膽汁反流性胃炎與濁毒相關性研究＊

郭喜軍 曹 旭 梁 京 河北省中醫(yī)院消化內科（石家莊050011）

膽汁反流性胃炎（bile－reflux gastritis，BRG）隨著胃鏡的普及，檢出率大大增加，成為消化系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病。其發(fā)病機制復雜，涉及病因多種，包括胃腸動力紊亂，膽囊功能障礙及胃腸激素異常等。目前中醫(yī)藥對此病研究很多，但很少從濁毒立論進行研究。李佃貴教授創(chuàng)立的“濁毒理論”為膽汁反流性胃炎的中醫(yī)藥治療提供了新的治療思路，濁毒是當前中醫(yī)病因病機研究的一個重要內容，本實驗通過建立膽汁反流性胃炎大鼠濁毒證模型，從而來研究濁毒在膽汁反流性胃炎發(fā)病過程中的有關機制，以期為臨床研究提供實驗依據(jù)。

1 材 料 1.1 實驗動物 清潔級Wistar雄性大鼠30只，體重180～200g，購自河北醫(yī)科大學動物實驗中心，動物合格證號：1105033。

1.2 試 劑 將牛黃胴酸鈉2.5g（鄭州利偉生物實業(yè)有限公司，批號20110206）、胰酶1.5g（美國 GIBCO公司，批號27250018）、卵磷脂0.25g（瑞士 ACROS公司，批號 A0277637）溶于蒸餾水100mL中配制成膽汁液。石家莊行唐棗木杠酒（酒精含量為75%）。SOD與MDA試劑盒由北京中杉金橋生物技術有限公司提供。TNF－α檢測試劑盒由北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司提供。

1.3 實驗設備 LRI－I－800－GS人工氣候箱為廣東省醫(yī)療器械廠產(chǎn)品；YC－DZ0z亞都超聲加濕器為北京亞都科技股份有限公司產(chǎn)品；HM－200電子天平；TDL－5－A離心機上海安亭產(chǎn)品；MDF－382E超低溫保存箱日本三洋；LGL－10臺式冷凍干燥機寧波新芝生物科技股份有限公司；NW10VF超純水機 上海力康HeaLForce；DY89－1電動玻璃勻漿機 寧波新芝生物科技股份有限公司；FJ－2021γ－放射免疫計數(shù)器西安二六二廠，等。均由河北中醫(yī)學院提供。

2 方 法 2.1 動物分組及造模 30只Wistar雄性大鼠隨機分為正常對照組（A組）、濕熱證組（B組）、濁毒證組（C組）。各組動物實驗前先適應性喂養(yǎng)7d。對照組正常飼養(yǎng)。模型組參照柴氏[1]的方法并稍加改動。即濕熱證組除用上述配制好的膽汁液灌胃外，將大鼠放入溫度（38±2）℃、相對濕度（93±2）%的人工氣候箱中，安排肥甘污染飼料喂養(yǎng)（將其昨日糞便、豬油、花生油、標準飼料以配比1∶1∶1∶100研碎，混合均勻）10d。濁毒證組除濕熱證組方法造模外另加5%乙醇溶液和0.5%辣椒水溶液隔日給予以代替飲水，并延長造模時間，比濕熱證組多造模10d。

2.2 一般表現(xiàn)觀察 大鼠外觀、精神狀態(tài)及食量、體重、糞便形狀等。

2.3 指標檢測及方法 據(jù)文獻[2，3]各組動物于末次灌胃后，禁食不禁水24h，斷頭取血2mL，在4℃，4 000r/rain條件下離心10min，取上清液，－20℃凍存，留作TNF－α檢測，測定方法嚴格按試劑盒說明書操作。采血后快速剖取胃組織，在低溫生理鹽水液中洗去血液，沿胃大彎剪開，用冰生理鹽水漂洗胃內容物，濾紙吸干，切取胃竇組織一塊，立即投入4%甲醛溶液內固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下組織形態(tài)觀察。用刀片刮取余下的胃竇組織粘膜并稱重，冰浴下制備10%組織勻漿，3000r/min離心15min，取上清，－20℃以下保存，留作SOD、MDA檢測，測定方法嚴格按試劑盒說明書操作。

3 結 果 3.1 一般表現(xiàn)情況 正常組在喂養(yǎng)期間一般情況良好。濕熱證組大鼠前7d體重量增加，開始造模后體重未有明顯增長，面背部毛色枯槁，耳尾色白、毛無光澤，大便時干時溏，活動狀態(tài)不佳。濁毒證組大鼠前7d體重增加，開始造模后食量明顯減少，體質量減輕，精神萎靡，嗜臥懶動，全身毛色枯槁萎黃，形體逐漸偏瘦，溏便，出現(xiàn)受驚動時無神，抓取時掙扎無力。

3.2 胃黏膜病理組織學結果 光鏡觀察正常組黏膜上皮完整，結構排列清楚，固有黏膜密集排列的腺體，未見胃黏膜萎縮脫落或缺損，未見毛細血管擴張及潰瘍。濕熱證組胃黏膜上皮細胞層未變薄、有脫落，炎細胞浸潤，有毛細血管擴張充血。濁毒證組胃黏膜上皮細胞萎縮、脫落、糜爛，胃粘膜腺體和腺細胞減少，腸化生，炎細胞浸潤、部分有淋巴濾泡形成。

3.3 各組胃黏膜SOD、MDA及血清TNF－α含量 與正常組比較，濕熱證組和濁毒證組血TNF－α及胃黏膜MDA含量均有顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），同時濁毒證組較濕熱證組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與正常組比較，濕熱證組和濁毒證組胃黏膜SOD含量均顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。同時濁毒證組較濕熱證組低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），如表1。

表1 各組TNF－α、MDA、及SOD結果的比較±s）

表1 各組TNF－α、MDA、及SOD結果的比較±s）

注：與正常對照組比較，△P＜0.01，有統(tǒng)計學差異；與濕熱證組比較，▲P＜0.05，有統(tǒng)計學差異

組別 n TNF－α（ng/mL）MDA（u/mg prot）SOD（nmol/mg prot）正常對照組10 0.31±0.02 0.48±0.9 226±53濕熱證組 10 0.51±0.04△▲ 0.96±1.2△▲ 157±32△▲濁毒證組 10 0.78±0.07△▲ 1.22±1.8△▲ 129±21△▲

4 討 論 膽汁反流性胃炎（BRG）在臨床上隨著胃鏡的廣泛應用，檢出率逐年增加，成為慢性胃炎的一種常見類型。BRG可歸屬祖國醫(yī)學胃脘痛、嘈雜、嘔膽等范疇。近年來國內的中醫(yī)學者對該病的辨治進行了多方面探索，李佃貴教授創(chuàng)立的“濁毒理論”為本病的中醫(yī)藥治療提供了新的治療思路，應用濁毒理論辨證論治在臨床上取得了良好的效果。但是缺乏實驗依據(jù)，本實驗以“濕熱久居蘊成濁毒”為理論依據(jù)，分別建立濕熱和濁毒模型，觀察和檢測相關指標，從而為濁毒理論提供實驗依據(jù)。

濕熱蘊久可化生濁毒。本實驗中模型的建立就在濕熱證組的基礎上刻意延長了濁毒證組的造模時間，并且在大鼠平時飲水中加入了助濕生熱之大辛大熱的白酒和辣椒水。病理切片和檢測指標結果均為濁毒證組較濕熱證組嚴重，提示了濕熱證蘊久逐漸向濁毒證發(fā)展的病理變化過程。李佃貴[4]認為濁毒互結，濁以毒為用，毒以濁為體，膠著難愈，邪壅經(jīng)絡，氣機不暢，邪不得散，血不得行，津不得布，津血停留，化生痰濁瘀血，日久痰濁、瘀濁相互搏結，反復日久，耗傷臟腑氣血津液，從而造成濁毒內壅、氣滯絡阻、脾不升清、胃失和降、陰血耗傷、氣虛血郁的證機變化，而濁毒相干為致病的關鍵。

TNF－α（腫瘤壞死因子）是一種促炎癥蛋白，可致胃黏膜內皮細胞的損傷，使血流減少，而胃黏膜血流在胃黏膜屏障的防御作用中至關重要，從而造成胃黏膜損傷[5]。適量的TNF－α可參與免疫細胞的活化炎癥反應，具有抗感染、抗病毒和抗腫瘤作用；而過量的TNF－α則增強微血管壁通透性，改變黏膜血管內皮細胞反應性，致微血管內凝血，致細胞破壞，溶酶體漏出，炎性介質釋放，使黏膜營養(yǎng)不良[6]。本研究表明，模擬濁毒證組膽汁反流性胃炎大鼠血清TNF－α水平明顯升高，說明濁毒的產(chǎn)生可能和血清TNF－α水平升高有關。

自由基是機體內代謝的必然產(chǎn)物，在體內不斷產(chǎn)生，同時又被不斷清除。一定的含量對人體有生理作用，但是產(chǎn)生過多后超出機體的清除能力，就會對機體造成損傷[7]。丙二醛（MDA）是脂質過氧化作用的最終產(chǎn)物，故測定MDA水平可反映氧自由基的水平。它是評估自由基對機體損害程度的重要參考指標。過氧化物歧化酶（SOD）是自由基清除系統(tǒng)中最重要的酶類之一，在胃壁細胞內活性很強。它能夠及時有效地清除體內自由基，免除其對機體的損害作用。體內SOD含量大小，在一定程度上反映機體清除自由基能力的大小。本實驗表明，模擬濁毒證組膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜由于MDA水平升高和SOD水平下降，大量氧自由基對胃黏膜造成損傷，說明濁毒的產(chǎn)生可能和胃黏膜MDA水平升高和SOD水平下降有關。

[1]柴天川，王彥剛，王紅英.濁毒型慢性膽囊炎豚鼠模型的復制[J].河北中醫(yī)，2005，22（3）：1556－1561.

[2]張靜霜，朱西杰，朱微微，等.復方蜥蜴散對慢性萎縮性胃炎模型大鼠腫瘤壞死因子TNF－α及胃黏膜病理組織學的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，21（2）：286－288.

[3]楊牧祥，于文濤，白瑞軍，等.胃炎飲對實驗性膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜自由基代謝的影響[J].疑難病雜志，2009，11（11）：657－659.

[4]李佃貴，朱 峰，劉建平，等.濁毒論治探討[J].山西中醫(yī)，2008，24（11）：1－3.

[5]Appleyard CB，Mc Cafferty DM，Tigle AW，et al.TNF－αmediation of NSAID－induced gastric damage：role of leukocyte adherence[J].Am J physiol，1966，270：42－48.

[6]張靜霜，朱西杰，朱微微，等.復方蜥蜴散對慢性萎縮性胃炎模型大鼠腫瘤壞死因子TNF－α及胃黏膜病理組織學的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2010，2l（2）：286－288.

[7]李 濤，王秀玲.氧自由基與胃腸疾病研究進展[J].國外醫(yī)學·消化系疾病分冊，1997，17（4）：204.