劉小娟

[摘要] 1.菌種保藏原理：菌種保藏的方法很多，但原理大同小異。2.菌種保藏的方法3.液體石蠟保藏法。然后用無菌操作的方法把液體石蠟注入待保藏的斜面試管中。4.沙土管保藏法。5.濾紙片保藏法。取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）濾紙，剪成4×0.8cm的小紙條，平鋪在培養(yǎng)皿中用紙包裹進(jìn)行滅菌（1kg/cm2，30min）。將載有孢子的濾紙條放入保藏試管中，再將保藏試管放入干燥器中1-2d，除去濾紙水分，使濾紙水分含量達(dá)2%左右，然后低溫保藏。（1）麥粒保藏法：（2）麩曲保藏法。1拌勻，裝入小試管，每管約裝1/3高度，加棉塞用紙包扎，高壓滅菌（1.5kg/cm2，30min），經(jīng)無菌檢查合格后備用，將生長(zhǎng)在斜面培養(yǎng)基上的健壯菌種，移種至無菌麩曲管中，移種時(shí)注意盡管搗勻小試管中的麩皮，呈疏松狀態(tài)，在適溫下培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿麩皮為止，將麩曲小管置干燥器中，在低溫或適溫下保藏。（3）生理鹽水保藏法。

[關(guān)鍵詞] 食用菌；菌種；保藏技術(shù)

一、菌種保藏原理

菌種保藏的方法很多，但原理大同小異。首先要挑選優(yōu)良純種。利用微生物的孢子、芽孢及營(yíng)養(yǎng)體；其次，根據(jù)其生理、生化性，人為創(chuàng)造低溫、干燥或缺氧等條件，抑制微生物的代謝作用，使其生命活動(dòng)降低到極低的程度或處于休眠狀態(tài)，從而延長(zhǎng)菌種生命以及使菌種保持原有的性狀，防止變異。

二、菌種保藏的方法

1.低溫定期移植保藏法

將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，適溫培養(yǎng)，當(dāng)菌絲健壯地長(zhǎng)滿斜面時(shí)取出，放在3-5℃低溫干燥處或4℃冰箱、冰柜中保藏，每隔4-6個(gè)月時(shí)間移植轉(zhuǎn)管一次，具體應(yīng)根據(jù)菌種特性決定。保藏時(shí)要注意環(huán)境溫度不能太高，以防霉菌通過棉塞進(jìn)入管內(nèi)。

2.液體石蠟保藏法

取化學(xué)純液體石蠟（要求不含水分、不霉變）裝于三角瓶中加棉塞并包紙，在1kg/cm2壓力下滅菌1h，再放入40℃恒溫箱中數(shù)天，以蒸發(fā)其中水分，至石蠟油完全透明為止。將處理好的石蠟油移接在空白斜面上，28-30℃下培養(yǎng)2-3d，證明無雜菌生長(zhǎng)方可使用。然后用無菌操作的方法把液體石蠟注入待保藏的斜面試管中。

3.沙土管保藏法

取河沙用水浸泡洗滌數(shù)次，過60目篩除去粗粒，再用10%鹽酸浸泡2-4h，除去其中有機(jī)物質(zhì)，再用水沖洗至流水的pH達(dá)到中性，烘干備用。同時(shí)取貧脊土或菜園土用水浸泡，使呈中性，沉淀后棄去上清液，烘干碾細(xì)，用100目篩子過篩，將處理好的沙與土以（2-4）：1混勻，用磁鐵吸出其中的鐵質(zhì)，然后分裝小試管或安瓿內(nèi)，每管裝量0.5-2g，塞棉塞，用紙包扎滅菌（1.5kg/cm2，1h），再干熱滅菌（160℃，2-3h）1-2次，進(jìn)行無菌檢驗(yàn)，合格后使用。

4.濾紙片保藏法

取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）濾紙，剪成4×0.8cm的小紙條，平鋪在培養(yǎng)皿中用紙包裹進(jìn)行滅菌（1kg/cm2，30min）。采用鉤懸法收集孢子，讓孢子落在濾紙條上。將載有孢子的濾紙條放入保藏試管中，再將保藏試管放入干燥器中1-2d，除去濾紙水分，使濾紙水分含量達(dá)2%左右，然后低溫保藏。

5.自然基質(zhì)保藏法

（1）麥粒保藏法：取無癟粒、無雜質(zhì)的小麥淘洗干凈，浸泡12-15h，加水煮沸15min，繼續(xù)熱浸15min，使麥粒脹而不破，瀝干水分?jǐn)傞_晾曬，使麥粒的含水量在25%左右。將碳酸鈣、石膏拌入熟麥粒中（麥粒、碳酸鈣、石膏比例為10kg：133g：33g），拌和均勻后裝入試管中，每管約2-3g，然后清洗試管，塞棉塞，滅菌1.5（1.5kg/cm2，2h），經(jīng)無菌檢查合格后備用，試管基質(zhì)冷卻后接種，適溫培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿基質(zhì)后用石蠟涂封棉塞，放低溫保藏。2年左右轉(zhuǎn)接一次。

（2）麩曲保藏法。取新鮮麩皮，過60目篩除去粗粒。將麩皮和自來水按1：1拌勻，裝入小試管，每管約裝1/3高度，加棉塞用紙包扎，高壓滅菌（1.5kg/cm2，30min），經(jīng)無菌檢查合格后備用，將生長(zhǎng)在斜面培養(yǎng)基上的健壯菌種，移種至無菌麩曲管中，移種時(shí)注意盡管搗勻小試管中的麩皮，呈疏松狀態(tài)，在適溫下培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿麩皮為止，將麩曲小管置干燥器中，在低溫或適溫下保藏。

（3）生理鹽水保藏法。取純氯化鈉0.7-0.9g，放入100%毫升蒸餾水中，攪拌均勻分裝試管，每管5-10mL，進(jìn)行滅菌（1kg/cm2，30min），經(jīng)無菌檢查合格后備用，將待保藏的菌種接入馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中適溫振蕩培養(yǎng)5-7d。

（4）冷凍真空干燥法。將已培養(yǎng)、生長(zhǎng)豐富的菌體或孢子懸浮于滅菌的血清、卵白、脫脂奶制成菌懸液，將懸液以無菌操作分裝于滅菌的玻璃安瓿瓶中，每管約0.3-0.5mL，然后用耐壓橡皮管與冷凍干燥裝置連接，安瓿瓶放在冷凍槽中于-30℃至-40℃迅速冷凍，并在冷凍狀態(tài)下抽空干燥，并在真空狀態(tài)下熔封安瓿，在-20℃保存，一般可保存十年以上，但成本較高。