不同影響因素對(duì)熱原實(shí)驗(yàn)中兔篩選的影響

岳 敏，李海濱，吳麗紅，李梓茜，顧為望

（南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣州 510515）

細(xì)菌內(nèi)毒素等致熱物質(zhì)進(jìn)入人體后可引起發(fā)熱反應(yīng)，嚴(yán)重者可導(dǎo)致休克或死亡。熱原檢測(cè)法則是將一定量的供試品，靜脈注入到家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察家兔體溫升高的情況，以判定試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定［1］。該實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)制品中熱原的一種經(jīng)典有效的方法，至今仍被許多國(guó)家認(rèn)為是熱原檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但影響家兔熱原質(zhì)檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素很多，如家兔的健康狀況、遺傳質(zhì)量、飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)環(huán)境、檢測(cè)儀器、實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)等。本文就我中心2009年1月～2010年12月的熱原實(shí)驗(yàn)中的篩選合格率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，來考察不同影響因素對(duì)熱原實(shí)驗(yàn)中兔篩選的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

普通級(jí)新西蘭兔，南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（SCXK〔粵〕2006-0015）。性別不限，體重（1.7～3.0）kg。

1.2 環(huán)境條件

清潔級(jí)飼養(yǎng)環(huán)境，實(shí)驗(yàn)室溫度每次均控制在17.0～25.0℃，濕度控制在40～70％。且飼養(yǎng)室與熱原實(shí)驗(yàn)室為相同屏障環(huán)境。使用許可證號(hào)：〔SYXK（粵）2006-0074〕。

1.3 檢測(cè)儀器

ZRY-2D智能熱原儀，天津大學(xué)無線電廠產(chǎn)品。

1.4 檢測(cè)方法

將測(cè)溫探頭插入實(shí)驗(yàn)用兔肛內(nèi)，深度約6 cm，測(cè)量時(shí)間不得少于1.5 min。初次篩選時(shí)，不注射藥物，每隔30min測(cè)量一次體溫，共測(cè)8次，測(cè)量結(jié)果均在38.0～39.6℃，且最高體溫和最低體溫差不超過0.4℃者判為初篩合格，可用于熱原實(shí)驗(yàn)。二次篩選是指進(jìn)行熱原實(shí)驗(yàn)時(shí)，注射藥物前每隔30 min測(cè)量體溫一次，一般測(cè)量?jī)纱?，兩次體溫之差不超過0.2℃且兩次體溫均在38.0～39.6℃，判為二次篩選合格，可用于當(dāng)日熱原實(shí)驗(yàn)，以此兩次體溫的平均值作為該兔的基礎(chǔ)體溫。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)不同影響因素條件下新西蘭兔的初篩情況和二次篩選情況進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 不同季節(jié)的新西蘭兔初次篩選合格率和二次篩選合格率的比較

統(tǒng)計(jì)結(jié)果：不同季節(jié)的新西蘭兔初篩結(jié)果之間有顯著性差異P＜0.05，以7～9月合格率最高；不同季節(jié)的新西蘭兔二次篩選結(jié)果之間有顯著性差異P＜0.05，以 1～3月合格率最高（見表1）。

2.2 不同體重值的新西蘭兔初次篩選合格率和二次篩選合格率的比較

統(tǒng)計(jì)結(jié)果：

不同體重值的新西蘭兔初篩結(jié)果之間有顯著性差異P＜0.05，以1.7～2.0 kg重的新西蘭兔合格率最高；不同體重值的新西蘭兔二次篩選結(jié)果之間無顯著性差異P＞0.05（見表2）。

表1 不同季節(jié)對(duì)新西蘭兔初次篩選和二次篩選結(jié)果的影響Tab.1 Effect on the 1st screening and the 2nd screening of New Zealand Rabbits by different seasons

表2 不同體重值對(duì)新西蘭兔初次篩選和二次篩選結(jié)果的影響Tab.2 Effect on the 1st screening and the 2nd screening of New Zealand Rabbits by different body weight

2.3 不同性別的新西蘭兔初次篩選合格率和二次篩選合格率的比較

統(tǒng)計(jì)結(jié)果：

不同性別的新西蘭兔初篩結(jié)果之間有顯著性差異P＜0.05，以雄性的新西蘭兔合格率較高；不同性別的新西蘭兔二次篩選結(jié)果之間無顯著性差異P＞0.05（見表3）。

2.4 不同室溫條件下的新西蘭兔初次篩選合格率和二次篩選合格率的比較

統(tǒng)計(jì)結(jié)果：

在不同室溫的條件下，新西蘭兔初篩結(jié)果之間無顯著性差異P＞0.05，新西蘭兔二次篩選結(jié)果之間有顯著性差異 P＜0.05，以室溫條件為22.1～23.0時(shí)新西蘭兔的二次篩選率最高（見表4）。

2.5 不同濕度條件下的新西蘭兔初次篩選合格率和二次篩選合格率的比較

統(tǒng)計(jì)結(jié)果：

在不同濕度的條件下，新西蘭兔的初篩結(jié)果和二次篩選結(jié)果均有顯著性差異 P＜0.05和 P＜0.05，以濕度在61～70％時(shí)新西蘭兔的初篩合格率和二次篩選合格率最高（見表5）。

表3 不同性別對(duì)新西蘭兔初次篩選和二次篩選結(jié)果的影響Tab.3 Effect on the 1st screening and the 2nd screening of New Zealand Rabbits by different sex

表4 不同室溫對(duì)新西蘭兔初次篩選和二次篩選結(jié)果的影響Tab.4 Effect on the 1st screening and the 2nd screening of New Zealand Rabbits by different room temperature

表5 不同濕度對(duì)新西蘭兔初次篩選和二次篩選結(jié)果的影響Tab.5 Effect on the 1st screening and the 2nd screening of New Zealand Rabbits by different humidity

3 結(jié)論

初次篩選結(jié)果中，不同季節(jié)、體重值、性別、濕度條件下都有顯著性差異，篩選時(shí)間在7～9月、體重值為1.7～2.0 kg、雄性的新西蘭兔、在濕度為61～70％的條件下初次篩選率較高；在二次篩選結(jié)果中，不同季節(jié)、室溫、濕度條件下都有顯著性差異，篩選時(shí)間在1～3月、在室溫為22.1～23.0℃、濕度為61～70％的條件下新西蘭兔的二次篩選率較高。

4 討論

4.1由表1可以看出不同季節(jié)的新西蘭兔的初次篩選合格率和二次篩選合格率有顯著性差異。本次實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示初篩時(shí)7～9月合格率最高，而二次篩選時(shí)1～3月合格率最高。杜穎等［2］也發(fā)現(xiàn)，家兔體溫是隨季節(jié)的改變而改變的，夏季的正常體溫高于冬季。本實(shí)驗(yàn)中初次篩選合格率較高的也是在夏季，但二次篩選合格率較高是在冬、春季?？赡苁怯捎诩彝媒?jīng)過初次篩選后，在第二次篩選時(shí)同樣還受到了其他如實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度等因素的制約。

4.2《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版第三部中規(guī)定供試家兔的體重為1.7～3.0 kg［1］，由表2實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)在初次篩選時(shí)，1.7～2.0 kg重的新西蘭兔合格率最高。藥典要求未曾用于熱原檢查的家兔，應(yīng)在檢查供試品前3～7日內(nèi)預(yù)測(cè)體溫，進(jìn)行初次篩選，通過初次篩選的家兔還需要進(jìn)行二次篩選后才能做為注射藥物的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供使用，所以在初次篩選時(shí)，需要挑選體重較輕的家兔。

4.3徐文瑜等［3］通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)雌性家兔在基礎(chǔ)體溫和體溫波動(dòng)幅度上都高于雄性家兔，且穩(wěn)定性較雄性差。與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致，由表3可以看出雄性家兔的初次篩合格率較高?？赡苁怯捎诖菩詣?dòng)物較雄性動(dòng)物對(duì)外界刺激的反應(yīng)更為敏感，注射藥物和人員操作過程的產(chǎn)生一些刺激導(dǎo)致新西蘭兔緊張，引起了交感神經(jīng)興奮，從而導(dǎo)致腎上腺素和去甲腎上腺素分泌增加、代謝水平升高而使體溫升高［4］。所以在實(shí)驗(yàn)過程中，選擇雄性新西蘭兔用于實(shí)驗(yàn)，效果更為理想。

4.4實(shí)驗(yàn)室溫度是熱原實(shí)驗(yàn)中最重要的環(huán)境條件之一。室溫過低或過高都會(huì)對(duì)家兔體溫有不同程度的影響。任珺等［5］和岳敏等［6］都發(fā)現(xiàn)不同室溫對(duì)家兔體溫的變化有影響，在不同的室溫條件下，新西蘭兔的篩選合格率和基礎(chǔ)體溫均受到影響。本實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)同樣也發(fā)現(xiàn)二次篩選過程中，由表4可見室溫條件為22.1～23.0℃時(shí)新西蘭兔的二次篩選率最高。所以，在實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境溫度范圍，達(dá)到動(dòng)物高篩選、高利用率的目的。

4.5新西蘭兔除了對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的溫度非常敏感外，還對(duì)其生長(zhǎng)環(huán)境中的濕度變化非常敏感，如果實(shí)驗(yàn)室濕度過高時(shí)，實(shí)驗(yàn)兔易患腳皮炎［7］，從而影響熱原的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)濕度在61～70％時(shí)新西蘭兔的初篩合格率和二次篩選合格率最高（見表5）。

4.6除了上述提到的相關(guān)的影響因素外，熱原實(shí)驗(yàn)還受到許多其他因素的影響，如家兔本身的健康狀況、遺傳質(zhì)量等。由于結(jié)果是受到多個(gè)影響因素的綜合制約，只有找到各種影響因素結(jié)合最佳點(diǎn)，才能達(dá)到理想的實(shí)驗(yàn)效果。尋找這一最佳點(diǎn)，還需要未來的實(shí)驗(yàn)中大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)證明和深入研究。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2005版三部）.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄77-78.

［2］杜穎，徐文瑜，任珺，等.熱原檢查用家兔正常體溫的統(tǒng)計(jì)分析［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，2003，20（1）：17-19.

［3］徐文瑜，任珺，杜穎，等.家兔性別與體溫變化對(duì)熱原檢測(cè)結(jié)果的影響［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，2006，23（3）：22-25.

［4］呂式瑗.護(hù)理學(xué)基礎(chǔ).上海：光明日?qǐng)?bào)出版社，1996，1：86.

［5］任珺，徐文瑜，杜穎，等.室溫對(duì)家兔體溫的影響［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2007，24（2）：21-23.

［6］岳敏，范沛，巫瑋，等.室溫對(duì)熱原實(shí)驗(yàn)中兔篩選的影響［J］.科技信息，2010，24：25-27.

［7］杜穎，李秀記，譚德講.實(shí)驗(yàn)兔腳皮炎與相對(duì)濕度的相關(guān)性及對(duì)熱原篩選實(shí)驗(yàn)的影響分析［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（8）：21-24.