龍同　曹春霞等

摘要：采用管碟法測(cè)定８種典型生物與化學(xué)農(nóng)藥制劑對(duì)西瓜枯萎病菌（尖孢鐮刀菌西瓜?；?，Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．ｎｉｖｅｕｍ）的抑菌活性。結(jié)果表明，代森錳鋅、鹽酸嗎啉胍、中生菌素、春雷霉素對(duì)西瓜枯萎病菌無(wú)抑菌活性，多菌靈、枯草芽孢桿菌、甲基托布津、乙蒜素對(duì)西瓜枯萎病菌具有較強(qiáng)抑菌活性，抑菌圈半徑依次為９．６、７．５、４．８、３．５ｍｍ。采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定藥劑對(duì)西瓜枯萎病菌的相對(duì)抑菌率及ＥＣ５０，結(jié)果表明，多菌靈的抑菌活性最強(qiáng)，持效期大于１４ｄ，１６ｍｇ／Ｌ處理藥后１４ｄ相對(duì)抑菌率仍為１００％；其次為生物農(nóng)藥活菌制劑枯草芽孢桿菌，其ＥＣ５０為１．４３７２ｍｇ／Ｌ，是用于防治西瓜枯萎病的較理想藥劑。

關(guān)鍵詞：西瓜枯萎病菌；殺菌劑；枯草芽孢桿菌；室內(nèi)毒力測(cè)定

中圖分類號(hào)：Ｓ４３６．５ 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ 文章編號(hào)：0439－８114（２０12）24－5646-04

西瓜枯萎病是西瓜主要病害之一，病原為西瓜枯萎病菌［尖孢鐮刀菌西瓜?；停ǎ疲酰螅幔颍椋酰恚铮螅穑铮颍酰恚妫螅穑畁ｉｖｅｕｍ（Ｅ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ）Ｓｎｙｄｅｒ＆Ｈａｎｓｅｎ］，在土中可存活８～１０年時(shí)間，是典型的土傳病害，也屬種傳病害，西瓜種子的種殼、子葉和胚軸等各部位均可攜帶西瓜枯萎病病原［１－５］。病菌從西瓜根系侵入，引起維管束褐變腐爛，導(dǎo)致瓜秧枯死，嚴(yán)重影響西瓜產(chǎn)量，素有“西瓜癌癥”之稱［６，７］。由于不合理輪作，連作障礙加重，由于化學(xué)藥劑大量使用，西瓜枯萎病菌抗藥性不斷增強(qiáng)，田間西瓜枯萎病的危害逐年增重，已成為制約西瓜產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的主要因素之一。中國(guó)瓜農(nóng)主要采用化學(xué)農(nóng)藥防治西瓜枯萎病。據(jù)報(bào)道，７０％甲基托布津ＷＰ、５０％多菌靈ＷＰ、７５％百菌清ＷＰ、５０％代森錳鋅ＷＰ、４０％美邦治萎（福美雙·甲硫）ＷＰ，以及黃蒿、中生菌素、農(nóng)抗１２０等藥劑對(duì)西瓜枯萎病有一定的防治效果［6-10］，但尚未徹底解決西瓜枯萎病難題。試驗(yàn)通過(guò)比較幾種典型生物與化學(xué)殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病菌的室內(nèi)毒力，以期為后續(xù)深入開展枯草芽孢桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）防治西瓜枯萎病打基礎(chǔ)，為采用生物農(nóng)藥防治西瓜枯萎病、綜合治理西瓜枯萎病提供理論指導(dǎo)。

１ 材料與方法

１．１ 供試病菌

西瓜枯萎病菌分離自２０１１年湖北省武漢市江夏區(qū)瓜農(nóng)提供的病株，經(jīng)室內(nèi)純化、形態(tài)學(xué)顯微觀察鑒定、柯赫氏法則回接試驗(yàn)證明。菌種保藏于湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心。菌種于ＰＤＡ培養(yǎng)基上培養(yǎng)４ｄ后供試驗(yàn)用。同時(shí)采用ＰＤＢ液體培養(yǎng)基２８℃、１５０ｒ／ｍｉｎ搖瓶培養(yǎng)４ｄ，２５０ｍＬ三角瓶每瓶裝量１００ｍＬ。ＰＤＡ培養(yǎng)基、ＰＤＢ培養(yǎng)基制作參照文獻(xiàn)［１１］。

１．２ 供試殺菌劑

２０％鹽酸嗎啉胍可濕性粉劑（東莞市瑞德豐生物科技有限公司，以下簡(jiǎn)稱鹽酸嗎啉胍）；７０％甲基托布津可濕性粉劑（陜西美邦農(nóng)藥有限責(zé)任公司，以下簡(jiǎn)稱甲基托布津）；８０％代森錳鋅可濕性粉劑（美國(guó)仙農(nóng)有限公司，以下簡(jiǎn)稱代森錳鋅）；８０％多菌靈可濕性粉劑（陜西美邦農(nóng)藥有限責(zé)任公司，以下簡(jiǎn)稱多菌靈）；８０％乙蒜素乳油（天津漢邦植物保護(hù)劑有限責(zé)任公司，以下簡(jiǎn)稱乙蒜素）；３％中生菌素可濕性粉劑（福州凱立生物制品有限公司，以下簡(jiǎn)稱中生菌素）；６％春雷霉素可濕性粉劑（陜西韋爾奇作物保護(hù)有限公司，以下簡(jiǎn)稱春雷霉素）；１０００億活芽孢／g枯草芽孢桿菌原藥（湖北康欣農(nóng)用藥業(yè)有限公司，以下簡(jiǎn)稱枯草芽孢桿菌）。

１．３ 方法

１．３．１ 不同藥劑對(duì)西瓜枯萎病菌的抑菌圈測(cè)定 采用管碟法［１２］測(cè)定幾種生物與化學(xué)殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病菌的抑菌活性。?。叮恚虛u瓶發(fā)酵培養(yǎng)４ｄ的西瓜枯萎病菌菌液，加入至94ｍＬ５０℃的ＰＤＡ培養(yǎng)基中，搖勻后倒平板，制成含病菌ＰＤＡ平板。用無(wú)菌水將供試８種農(nóng)藥制劑均配置成１００ｍｇ／Ｌ溶液。每平板中各放置３個(gè)已滅菌牛津杯，取供試藥劑２００μＬ置入其中２個(gè)牛津杯中，另１個(gè)牛津杯為無(wú)菌水對(duì)照，每處理重復(fù)４次。２８℃培養(yǎng)室中黑暗培養(yǎng)３ｄ，采用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈半徑［１３，１４］。

２ 結(jié)果與分析

２．１ 殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病菌抑菌圈的作用

２．２ 殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病菌的相對(duì)抑菌率

１）甲基托布津?qū)ξ鞴峡菸【南鄬?duì)抑菌率隨著藥劑濃度的升高而增大，菌落直徑則隨著藥劑濃度升高而減小，甲基托布津１、２、４、８、１６ｍｇ／Ｌ不同濃度處理６ｄ，菌落直徑分別為（７．４５±０．１３）、（７．３８±０．２９）、（７．０５±０．１３）、（５．３８±０．２６）、（２．８５±０．１３）ｃｍ，相對(duì)抑菌率分別為４．４９％±１．６６％、５．４５％±３．８３％、９．６２％±１．６６％、３１．０９％±３．３７％、６３．４６％±１．６６％。１６ｍｇ／Ｌ處理相對(duì)抑菌率最高，極顯著高于其他處理，１、２、４ｍｇ／Ｌ處理之間無(wú)極顯著差異。據(jù)試驗(yàn)觀察，藥后１４ｄ，各濃度處理菌落均長(zhǎng)滿平板，與對(duì)照無(wú)明顯差別。

２）多菌靈對(duì)西瓜枯萎病菌具有顯著抑菌作用，１、２、４、８、１６ｍｇ／Ｌ處理藥后６ｄ，各濃度處理均沒(méi)有菌落形成。藥后１４ｄ，１、２、４、８、１６ｍｇ／Ｌ處理菌落直徑依次為（１．７３±０．１１）、（１．３５±０．０６）、（０．７８±０．２５）、（０．１３±０．０８）、（０．００±０．００）ｃｍ，相對(duì)抑菌率依次為７８．９６%±２．７０%、８３．５４%±１．５７%、９０．５５%±６．０８%、９８．４８%±１．８３%、１００．００%±０．００%，其中８、１６ｍｇ／Ｌ高濃度處理抑菌率高，極顯著高于其他處理，１６ｍｇ／Ｌ抑菌率最高，藥后１４ｄ相對(duì)抑菌率仍為１００％，具有較強(qiáng)的持效性。另外，據(jù)試驗(yàn)觀察，供試多菌靈各濃度處理菌落邊緣界限清晰明亮，菌絲團(tuán)隆起，平行擴(kuò)展生長(zhǎng)受到抑制。

３）乙蒜素抑菌活性相對(duì)較弱，１、２、４、８、１６ｍｇ／Ｌ處理藥后６ｄ西瓜枯萎病菌菌落直徑分別為（７．３６±０．１２）、（７．１６±０．１３）、（７．０６±０．１３）、（６．４４±０．２１）、（６．０３±０．１２）ｃｍ，相對(duì)抑菌率依次為５．６１％±１．６２％、８．１７％±１．６３％、９．４６％±１．６０％、１７．４７％±２．７４％、２２．６８％±１．５９％，低濃度處理１、２、４ｍｇ／Ｌ之間相對(duì)抑菌率無(wú)極顯著差異。據(jù)試驗(yàn)觀察，藥后１４ｄ，各濃度處理與甲基托布津一樣，西瓜枯萎病菌均長(zhǎng)滿平板。

４）枯草芽孢桿菌的相對(duì)抑菌率隨著濃度的升高而增大，１、２、４、８、１６ｍｇ／Ｌ處理藥后６ｄ菌落直徑分別為（４．９０±０．２３）、（３．４８±０．１８）、（２．０５±０．０９）、（１．７５±０．１３）、（１．４１±０．１１）ｃｍ，相對(duì)抑菌率依次為３８．８１％±６．１１％、５６．５６％±５．１６％、７４．４１％±２．３９％、７８．１８％±３．０９％、８２．３６％±２．８８％，高濃度４、８、１６ｍｇ／Ｌ處理間無(wú)極顯著差異，低濃度１、２ｍｇ／Ｌ處理間差異極顯著。另?yè)?jù)試驗(yàn)觀察，藥后１４ｄ，枯草芽孢桿菌各處理平板上均有西瓜枯萎病菌菌絲分布，同時(shí)滿布枯草芽孢桿菌菌落，平板上的西瓜枯萎病菌菌絲密度明顯小于其他處理。

２．３ 殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病菌的毒力比較

３ 小結(jié)與討論

試驗(yàn)采用抑菌圈法比較８種典型生物及化學(xué)農(nóng)藥制劑對(duì)西瓜枯萎病菌的抑菌活性。其中４種（代森錳鋅、鹽酸嗎啉胍、中生菌素、春雷霉素）對(duì)西瓜枯萎病菌未形成明顯的抑菌圈，無(wú)抑菌活性，因此不宜采用上述藥劑防治西瓜枯萎病。甲基托布津、多菌靈、乙蒜素、枯草芽孢桿菌對(duì)西瓜枯萎病菌具有抑菌活性，存在明顯的抑菌圈，其中多菌靈抑菌圈最大，其次是枯草芽孢桿菌。

多菌靈對(duì)西瓜枯萎病菌具有很強(qiáng)抑菌活性，這與已有報(bào)道［７，１０］一致，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其持效期在１４ｄ以上。據(jù)試驗(yàn)觀察，藥后１４ｄ多菌靈各濃度處理西瓜枯萎病菌菌落隆起，平行擴(kuò)展生長(zhǎng)受阻，并且菌落邊緣界限清晰清亮，而同期其他藥劑處理的菌絲已與空白對(duì)照一樣布滿平板。試驗(yàn)證實(shí)多菌靈可作為西瓜枯萎病田間防治的主要藥劑，生產(chǎn)中應(yīng)注意與其他藥劑輪換使用，以避免或延緩病菌產(chǎn)生抗藥性［７］。

枯草芽孢桿菌是一種嗜溫、好氧、產(chǎn)芽孢、易培養(yǎng)、耐儲(chǔ)存、生理特征多樣的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，在自然界中廣泛存在，對(duì)人畜無(wú)毒無(wú)害，不污染環(huán)境，能產(chǎn)生多種抗菌素和酶，具有廣譜抗菌活性和極強(qiáng)的抗逆能力。田間定殖通過(guò)營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)和位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)、分泌抗菌物質(zhì)、溶菌作用以及誘導(dǎo)抗性等機(jī)制達(dá)到生防目的，已廣泛應(yīng)用于作物病害治理，防治對(duì)象主要為絲狀真菌所引起的植物病害［１５－１７］，如水稻紋枯病、小麥紋枯病、番茄葉霉病、豆類根腐病、蘋果霉心病、棉花立枯病、棉花枯萎病，用于防治西瓜枯萎病的報(bào)道較少。

試驗(yàn)中，枯草芽孢桿菌對(duì)西瓜枯萎病菌具有較強(qiáng)抑菌活性，與已有報(bào)道一致［１８－２０］，高濃度處理間無(wú)極顯著差異，低濃度處理間差異極顯著，表現(xiàn)出活菌制劑的特點(diǎn)。另?yè)?jù)試驗(yàn)觀察，藥后１４ｄ，甲基托布津及乙蒜素各濃度處理平板均長(zhǎng)滿西瓜枯萎病菌菌絲，枯草芽孢桿菌各濃度處理則表現(xiàn)為兩種微生物均布滿平板，但西瓜枯萎病菌菌絲密度明顯低于甲基托布津處理和乙蒜素處理，表現(xiàn)出較好的拮抗特性，其抑菌活性強(qiáng)于常用殺菌劑代森錳鋅、鹽酸嗎啉胍、甲基托布津、乙蒜素、中生菌素、春雷霉素，具有推廣應(yīng)用潛力。枯草芽孢桿菌防治西瓜枯萎病的抑菌機(jī)理、田間應(yīng)用技術(shù)等有待后續(xù)深入研究。

參考文獻(xiàn)：

［１］董金皋．農(nóng)業(yè)植物病理學(xué)［Ｍ］．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，２００１．

［２］吳學(xué)宏，盧志軍，王品品，等．西瓜枯萎病綜合防治研究進(jìn)展［Ｊ］．植物保護(hù)，２０１１，３７（４）：２７－３２．

［３］ＧＡＲＧＯＵＲＩＳ，ＨＡＪＬＡＯＵＩＭＲ，ＡＢＤＥＮＮＡＤＨＥＲＭ，ｅｔａｌ．ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｕｓａｒｉｕｍｓｐｐ．ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｂｙｗａｔｅｒｍｅｌｏｎｓｅｅｄｓ［Ｊ］．ＥＰＰＯＢｕｌｌｅｔｉｎ，２０００，３０（２）：２１７－２２２．

［４］ＭＩＣＨＡＩＬＳＨ，ＲＥＨＩＭＭＡＡ，ＴＡＲＡＢＥＩＨＡＭ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｏｆＦｕｓａｒｉｕｍｓｅｅｄ－ｂｏｒｎｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｎｗａｔｅｒｍｅｌｏｎｗｉｌｔｉｎｃｉｄｅｎｃｅ［Ｊ］．ＡｃｔａＰｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｅｔＥｎｔｏｍｏｌｏｇｉｃａＨｕｎｇａｒｉｃａ，２００２，３７（４）：３４７－３５１．

［５］ＢＯＵＧＨＡＬＬＥＢＮ，ＥＬ－ＭＡＨＪＯＵＢＭ．ＦｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆＦｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．ｎｉｖｅｕｍａｎｄＦ．ｓｏｌａｎｉｆ．ｓｐ．ｃｕｃｕｒｂｉｔａｅｆｒｏｍｗａｔｅｒｍｅｌｏｎｓｅｅｄｓａｎｄｔｈｅｉｒｅｆｆｅｃｔｏｎｄｉｓｅａｓｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅ［Ｊ］．ＲｅｓｅａｒｃｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，２００７，２（１）：３２－３８．

［６］許 彥，羅 豐，楊禮哲，等．幾種殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病的室內(nèi)毒力測(cè)定［Ｊ］．熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，２０１０，３０（１０）：１８－１９，２６．

［７］衛(wèi)月勇．五種殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病的抑菌效果試驗(yàn)［Ｊ］．上海蔬菜，２００９（３）：８８．

［８］蔣細(xì)良，謝德齡，倪楚芳，等．中生菌素對(duì)真菌作用機(jī)理的研究［Ｊ］．中國(guó)生物防治，１９９７，１３（２）：６９－７１．

［９］李惠紅，羅 雁，韋 娟．應(yīng)用４０％美邦治萎可濕性粉劑防治西瓜枯萎病試驗(yàn)報(bào)告［Ｊ］．廣西農(nóng)學(xué)報(bào)，２００７，２２（４）：１９－２０．

［１０］馬登超，仲偉虎，李素真，等．黃篙等殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病菌的室內(nèi)抑菌效果［Ｊ］．中國(guó)西瓜甜瓜，１９９９（２）：１９－２０．

［１１］趙 斌，何紹江．微生物學(xué)試驗(yàn)［Ｍ］．北京：科學(xué)出版社，２００２．

［１２］慕立義．植物化學(xué)保護(hù)研究方法［Ｍ］．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，１９９４．

［１３］林福呈，陳衛(wèi)良，許建平，等．采用西瓜汁蔗糖瓊脂培養(yǎng)基有效篩選西瓜枯萎病菌拮抗細(xì)菌［Ｊ］．植物病理學(xué)報(bào)，１９９７，２７（４）：３６９－３７５．

［１４］孫正祥，紀(jì)春艷，李云鋒，等．香蕉枯萎病拮抗細(xì)菌的分離篩選與鑒定［Ｊ］．中國(guó)生物防治，２００８，２４（２）：１４３－１４７．

［１５］李 晶，楊 謙．生防枯草芽孢桿菌的研究進(jìn)展［Ｊ］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，２００８，３６（１）：１０６－１１１，１３２．

［１６］程洪斌，劉曉橋，陳紅漫．枯草芽孢桿菌防治植物真菌病害研究進(jìn)展［Ｊ］．上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，２００６，２２（１）：１０９－１１２．

［１７］黃海嬋，裘娟萍．枯草芽孢桿菌防治植物病害的研究進(jìn)展［Ｊ］．浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，２００５（３）：２１３－２１５．

［１８］岳 菊，劉郵洲，張榮勝，等．西瓜枯萎菌拮抗細(xì)菌的篩選、鑒定及防效測(cè)定［Ｊ］．中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，２０１１，２７（３）：４２８－４３２．

［１９］馬 艷，趙江濤，常志州，等．西瓜內(nèi)生枯草芽孢桿菌ＢＳ２１１的拮抗活性及盆栽防效［Ｊ］．江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，２００６，２２（４）：３８８－３９３．

［２０］張洪濤，趙國(guó)玉，于頻頻，等．西瓜枯萎病高效拮抗菌ＸＪＵＬ－１２的篩選與鑒定［Ｊ］．生物技術(shù)，２００７，１７（４）：７７－８０．