許慧玉

培哚普利是一種有效降壓、耐受良好的長效血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI），具有較高的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）親和力、能顯著增強(qiáng)緩激肽水平，有抗缺血、抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，對(duì)血管還有保護(hù)特性，在臨床中較為常用。但培哚普利本身對(duì)血管直接的舒張作用及機(jī)制研究目前尚不多見。本研究擬通過大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)實(shí)驗(yàn)觀察培哚普利對(duì)血管的直接作用，并初步探討其相關(guān)的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 培哚普利：施維雅（天津）制藥有限公司，批號(hào)2000912。左旋硝基精氨酸甲酯（L－NAME）、吲哚美辛（Indo）、亞甲藍(lán)（MB）均購自Sigma公司。去甲腎上腺素（Norepinephrine，NE）：Sigma公司，批號(hào)086K1540。其余均為化學(xué)試劑國產(chǎn)分析純。BL－420F計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）。張力換能器（FT－100，成都泰盟科技有限公司）。數(shù)字式超級(jí)恒溫浴鍋（HH－501，常州國華電器有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Sprague－Dawley（SD）雄性大鼠，月齡2個(gè)月～3個(gè)月，體重（250～300）g，由山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)條件：每籠2只，自由攝食飲水，飼養(yǎng)溫度為20℃～25℃，相對(duì)濕度40%～70%。用山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的標(biāo)準(zhǔn)塊料飼養(yǎng)。

1.3 標(biāo)本制備 以斷頭法處死大鼠，迅速打開胸腔，分離出胸主動(dòng)脈，將取下的胸主動(dòng)脈置入預(yù)冷預(yù)先通氧、pH值為7.4的生理鹽溶液（physiological salt solution，PSS）中，成分為：NaCl 144mmol／L，KCl 5.8mmol／L，MgCl21.2mmol／L，CaCl22.5 mmol／L，Glucose 11.1mmol／L，HEPES 5mmol／L。去除血管周圍的脂肪及結(jié)締組織，將動(dòng)脈剪成2mm～3mm的血管環(huán)，血管環(huán)用兩根不銹鋼微型掛鉤從管腔穿過，水平懸掛在浴管內(nèi)，下方固定，上方以一細(xì)鋼絲連于張力換能器，經(jīng)BL－420F計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)記錄血管環(huán)的張力變化。浴管內(nèi)含有100%O2、pH 值為7.4、37 ℃的生理鹽溶液（physiological salt solution，PSS），前負(fù)荷調(diào)為2g，平衡1h后開始實(shí)驗(yàn)。每20 min換一次營養(yǎng)液。所有動(dòng)脈環(huán)用60mmol／L KCl PSS液2次刺激，收縮穩(wěn)定后，開始正式實(shí)驗(yàn)。去內(nèi)皮的實(shí)驗(yàn)，將修剪干凈的胸主動(dòng)脈環(huán)兩端固定，用于血管內(nèi)徑相適的棉棒從管腔擦過，連續(xù)2次。血管環(huán)懸掛穩(wěn)定1h后，用60mmol／L KCl HEPES液刺激，達(dá)到坪值后加入Ach（10－5mol／L），舒張幅度不超過收縮幅度的5%時(shí)認(rèn)為內(nèi)皮去除完全，可開始實(shí)驗(yàn)。

1.4 方法 張力平衡后，用 NE（1×10－6mol／L）分別預(yù)收縮內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮的血管，達(dá)到坪值后，以10min的間隔累積加入1×10－9mol／L，1×10－8mol／L，1×10－7mol／L，1×10－6mol／L，1×10－5mol／L，1×10－4mol／L的培哚普利，對(duì)照組加入等容量的生理鹽水，描記張力曲線。

張力平衡后，同樣用 NE（1×10－6mol／L）預(yù)收縮血管，達(dá)到坪值后，加入一氧化氮合酶（eNOS）抑制劑L－NAME（1×10－4mol／L）、環(huán)氧合酶抑制劑Indo（1×10－5mol／L）、鳥苷酸環(huán)化酶（sGC）抑制劑亞甲藍(lán)（1×10－6mol／L）再次達(dá)到坪值后，以10 min的間隔累積加入1×10－9mol／L，1×10－8mol／L，1×10－7mol／L，1×10－6mol／L，1×10－5mol／L，1×10－4mol／L的培哚普利，描記張力曲線。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以NE誘發(fā)的收縮幅度作為100%，計(jì)算加入培哚普利后的血管張力變化百分比。比較各組間在相同濃度時(shí)張力變化的差異。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS13.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)處理采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 培哚普利對(duì)NE預(yù)收縮的大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用以及內(nèi)皮對(duì)其作用的影響 培哚普利對(duì)NE（1×10－6mol／L）預(yù)收縮的大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)產(chǎn)生濃度依賴性的舒張作用，其logEC50為－6.1±0.3，與對(duì)照組相比，張力變化差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。培哚普利對(duì)NE（1×10－6mol／L）預(yù)收縮的去內(nèi)皮離體胸主動(dòng)脈環(huán)產(chǎn)生濃度依賴性的舒張作用，其logEC50為－5.4±0.2，與內(nèi)皮完整組相比，張力變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。詳見表1。

表1 對(duì)照組、內(nèi)皮完整組和去內(nèi)皮組的各濃度舒張幅度比較（x±s）

2.2 阻斷劑對(duì)培哚普利舒血管作用的影響 L－NAME干預(yù)后，培哚普利對(duì)預(yù)收縮胸主動(dòng)脈的舒張作用減弱，與內(nèi)皮完整組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），Indo干預(yù)后，培哚普利對(duì)NE誘發(fā)的血管張力變化與內(nèi)皮完整組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），MB干預(yù)后，培哚普利對(duì)預(yù)收縮胸主動(dòng)脈的舒張作用減弱，與內(nèi)皮完整組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。詳見表2。

表2 內(nèi)皮完整組以及阻斷藥組的各濃度舒張幅度比較（x±s）

3 討 論

實(shí)驗(yàn)表明，培哚普利對(duì)內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮的大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)均有舒張作用，且去除內(nèi)皮后，其舒張作用減弱。因此，培哚普利對(duì)血管的舒張作用由兩部分組成，一部分作用于內(nèi)皮的舒張機(jī)制，一部分直接作用于血管平滑肌。本實(shí)驗(yàn)主要探討了作用于內(nèi)皮的舒張機(jī)制。

內(nèi)皮細(xì)胞釋放的舒血管物質(zhì)在血管平滑肌張力的調(diào)節(jié)過程中起重要的作用［1，2］，即 EDRF／NO、前列腺環(huán)素（PGI2）和內(nèi)皮細(xì)胞超極化因子（EDHF）。其中NO是內(nèi)皮細(xì)胞釋放的最重要的舒血管物質(zhì)，對(duì)于血管基礎(chǔ)張力的維持至關(guān)重要［1，3］。內(nèi)皮源性NO釋放受抑制導(dǎo)致內(nèi)皮相關(guān)的血管舒張作用減弱［4］。NO可通過NO－sGC－cGMP途徑，使鳥苷酸環(huán)化酶激活促使環(huán)磷鳥苷酸（cGMP）生成，后者則進(jìn)一步作用于cGMP依賴性蛋白激酶使Ca2＋內(nèi)流減少，增加Ca2＋－ATP酶對(duì)Ca2＋的攝取，或直接使收縮蛋白去磷酸化舒張血管［5］。大量在體給藥實(shí)驗(yàn)證實(shí)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）類藥物具有內(nèi)皮依賴性，并且可以增強(qiáng)一氧化氮合酶（NOS）的活性和改善內(nèi)皮功能［6－8］。本離體實(shí)驗(yàn)也證實(shí)培哚普利對(duì)胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用具有內(nèi)皮依賴性。eNOS抑制劑L－NAME、鳥苷酸環(huán)化酶抑制劑亞甲藍(lán)MB分別處理血管后，發(fā)現(xiàn)在NE預(yù)收縮的基礎(chǔ)上培哚普利的舒張血管作用部分被阻斷，提示NO－sGC途徑可能參與培哚普利的舒張血管作用。另一舒血管物質(zhì)PGI2是由COX催化花生四烯酸產(chǎn)生的，Rodriguez－Garcia等［9，10］通過在體實(shí)驗(yàn)證實(shí)ACEI藥物可增加PGI2的產(chǎn)生。加入環(huán)氧合酶抑制劑Indo后，培哚普利的舒張血管作用減弱，提示PGI2參與了培哚普利的舒血管作用。

培哚普利對(duì)NE預(yù)收縮的大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)具有濃度依賴性的舒張作用，其舒張反應(yīng)可能有內(nèi)皮依賴性，與內(nèi)皮產(chǎn)生的NO及PGI2的合成有關(guān)，可能通過NO－sGC途徑產(chǎn)生內(nèi)皮依賴性的舒張作用。

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