微丸，建立葛根素微丸中葛根素含量測(cè)定的方法。方法：離心造粒法制備葛根素微丸。HPLC法測(cè)定葛根素的含量，色譜條件為C18柱，以甲醇-水（30∶70）為流動(dòng)相，流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm。結(jié)果：所制備的微丸產(chǎn)率達(dá)80%以上，葛根素含量在0.025～0.500 μg之間線性關(guān)系良好，平均回收率為98.44%，RSD為1.14%。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于葛根素微丸的制備和質(zhì)量控制。

葛根素；微丸；離心造粒；高效液相色譜法

葛根素是從中藥葛根中提取的有效成分之一，具有調(diào)節(jié)血管活性物質(zhì)、改善微循環(huán)、減輕鈣超載等作用，已廣泛應(yīng)用于各型心血管疾病的治療[1]?，F(xiàn)有劑型有片劑、注射劑等，本文將葛根素制成微丸，具有外形美觀、流動(dòng)性好、載藥量大、釋藥穩(wěn)定、生物利用度高、局部刺激小等優(yōu)點(diǎn)[2-3]。本實(shí)驗(yàn)采用離心制丸的方法，使用多功能滾圓機(jī)對(duì)葛根素微丸的制備進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示所制備的葛根素微丸成型性好、易于控制、生產(chǎn)設(shè)備較為簡(jiǎn)單，并建立了測(cè)定葛根素含量的HPLC方法，分析快速、簡(jiǎn)便、可靠性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

CGC-350多功能滾圓機(jī) （重慶英格造粒包衣技術(shù)有限公司）、高效液相色譜儀（SPD-20，日本島津）、KH3200DE 型數(shù)控超聲波清洗器 （昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）、101-4-BS電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）、電子天平（沈陽(yáng)龍騰電子有限公司）。

1.2 試藥

葛根素提取物（西安潤(rùn)堡生物科技有限公司，產(chǎn)品規(guī)格：葛根素99%，批號(hào)：20101113）、微晶纖維素、羥丙甲基纖維素、超純水、50%甲醇（色譜純）。

2 方法與結(jié)果

2.1 葛根素微丸的制備[4-5]

2.1.1 丸芯的制備

定量稱取微晶纖維素干燥粉末200 g投入滾圓機(jī)的容器轉(zhuǎn)盤(pán)上，噴入純凈水作為粘合劑，將機(jī)器參數(shù)設(shè)置為：轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)速250 r/min、鼓風(fēng)頻率10 Hz、進(jìn)風(fēng)溫度10℃、蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速20 r/min，隨著轉(zhuǎn)盤(pán)不斷旋轉(zhuǎn)并鼓風(fēng)，逐漸形成較大粒子獲得球形母核，少量多次加入微晶纖維素，控制轉(zhuǎn)盤(pán)內(nèi)粒子的濕度、粒徑及圓整度，不斷包敷使母核逐漸增大，至圓整度較好時(shí)從出料口取出，置于烘箱中經(jīng)5～6 h烘干，過(guò)篩即得丸芯。

2.1.2 微丸的制備

稱取所制備葛根素丸芯適量置滾圓機(jī)的轉(zhuǎn)盤(pán)上，噴入3%的羥丙甲基纖維素溶液作為粘合劑，將機(jī)器參數(shù)設(shè)置為：轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)速140 r/min，鼓風(fēng)頻率28 Hz，進(jìn)風(fēng)溫度10℃，蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速10 r/min，待轉(zhuǎn)盤(pán)勻速運(yùn)轉(zhuǎn)并使丸芯得到足夠潤(rùn)濕后少量多次加入葛根素提取物，使葛根素均勻地包敷于丸芯上，控制其圓整度和濕度，待葛根素微丸逐漸長(zhǎng)大，圓整度良好時(shí)，可減慢轉(zhuǎn)速，打開(kāi)出料閥，將微丸置于烘箱中5～6 h，過(guò)篩即得葛根素微丸。

2.1.3 收率

采用篩析法，取50 g微丸，手工篩分，計(jì)算24～18目微丸的百分重量比，結(jié)果為81.6%。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件[6]

色譜柱采用伊力特Hypersil OSD C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測(cè)器：日本島津 SPD-20A；流動(dòng)相：甲醇-水=30∶70，等濃度洗脫；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μl；理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000，分離度應(yīng)大于1.5。

2.2.2 溶液的配制[7-8]

2.2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取葛根素對(duì)照品0.005 0 g，置50ml容量瓶中，加50%的甲醇至刻度，搖勻，超聲處理30min，作為貯備液（100 μg/ml）。

2.2.2.2 供試品溶液制備 取所制備的葛根素微丸約1 g，置研缽中研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置50 ml容量瓶中，加入50%的甲醇置刻度，密塞，稱定重量，搖勻，超聲（功率250 W，頻率30 kHz，溫度20℃）處理30 min，放冷后再稱定重量，用50%的甲醇補(bǔ)足缺失重量，搖勻，經(jīng)微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾，取續(xù)濾液即得。

2.2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 取不含葛根素的陰性試劑（葛根素微丸丸芯），按供試品溶液的制備方法制備即得。

2.2.3 專屬性試驗(yàn)

按含量測(cè)定的方法測(cè)定HPLC色譜圖，并進(jìn)行專屬性考察，結(jié)果提示陰性溶液無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2.4 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品貯備溶液（100 μg/ml），分別制成濃度為 50.0、25.0、10.0、5.0、2.5、1.0 μg/ml的 6 個(gè)樣品， 分別吸取10 μl，按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)得峰面積。以峰面積A為縱坐標(biāo)，以葛根素的進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求得回歸方程為：A=8.656×104X+5.203×103，r=0.999 7。 結(jié)果表明，葛根素的進(jìn)樣量在0.025～0.500 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液（25 μg/ml）10 μl，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)6次，測(cè)定峰面積，6次測(cè)定的峰面積平均值為2 109 529，RSD=2.32%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液（5 μg/ml），在 0、2、4、6、8、10、12、24 h 內(nèi)，分別進(jìn)樣 10 μl，按上述色譜條件測(cè)定，RSD=1.25%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取葛根素提取物，按供試品溶液的制備方法制備，用HPLC按含量測(cè)定方法測(cè)定，進(jìn)樣6次。測(cè)定結(jié)果顯示，葛根素的平均含量為0.11 g/g，RSD為5.3%。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品5份，每份約0.25 g，分別精密加入葛根素對(duì)照品溶液，按含量測(cè)定的方法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明葛根素的回收率良好，見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)

2.2.9 樣品含量測(cè)定

精密稱取適量的葛根素微丸，按供試品溶液的配制方法制備，在上述色譜條件下對(duì)3批葛根素微丸溶液進(jìn)行HPLC分析，結(jié)果第1批葛根素含量為0.11 g/g、第2批葛根素含量為0.09 g/g、第3批葛根素含量為0.11 g/g，平均值為0.10 g/g。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)制丸所用材料均為常用輔料，價(jià)格低廉；噴液、撒粉、干燥同時(shí)進(jìn)行，周期較短；但是由于多功能滾圓機(jī)蠕動(dòng)泵與物料距離較近，使?jié)櫇駝╈F粒到達(dá)物料表面的距離明顯縮短，附著力較強(qiáng)，在操作過(guò)程中要注意控制轉(zhuǎn)速的穩(wěn)定和添加輔料的頻率，避免粘粒；制粒過(guò)程中由經(jīng)過(guò)窄縫的熱空氣進(jìn)行干燥，風(fēng)量較小，干燥強(qiáng)度較低，不致使物粒過(guò)早干燥；用粉末制丸時(shí)初始階段有粉末飛揚(yáng)，可采取適量增加潤(rùn)濕劑的方法用以消除；在制備丸芯的過(guò)程中，由于所用的潤(rùn)濕劑為水，粘合強(qiáng)度較成丸過(guò)程中所用的羥丙甲基纖維素溶液小，因此在制備微丸的過(guò)程中轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)速應(yīng)稍大于制備丸芯時(shí)的轉(zhuǎn)速，避免物料粘在制丸機(jī)容器壁。

通過(guò)用50%甲醇、75%甲醇以及30%的乙醇對(duì)同一條件下的相同樣品進(jìn)行溶解顯示，在實(shí)驗(yàn)所采取的色譜條件下，50%的甲醇測(cè)定相同樣品含量準(zhǔn)確，峰形好，分離度高，故本實(shí)驗(yàn)采用50%的甲醇作為溶劑。

先后用甲醇-水-冰醋酸（25∶75∶0.2）、乙腈-水（10∶90）、甲醇-水（25∶75）、甲醇-水（30∶70）為流動(dòng)相，結(jié)果在甲醇-水（30∶70）的條件下，供試溶液中的葛根素與相鄰組分分離度好，陰性樣品無(wú)干擾。故結(jié)合本實(shí)驗(yàn)所采取的實(shí)驗(yàn)條件，選用甲醇-水（30∶70）為流動(dòng)相，測(cè)定結(jié)果顯示具有良好的線性關(guān)系。

[1]蔡志春,王松青,方云祥.葛根素對(duì)溶血磷脂酰膽堿誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)的影響[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,7(11):15-17.

[2]袁亮,張建琴,林婷婷,等.離心造粒法制備復(fù)方丹參微丸[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(5):10-14.

[3]王錦玉,仝燕,王智民,等.牛黃上清微丸的制備工藝[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(17):10-14.

[4]李曉明,陶秀梅,王曉麗,等.應(yīng)用離心造粒法制備鹽酸二甲雙胍微丸的研究[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2008,29(5):590-594.

[5]許小紅,趙東虎,王道均.離心造粒法制備貫葉連翹提取物微丸[J].中國(guó)藥師,2010,13(9):1283-1285.

[6]李東輝.HPLC測(cè)定參蘇感冒片葛根素的含量[J].中國(guó)藥事,2008,22(2):135-136.

[7]顧方,李欽,陳曉文,等.HPLC法測(cè)定復(fù)方冬紅合劑中葛根素含量[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,19(7):908-909.

[8]程杰,劉姣,楊旭杰,等.HPLC法測(cè)定愈風(fēng)寧心軟膠囊中葛根素的含量[J].河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2010,25(1):35-36.

Preparation and the content determination of Puerain Pellets

CHANG Naidan,YU Hui,PENG Haisheng,ZHANG Ning
Department of Pharmacy,Daqing Campus of Harbin Medical University in Heilongjiang Province,Daqing 163319,China

Objective:To prepare Puerain Pellets and establish a method for determining the content of Puerain in Puerain Pellets.Methods:The Puerain Pellets were prepared by using a centrifugal granulator.The HPLC method was established for determination of Puerarin in Puerarin Pellets.A ODS C18column was adopted.The mobile phase was methanol-water solution (30∶70)with the flow rate of 1.0 ml/min.The detection wavelength was 250 nm.Results:The productivity was more than 80%,the linearity range was 0.025-0.500 μg,The average recovery of Puerarin was 98.44%,RSD was 1.14%.Conclusion:The method is simple,precise and reliable,which is suitable for preparing and determining Puerain Pellets.

Puerain;Pellets;Centrifugal granulation;HPLC

R927.2

A

1673-7210（2011）10（c）-060-03

常乃丹（1983-），女，本科學(xué)歷，主要從事藥物制劑研究。

于輝（1968-）女，本科學(xué)歷，副教授，主要從事藥物制劑研究。

2011-07-01）