劉 翔，郝 瓊，郭邦成，閆立群，謝明英，梁俊容，景懷琦

沙門(mén)氏菌是一種人獸共患的腸道病原菌，至今已有2 523種血清型被發(fā)現(xiàn)［1］，廣泛分布于自然界，寄生于人和動(dòng)物體內(nèi)，常見(jiàn)于污染的食品和污水等外環(huán)境中，是人和動(dòng)物常見(jiàn)的病原菌，可引起人類傷寒、副傷寒和食物中毒等許多疾病，直接影響工農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)發(fā)展，使全球遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在我國(guó)，沙門(mén)氏菌食物中毒多年來(lái)居細(xì)菌性食物中毒的首位［2］。在寧夏地區(qū)，侯在文等［3］人曾對(duì)1982－1987年腹瀉病人、食品、污水及家禽家畜中分離沙門(mén)氏菌進(jìn)行過(guò)菌型分布調(diào)查，結(jié)果顯示鼠傷寒沙門(mén)氏菌是當(dāng)時(shí)寧夏地區(qū)的流行菌株，之后再無(wú)該地區(qū)沙門(mén)氏菌流行特征的深入報(bào)道。特對(duì)2007－2011年寧夏地區(qū)分離的沙門(mén)氏菌進(jìn)行血清型研究，并用PFGE基因分型方法對(duì)流行菌株進(jìn)行基因分型，揭示寧夏不同地區(qū)沙門(mén)氏菌的分布特征與流行菌株之間的同源性，為控制沙門(mén)氏菌污染、暴發(fā)食物中毒提供依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 菌株來(lái)源 56株沙門(mén)氏菌來(lái)源于2007－2011年寧夏食源性致病菌監(jiān)測(cè)及腹瀉病監(jiān)測(cè)工作，菌株的分離操作按照各年度相應(yīng)的監(jiān)測(cè)方案進(jìn)行。

1．1．2 培養(yǎng)基及試劑 主要分離培養(yǎng)基購(gòu)自廣東環(huán)凱生物技術(shù)有限公司；Api 20E生化鑒定條購(gòu)自法國(guó)梅里埃公司；沙門(mén)氏菌屬診斷血清購(gòu)自寧波天潤(rùn)藥業(yè)技術(shù)公司；SDS、Tris Base、EDTA、硼酸購(gòu)自上海生工生物公司；蛋白酶K和限制性內(nèi)切酶XbaⅠ購(gòu)自大連寶生物工程有限公司；SeaKem Glod Agarose購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1．2 方法

1．2．1 菌株鑒定及血清學(xué)測(cè)定 所有沙門(mén)氏菌株均經(jīng)過(guò)Api 20E鑒定，再依據(jù)沙門(mén)氏菌屬Kauffmann－White－Le Minor抗原表用沙門(mén)氏菌屬診斷血清確定血清型。

1．2．2 脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型（PFGE） 參照中國(guó)細(xì)菌性傳染病分子分型實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)（PulseNet China）的沙門(mén)氏菌PFGE分子分型方法，用SeaKem Glod Agarose將沙門(mén)氏菌包埋、XbaI酶切，把得到的限制性DNA片段用Chef Mapper進(jìn)行脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型，最后將成像結(jié)果用BioNu－merics（5．1）軟件聚類分析。

2 結(jié) 果

2．1 不同地區(qū)沙門(mén)氏菌血清型分布 56株沙門(mén)氏菌分為14種血清型，以腸炎沙門(mén)氏菌為主，占所有菌株數(shù)的58．93%（33／56）；其次為德?tīng)柋壬抽T(mén)氏菌、沙門(mén)氏菌Ⅱ和鼠傷寒沙門(mén)氏菌，均占總菌株數(shù)的5．36%（3／56）；其余為奧利翁沙門(mén)氏菌、斯坦利沙門(mén)氏菌等10個(gè)血清型，在寧夏地區(qū)均不常見(jiàn)，共占總菌株數(shù)的25%（14／56）。

5城市中，銀川市檢出沙門(mén)氏菌最多，占所有菌株數(shù)的73．21%（41／56），依次為吳忠市、中衛(wèi)市、石嘴山市和固原市。銀川市沙門(mén)氏菌呈多樣性，檢出11種血清型；中衛(wèi)市和吳忠市，各檢出3種血清型；石嘴山市和固原市各檢出1種血清型。除固原市之外的4市均以腸炎沙門(mén)氏菌為主，占到各自菌株數(shù)的40%以上，見(jiàn)表1。

表1 寧夏不同地區(qū)不同來(lái)源沙門(mén)氏菌血清型分布Tab．1 The serotype of Salmonellafrom different regions of Ningxia

2．2 不同分離來(lái)源沙門(mén)氏菌分布 食品中沙門(mén)氏菌共檢出9種血清型，以腸炎沙門(mén)氏菌（64．5%）、奧里翁沙門(mén)氏菌（6．5%）、斯坦利沙門(mén)氏菌（6．5%）、豬霍亂沙門(mén)氏菌（6．5%）為主，其余5種血清型各檢出1株；病人中沙門(mén)氏菌共檢出6種血清型，以腸炎沙門(mén)氏菌（59．1%）、鼠傷寒沙門(mén)氏菌（13．6%）、沙門(mén)氏菌Ⅱ（13．6%）為主，其余3種血清型各檢出1株；環(huán)境中僅檢出德?tīng)柋壬抽T(mén)氏菌和鴨沙門(mén)氏菌各1株。

腸炎沙門(mén)氏菌在食品和病人中檢出，且構(gòu)成比較高；德?tīng)柋壬抽T(mén)氏菌在病人和環(huán)境中檢出；鴨沙門(mén)氏菌在食品和環(huán)境中檢出；鼠傷寒沙門(mén)氏菌、沙門(mén)氏菌Ⅱ、羅森沙門(mén)氏菌和傷寒沙門(mén)氏菌僅在病人中檢出；奧利翁沙門(mén)氏菌、斯坦利沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌、阿貢納沙門(mén)氏菌、巴雷利沙門(mén)氏菌、山夫登堡沙門(mén)氏菌僅在食品中檢出，見(jiàn)表1。

2．3 主要沙門(mén)氏菌流行菌株基因特征 在56株沙門(mén)氏菌中腸炎沙門(mén)氏菌占到了58．93%（33／56），共分為11個(gè)PFGE帶型，各菌株基因同源性在60%～100%，依次命名為SALX01001到SALX01011，其中優(yōu)勢(shì)帶型SALX01004有21株，占63．64%（21／33）；其次 SALX01008、SALX01009型各有2株，分 別 各 占6．06% （2／33）；其 余 SALX01001、SALX01002、SALX01003、SALX01005、SALX01006、SALX01007、SALX01010、SALX01011型各1株，分別各 占 3．03% （1／33）。 帶 型 SALX01001 到SALX01009聚類相似性在90%以上，涵蓋了該實(shí)驗(yàn)菌株數(shù)的93．94%（31／33），按照 Tenover等［4］提出的菌株同源性判別標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為屬于同一克隆系。帶型SALX01010和SALX01011各有1株，與上一克隆系親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，僅占實(shí)驗(yàn)菌株數(shù)的6．06%（2／33），見(jiàn)圖1。

圖1 33株腸炎沙門(mén)氏菌PFGE帶型聚類圖Fig．1 Clustering map for PFGE patterns onf33strains of Salmonella

3 討 論

分析表明，寧夏地區(qū)病人和食品中的流行沙門(mén)氏菌血清型已由侯在文等［3］1990年報(bào)道的鼠傷寒沙門(mén)氏菌轉(zhuǎn)變?yōu)槟c炎沙門(mén)氏菌。而張毅等［5］研究2010上海市食源性沙門(mén)菌的血清型主要為鼠傷寒沙門(mén)氏菌，這表明沙門(mén)氏菌的血清型分布有明顯的年代變遷和區(qū)域差異。銀川市沙門(mén)氏菌檢出最多，具有多樣性；固原市檢出最少，無(wú)多樣性，是寧夏地區(qū)唯一腸炎沙門(mén)氏菌沒(méi)有流行的地區(qū)。這可能與銀川市是寧夏首府城市，人口密集，對(duì)外交流合作較多，而固原市地處偏遠(yuǎn)，經(jīng)濟(jì)較為落后，且交通欠發(fā)達(dá)有一定的關(guān)系。

鼠傷寒沙門(mén)氏菌、沙門(mén)氏菌Ⅱ、羅森沙門(mén)氏菌和傷寒沙門(mén)氏菌僅在病人中檢出；奧利翁沙門(mén)氏菌、斯坦利沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌、阿貢納沙門(mén)氏菌、巴雷利沙門(mén)氏菌、山夫登堡沙門(mén)氏菌僅在食品中檢出，說(shuō)明不同時(shí)間、不同地區(qū)、不同來(lái)源的沙門(mén)氏菌血清型的構(gòu)成有較大差異。

PFGE分型分辨力高、重復(fù)性好，為確定菌株之間的親緣關(guān)系提供了可靠的技術(shù)手段，被認(rèn)為是細(xì)菌基因分型的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”［1］。對(duì)病人和食品中分離的33株腸炎沙門(mén)氏菌進(jìn)行PFGE分型，得到同源性在60%～100%的11個(gè)帶型，其PFGE優(yōu)勢(shì)帶型SALX01004有21株，同源性為100%，分別來(lái)自我區(qū)4個(gè)市不同年份的病人和食品，推斷病人和食品中長(zhǎng)期存在共同的沙門(mén)氏菌污染來(lái)源，而我區(qū)不同地區(qū)多次發(fā)生的腸炎沙門(mén)氏菌引起的食物中毒也側(cè)面印證了這一點(diǎn)。提醒大家在日常生活中要養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，食物要洗凈、煮熟煮透再食用，同時(shí)也提醒有關(guān)政府部門(mén)加強(qiáng)對(duì)食品從源頭到餐桌的過(guò)程監(jiān)管，從源頭上防止病人糞便對(duì)食品的污染。

［1］楊保偉，張秀麗，曲東，等．2007—2008年陜西部分零售畜禽肉沙門(mén)氏菌血清型和基因型［J］．微生物學(xué)報(bào)，2010，50（5）：654－660．

［2］朱超，許學(xué)斌．沙門(mén)氏菌屬血清型診斷［M］．上海：同濟(jì)大學(xué)出版社，2009：1－2．

［3］侯在文，董塞明．寧夏地區(qū)沙門(mén)氏菌菌型分布及藥敏試驗(yàn)［J］．寧夏醫(yī)學(xué)雜志，1990，12（4）：236－238．

［4］Tenover FC，Arbeit RD，Goering RV，et al．Interpreting chromosomal DNA restriction patterns produced by pulsed－field gel electrophoresis：criteria for bacterial strain typing［J］．J Clin Microbiol，1995，33（9）：2233－2239．

［5］張毅，陳欣欽．2010年上海市食源性沙門(mén)菌菌型分布和藥敏分析以及快速檢測(cè)方法的建立［J］．現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，（20）：3938－3941．