劉志強(qiáng)，程紅斌，劉建國(guó)＊，景元海

（1.吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院 骨關(guān)節(jié)二科，吉林 長(zhǎng)春 130021；2.武警總醫(yī)院 神經(jīng)干細(xì)胞移植科，北京 1000397；3.大慶總醫(yī)院集團(tuán)龍南醫(yī)院 骨科，黑龍江 大慶 163000）

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在關(guān)節(jié)軟骨損傷中的應(yīng)用

劉志強(qiáng)1，程紅斌2，劉建國(guó)1＊，景元海3

（1.吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院 骨關(guān)節(jié)二科，吉林 長(zhǎng)春 130021；2.武警總醫(yī)院 神經(jīng)干細(xì)胞移植科，北京 1000397；3.大慶總醫(yī)院集團(tuán)龍南醫(yī)院 骨科，黑龍江 大慶 163000）

＊通訊作者

隨著細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和材料學(xué)等基礎(chǔ)科學(xué)的快速發(fā)展，組織工程研究和應(yīng)用得以飛速發(fā)展，為軟骨缺損修復(fù)這個(gè)醫(yī)學(xué)難題開辟了全新領(lǐng)域。骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）在體外大量擴(kuò)增對(duì)其最終在體內(nèi)形成軟骨組織無明顯影響并可分化成軟骨和骨組織，正是由于這些特性，使之成為組織工程軟骨構(gòu)建中熱門的種子細(xì)胞。本文對(duì)BMSCs在軟骨損傷中的應(yīng)用進(jìn)展加以綜述。

1 軟骨損傷機(jī)制

關(guān)節(jié)軟骨的損傷根據(jù)損傷類型和修復(fù)反應(yīng)的不同，可以被區(qū)分為3個(gè)等級(jí)：①軟骨表面完好的軟骨內(nèi)損傷，伴或不伴軟骨下骨損傷。②局限于關(guān)節(jié)軟骨的非全層軟骨缺損，未累及軟骨下骨。③關(guān)節(jié)軟骨并軟骨下骨的全層缺損。關(guān)節(jié)表面完好的軟骨內(nèi)損傷病理改變?yōu)檐浌腔|(zhì)斷裂，存活軟骨細(xì)胞可增強(qiáng)合成功能來修復(fù)組織。局限于關(guān)節(jié)軟骨的非全層缺損無法自愈，通常認(rèn)為損傷未及軟骨下骨，無法引出骨髓中的干細(xì)胞。累及軟骨和軟骨下骨的全層缺損，由于損傷貫通軟骨硬化區(qū)和軟骨下骨，骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞等可遷至軟骨損傷處，生成修復(fù)性的纖維軟骨組織。這種修復(fù)組織在生物力學(xué)性能、耐久性等方面遠(yuǎn)不及健康軟骨，但可覆蓋、保護(hù)缺損區(qū)軟骨下骨，減少軟骨磨損和游離屑的形成。

2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在關(guān)節(jié)軟骨損傷中的應(yīng)用

其基本方法是將自體或異體的組織細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)擴(kuò)增后，接種到一種生物相容性良好可吸收的生物材料上，形成細(xì)胞生物材料復(fù)合物，再回植到體內(nèi)組織缺損部位，隨著生物材料逐漸被機(jī)體吸收，細(xì)胞分化生長(zhǎng)成新的有功能的組織，從而達(dá)到修復(fù)缺損的目的。主要涉及到種子細(xì)胞、支架材料和生長(zhǎng)因子3個(gè)基本要素。

2.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone mesenchymal stem cells，BMSCs）是目前研究最多、應(yīng)用最廣的種子細(xì)胞之一。它具有典型的干細(xì)胞特點(diǎn)，終身存在于骨髓和其他組織器官中，負(fù)責(zé)組織的修復(fù)和更新，而且具有多向分化潛能，在不同的誘導(dǎo)條件下可以分化成許多不同的組織［1］。

2.1.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞特點(diǎn) 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）具有多向分化潛能，在不同的誘導(dǎo)條件下可以分化成許多不同的組織，如骨組織、軟骨組織、脂肪組織、內(nèi)皮組織、肌肉組織等。由于BMSCs的自我復(fù)制和多向分化的能力，近年來在組織工程骨構(gòu)建過程中應(yīng)用廣泛。BMSCs取材方便、創(chuàng)傷小且易于從骨髓中分離及體外擴(kuò)增純化，不像滑膜、脂肪等來源的BMSCs原代培養(yǎng)需要酶消化預(yù)處理。骨髓BMSCs雖僅占有核細(xì)胞數(shù)的0.001%－0.01%，但始終穩(wěn)定保持分化成軟骨細(xì)胞的能力，是終身可用的軟骨前體細(xì)胞。骨髓BMSCs具有CD105（即TGF-β受體），細(xì)胞成軟骨潛能似與CD105表達(dá)有關(guān)。與滑膜、脂肪等來源的BMSCs相比，BMSCs標(biāo)志基因在平面培養(yǎng)時(shí)差異不明顯，而在三維高密度培養(yǎng)時(shí)基因差別顯著，有且只有BMSCs的軟骨分化才能獲得明顯的改善［2］。自體骨髓BMSCs不存在免疫排斥，且BMSCs體外基因轉(zhuǎn)染高并能穩(wěn)定高效表達(dá)外源基因等優(yōu)點(diǎn)［3］。

2.1.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞獲得 隨著對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞深入廣泛的研究，目前已建立了多種分離純化的方法，為其在組織工程和基因工程上的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。常用的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離與純化方法有：①密度梯度離心法。②貼壁細(xì)胞分離法。③ 流式細(xì)胞儀分選法。④磁珠分選法。

至今尚無明確的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞鑒定方法，但利用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的一些生物學(xué)特征、表面標(biāo)志物及特異性基因的表達(dá)，再借助一些實(shí)驗(yàn)技術(shù)，可基本達(dá)到區(qū)分它們的目的。關(guān)于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物的報(bào)道很多，但研究結(jié)論極不一致，尚缺乏單一明確的表面標(biāo)志物［4，5］。

2.2 相關(guān)的生物活性細(xì)胞因子的選擇

與BMSCs相關(guān)的細(xì)胞因子主要有轉(zhuǎn)化因子-β（TGF-β）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）、成纖維生長(zhǎng)因子（FGF）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）等。

2.2.1 轉(zhuǎn)化因子-β（TGF-β） 轉(zhuǎn)化因子-β（TGF-β）是當(dāng)前最強(qiáng)的細(xì)胞促生長(zhǎng)因子。研究表明，TGF-β可以明顯促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成，刺激Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達(dá)，增加成骨細(xì)胞數(shù)量。大多數(shù)離體研究表明TGF-β可增加成骨細(xì)胞分化標(biāo)志物，如堿性磷酸酶、I型膠原、骨粘連蛋白的表達(dá)，還可增加堿性磷酸酶水平。另外，TGF-β1能減少膠原酶轉(zhuǎn)錄并加速膠原酶mRNA降解，這有利于維持骨中的膠原基質(zhì)［6］。一些實(shí)驗(yàn)也說明了不同濃度的TGF-β1對(duì)BMSCs具有不同的誘導(dǎo)效率，10μg／L TGF-β1可能BMSCs向軟骨細(xì)胞分化的最佳誘導(dǎo)濃度［7，8］。

2.2.2 骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP） 骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone m0rphogenetic protein，BMP）是一組疏水性的酸性糖蛋白，屬于轉(zhuǎn)換生長(zhǎng)因子超家族。是目前唯一被確認(rèn)具有異位成骨能力的生長(zhǎng)因子。其中研究最多也是成骨活性最強(qiáng)的是BMP-2和BMP-7。Lin等［9］研究發(fā)現(xiàn)：骨形態(tài)發(fā)生蛋白可以促進(jìn)MSCs向成骨方向轉(zhuǎn)化。

2.2.3 胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1） 胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF-1）是一種強(qiáng)有力的合成代謝刺激因子，是目前已知的調(diào)節(jié)軟骨代謝和維持軟骨內(nèi)環(huán)境諸多因素中最關(guān)鍵的生長(zhǎng)因子之一。研究表明胰島素樣生長(zhǎng)因子1可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化，還可抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子p1引起的細(xì)胞外焦磷酸鹽的積聚，防止焦磷酸鈣結(jié)晶的形成和進(jìn)一步成骨，是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1重要的輔助因子［10］。

2.2.4 堿性成纖維生長(zhǎng)因子（bFGF） 堿性成纖維生長(zhǎng)因子（bFGF）是一種肝素粘合多肽，在人體組織中廣泛存在，具有多種生物活性，包括促進(jìn)毛細(xì)血管增殖、細(xì)胞有絲分裂，從而影響細(xì)胞的增殖和分化。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)bFGF可明顯促進(jìn)BMSCs的增殖并能增加傳代的次數(shù)［11］。研究顯示bFGF和地塞米松對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖與分化的影響，結(jié)果顯示1.0－10.0ng／ml的bFGF可促進(jìn)BMSCs的增殖，濃度再高則促增殖作用無明顯提高甚至下降。這說明bFGF對(duì)BMSCs的增殖有劑量依賴性［12］。

2.2.5 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF） 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）又稱血管通透因子（VPF）或（VAS）。近年來研究表明，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子對(duì)中胚層細(xì)胞分化有作用，可以使骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨分化。

2.2.6 多種生長(zhǎng)因子聯(lián)合應(yīng)用 軟骨生長(zhǎng)的微環(huán)境有很多生長(zhǎng)因子，不同的生長(zhǎng)因子相互影響，彼此形成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，軟骨生長(zhǎng)、代謝需要多種生長(zhǎng)因子共同參與。目前研究者關(guān)注多個(gè)因子的聯(lián)合應(yīng)用以及其他因素與因子間的相互作用。

Ozono［13］分別將bFGF與IGF、17β-雌二醇（E2）聯(lián)合應(yīng)用，結(jié)果表明聯(lián)合使用能更有效地促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨性分化。TGF-β1、BMP-2聯(lián)合作用更能促進(jìn) BMSCs向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化，分泌軟骨特異性基質(zhì)［14］。多個(gè)因子的聯(lián)合應(yīng)用可以更好地修復(fù)軟骨缺損使其成為當(dāng)今組織工程的研究熱點(diǎn)，但并非所有的生長(zhǎng)因子之間的組合都是有利的，研究發(fā)現(xiàn)胰島素樣生長(zhǎng)因子1、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β聯(lián)合應(yīng)用修復(fù)軟骨并沒有得到明顯的改善，機(jī)械強(qiáng)度也沒達(dá)到理想強(qiáng)度［21］。

2.3 支架材料的選擇

組織工程中支架材料即人工的細(xì)胞外基質(zhì)。理想的軟骨組織工程支架材料應(yīng)具有：① 良好的生物相容性，利于細(xì)胞貼附，無毒性，不引起炎性反應(yīng)，不能引起宿主的排異反應(yīng)。②可塑性和一定的力學(xué)強(qiáng)度：可預(yù)先制作成一定形狀并為新生組織提供一定強(qiáng)度的支撐，且可保持至新生組織具有自身生物力學(xué)特性。③良好的生物降解性：材料降解速率與種植入的細(xì)胞組織形成的速率匹配，組織再生后則被完全降解吸收，同時(shí)降解產(chǎn)物無毒，能及時(shí)排出體外。④具有三維立體多孔結(jié)構(gòu)且至少達(dá)90%大小合適的孔隙，為大量種子細(xì)胞的黏附、生長(zhǎng)、營(yíng)養(yǎng)、代謝等提供良好條件，同時(shí)還能讓血管長(zhǎng)入支架。⑤良好的表面活性：激活細(xì)胞特異基因表達(dá)，維持細(xì)胞表型正常表達(dá)。⑥價(jià)格低廉，來源廣泛，可以大量重復(fù)生產(chǎn)。目前與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合應(yīng)用得較多的支架材料有以下幾種。

2.3.1 多孔生物降解聚合物 多孔生物降解聚合物中較常用的是聚乳酸（PLA）、聚羥基乙酸（PGA）及其共聚物（PLGA）。其中，PLGA是目前應(yīng)用比較廣泛，具有低降解度和高藥物滲透性的特點(diǎn)，具有良好可吸收性的生物降解可植入高分子材料。有學(xué)者通過將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種到PLGA納米纖維支架上，發(fā)現(xiàn)兩周后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能持續(xù)分化成成骨細(xì)胞及成軟骨細(xì)胞［15］。

2.3.2 膠原 膠原是多種組織的主要成分和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，在體內(nèi)以膠原纖維的形式存在，其纖維狀結(jié)構(gòu)利于組織培養(yǎng)中細(xì)胞的黏附生長(zhǎng)繁殖。膠原不論是作為皮膚、骨胳替代品，生物工程膜，或組織培養(yǎng)系統(tǒng)支架，應(yīng)用都越來越廣泛。研究表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為種子細(xì)胞，復(fù)合膠原凝膠移植，修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損，確定良好效果。

2.3.3 殼聚糖 殼聚糖（chitosan，CS）通過甲殼素殼聚糖β－（1-4）聚-2-乙酰胺基-D-葡糖脫乙?；纬?，具有良好的生物相容性、可降解性，近年來成為生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域研究較多的材料之一。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞放在殼聚糖－珊瑚復(fù)合支架上培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的貼附、增殖和成骨分化能力都優(yōu)于單純的殼聚糖支架［16］。

2.3.4 種子細(xì)胞-支架復(fù)合物 BMSCs復(fù)合三維PLGA支架應(yīng)用顯示：用兔自體骨髓血分離出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞種植于三維PLGA支架，共同體外培養(yǎng)2周后移植修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損。術(shù)后4周，骨軟骨缺損被新形成的光滑白色組織所填充，但是邊緣與周圍正常軟骨組織有顏色不同的界限。組織學(xué)觀察有培養(yǎng)的細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)。術(shù)后12周，缺損處填充以光滑、白色并有光澤的組織，類似完整的關(guān)節(jié)軟骨邊緣與正常軟骨組織模糊。組織學(xué)觀察有再生的類透明軟骨和大量細(xì)胞外基質(zhì)［17］。

2.3.5 種子細(xì)胞-支架-細(xì)胞因子復(fù)合物 將攜帶 TGF-β1凝膠微球（MS-TGFβ1）的多孔水凝膠-軟骨素-透明質(zhì)酸支架復(fù)合自體BMSCs培養(yǎng)后修復(fù)兔全層關(guān)節(jié)軟骨缺損，通過觀察，再生軟骨細(xì)胞在形態(tài)學(xué)、整合性、與軟骨下骨的連續(xù)性及再生軟骨層的厚度方面均獲得了更好的修復(fù)［18］。

2.4 物理環(huán)境影響

同時(shí)力學(xué)環(huán)境也起到一定促進(jìn)分化作用。適當(dāng)?shù)膭?dòng)態(tài)壓縮和由纖維蛋白與彈性PLCL混合成的支架三維環(huán)境下，可以促進(jìn)BMSCs分化成軟骨細(xì)胞，保持其表型和促進(jìn)聚糖的產(chǎn)生，從而改善軟骨組織在體內(nèi)和體外的質(zhì)量［19］。振動(dòng)拉伸載荷的差異能夠影響三維纖維蛋白凝膠對(duì)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞亞群的構(gòu)造，暴露于特定拉伸載荷的細(xì)胞被分成了向深層區(qū)域發(fā)展和淺層的軟骨細(xì)胞，這可能表明了細(xì)胞對(duì)新的力學(xué)環(huán)境的適應(yīng)。單一周期（40min，2 000με）的機(jī)械張力提高其堿性磷酸酶的活性，顯著上調(diào)TGF-β和IGF-Ⅱ的表達(dá)，還可促進(jìn)BMSCs增殖［20］。目前，已證實(shí)了應(yīng)力刺激確實(shí)有利于BMSCs向軟骨細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，但在體外誘導(dǎo)中最佳的施力大小，施力方式及作用時(shí)間等尚不明確，需要進(jìn)一步研究探索［21］。

2.5 基因轉(zhuǎn)染技術(shù)

用基因芯片技術(shù)建立妊娠胎鼠肢芽軟骨發(fā)育過程的基因表達(dá)譜，分析MAPK信號(hào)通路中bFGF在軟骨發(fā)育過程中的基因表達(dá)規(guī)律，發(fā)現(xiàn)FGF能夠啟動(dòng)MAPK信號(hào)通路從而促進(jìn)軟骨形成。bFGF質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs后促進(jìn)BMSCs的增殖，細(xì)胞有向軟骨細(xì)胞分化趨勢(shì)。

龍華等［22］以腺病毒AdEasy為基因轉(zhuǎn)移載體，制備攜帶轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和骨形態(tài)發(fā)生蛋白7基因的高滴度腺病毒感染兔間充質(zhì)干細(xì)胞與骨基質(zhì)明膠（BMG）支架相復(fù)合體外構(gòu)建組織工程化軟骨，移植修復(fù)同種異體兔關(guān)節(jié)軟骨缺損，經(jīng)組織染色和電鏡觀察可見前體軟骨細(xì)胞大量增殖，在體移植修復(fù)實(shí)驗(yàn)組新生組織為類透明軟骨，修復(fù)效果明顯優(yōu)于各對(duì)照組。得出間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)攜帶轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和骨形態(tài)發(fā)生蛋白7基因的腺病毒感染后，體外能向軟骨細(xì)胞作定向分化，可用于制備組織工程化軟骨，使提高關(guān)節(jié)軟骨缺損的修復(fù)質(zhì)量成為可能。

基因治療現(xiàn)在還處在實(shí)驗(yàn)探索階段，還存在許多問題如安全性能問題，基因調(diào)控性差，轉(zhuǎn)染率較低等問題，但隨著對(duì)軟骨細(xì)胞損傷機(jī)制研究深入，基因轉(zhuǎn)染技術(shù)的改進(jìn)，基因治療將會(huì)在軟骨細(xì)胞修復(fù)中廣泛應(yīng)用。

3 小結(jié)及展望

以干細(xì)胞工程為代表的現(xiàn)代組織工程學(xué)是近年來迅猛發(fā)展的新領(lǐng)域，干細(xì)胞工程作為組織工程的前沿研究，對(duì)未來的組織器官修復(fù)與替代具有極其重要的作用和深遠(yuǎn)的影響。盡管還有許多問題需要進(jìn)一步研究，但骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞使關(guān)節(jié)軟骨缺損的修復(fù)已跨入了臨床應(yīng)用干細(xì)胞治療的時(shí)代，有理由相信隨著研究的深入和應(yīng)用的推廣，一定會(huì)將組織工程化軟骨更好的應(yīng)用于臨床。

［1］Kassem M，Kristiansen M，AbdaUah BM.Mesenchymal stem cells：cell biology and potential use intherapy［J］.Basic Clin Pharmacol Toxico1，2004，5：209.

［2］胡蘊(yùn)玉.現(xiàn)代骨科基礎(chǔ)與臨床［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：168.

［3］Bosnakovsk lD，MIzuno M，Kim G，et al.Gene expression profile of bovinebo ne marrow mesenchymaI stem celI during spo ntaneous chondrogenic differentiation in peget culture system［J］.Jpn Vet Res，2006，4：127.

［4］馬 力，劉大軍，李德天，等.不同分離方法及培養(yǎng)條件對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及生物學(xué)特性的影響［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2008，12（38）：7401.

［5］Wagner W，wein F，Seekinger A，et al.Comparative characteristics ofmesenehymal stem cells from human bone marrow，adipose tissue，andumbilical cord blood［J］.Exp Hematol，2005，33（11）：1402.

［6］Wang X，Hisha H，Taketani S，et al.Characterization of mesenchyrmalstem cells isolated from mouse fetal bone marrow［J］.Stem Cells，2006，24（3）：482.

［7］王運(yùn)濤，吳小濤，鄭啟新，等.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1／Smad3促進(jìn)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究［J］.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2007，7（20）：689.

［8］鄧 進(jìn)，彭吾訓(xùn)，王 蕾，等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞二維培養(yǎng)條件下向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（16）：2340.

［9］Lin L，Shen Q，Wei X，et al.Comparis onofosteo genicpotentialso fBMP4ransduced stem cells from auto logous bone marro wand fattissueinar abbit model of calvarial defects［J］.Calcif Tissue Int，2009，85（1）：55.

［10］Madry H，Kaul G，Cucchiarini M，et al.Enhanced repairof articular cartilage defects in vivo by transplanted ehondrocytesover expressing insulin-like growth factor I（IGF-I）［J］.Gene Ther，2005，12（5）；117I.

［11］鄭有華，蔣柳宏，張志光.等.轉(zhuǎn)染堿性成纖維生長(zhǎng)因子基因的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在珊瑚骨表面生長(zhǎng)狀況（英文）［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，（21）：4105.

［12］俞 猛，夏仁云，高 飆，等.bFGF和地塞米松對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖與分化的影響［J］.中國(guó)康復(fù)，2006，21（1）：12.

［13］Ozono S，F(xiàn)ujita T，Matsuo M，et al.Co-treatmen twith basic fibrob last growth factor and 17beta-estradio lin the presence of dexamethasone accelerates bone formation by rat bone marrow stromal cell culture［J］.Nihon Hotetsu Shika Gakkai Zasshi，2008，52（3）：366.

［14］張清林，呂惠成，吳一民.TGF-β1、BMP-2聯(lián)合誘導(dǎo) BMSCs向軟骨細(xì)胞分化的體外研究［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14（24）：4371.

［15］Xin X J，Hussain M，Mao J J.Continuing differentiation of human mesenchymal stem cells and induced chondrogenic and osteogenic lineages in electrospun PLGA nanofiber scaffold［J］.Biomaterials，2007，28：316.

［16］Gravel M，Gross T，Vago R，et al.Responses of mesenchymalstem cell to chitosan-coralline composites microstructured using coralline as gas forming agent［J］.Biomaterials，2006，27：1899.

［17］Uematsu K，Hattori K，Ishimoto Y，et al.Cartilage regeneration as ingmesenchymal stem cell sathree dimensi on alpoly lacticglycolicacid（PLGA）scafold［J］.Biomaterials，2005，20：4273.

［18］Fan H，Hu Y，Qin L，et al.Porous gelatin-chondmitin-hyalumnatetri-co po lymer scaf old containing microspheres loaded with TGFbetalinduces diferentiation of mesenchymal stem cells in vivo for enhan-cing cartilage repair［J］.J Biomed Mater Res A，2006，4：785.

［19］JungY，KimSH，KimYH，et al.The effects of dynamic and threedimensional environments on chondrogenic differentiation of bone marrow stromal cells［J］.Biomed Mater，2009，4（5）：55.

［20］Vanderploeg EJ，Wilson CG，Levenston ME.Articular chondrocytes derived from distinct tissue zones differentially respond to in vitro Oscillatory tensile loading［J］.Osteoarthritis Cartilage，2008，16（10）：1228.

［21］韓立赤，戚 孟，春孫紅，等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)機(jī)械張應(yīng)力刺激的反應(yīng)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子－β和胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅱ的基因表達(dá)［J］.華西口腔醫(yī)學(xué)雜志，2009，27（4）：381.

［22］龍 華，袁 華，馬保安，等.腺病毒介導(dǎo)TGFB.1及BMP.7基因共表達(dá)感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損［J］.中國(guó)骨與關(guān)節(jié)損傷雜志，2008，23（6）：471.

1007－4287（2012）02－0373－03

2011－04－01）