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      白藜蘆醇對(duì)大鼠海馬CA1區(qū)誘發(fā)癲癇樣放電的影響

      2012-07-28 09:57:36尤竹燕王斌生王烈成
      關(guān)鍵詞:腦片白藜蘆醇灌流

      尤竹燕,王斌生,解 敏,李 珍,王烈成

      (1.安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室,安徽合肥 230032;2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院血液細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,浙江杭州 310058)

      癲癇是由多種原因引起的局部腦區(qū)神經(jīng)元群異常放電所致的行為和功能異常的發(fā)作性慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。顳葉癲癇(temporal lobe epilepsy,TLE)是臨床上最常見(jiàn)的癲癇類(lèi)型,但由于目前對(duì)其機(jī)制還不是很明確,因此給它的治療帶來(lái)很大困難。癲癇的藥物防治目前研究進(jìn)展緩慢,使用經(jīng)典的抗癲癇藥物如苯妥英鈉、丙戊酸等可有效地控制部分癲癇發(fā)作,但仍有20%~25%癲癇患者經(jīng)正規(guī)抗癲癇藥物治療后難以控制,發(fā)展成為慢性或難治性癲癇。另外,由于目前經(jīng)典的抗癲癇藥物在藥動(dòng)學(xué)和藥理學(xué)上均有缺陷,因此臨床上一直在找尋新型的抗癲癇藥物。白藜蘆醇(Res)是多種植物在遭受損傷、紫外線照射和真菌感染時(shí)合成的一種抗菌素[1],具有多酚結(jié)構(gòu),并具有抗氧化、清除自由基、抗癌、抗誘變、抗衰老和降血脂等方面的作用。目前認(rèn)為,Res對(duì)神經(jīng)元有一定的營(yíng)養(yǎng)、損傷修復(fù)和保護(hù)作用[2],近年來(lái),Res對(duì)癲癇的治療也逐漸引起了關(guān)注[3]。本研究采用離體腦片場(chǎng)電位記錄技術(shù),通過(guò)在灌流腦脊液中加入不同濃度的Res,觀察并分析Res對(duì)大鼠海馬CA1區(qū)癲癇樣活動(dòng)的影響。

      1 材料與方法

      1.1 材料

      1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 普通級(jí)Wistar大鼠,♂,體質(zhì)量200~240 g,由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

      1.1.2 試劑 KA、bicuculline、Res均購(gòu)自 Sigma公司,水合氯醛、戊巴比妥鈉購(gòu)自中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司。

      1.1.3 儀器 SN-2腦立體定位儀(日本 Narishige);Strong 90顱骨鉆 (韓國(guó) Saeshin公司);NVSLM1振動(dòng)切片機(jī)(美國(guó)WPI);P-97微電極拉制儀(美國(guó)Sutter);Model 3000 AC/DC差分放大器(美國(guó)A-M systems);Master-8生物電刺激器(以色列A.M.P.I.);powerlab 8/30 數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)(澳大利亞ADInstruments)。

      1.2 方法

      1.2.1 TLE動(dòng)物模型建立 大鼠經(jīng)水合氯醛(350 mg·kg-1)腹腔麻醉后,固定于立體定位儀上,暴露顱骨,按大鼠立體定位圖譜[4]確定右側(cè)海馬CA3區(qū)注射靶點(diǎn)(AP:-4.0 mm,ML:4.4 mm,DV:3.8 mm),用微量注射針注入 2.5 ~3 μl KA(0.4 g·L-1),注射15 min,留針 10 min,術(shù)后縫合頭皮。大鼠急性發(fā)作等級(jí)參照Racine標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)[5],達(dá)到Ⅳ級(jí)及以上視為建模成功,模型大鼠在手術(shù)后2~4周進(jìn)行細(xì)胞外場(chǎng)電位記錄。

      1.2.2 離體腦片制備 大鼠用2%戊巴比妥鈉麻醉后迅速斷頭取腦,置于持續(xù)給予95%O2和5%CO2混合氣的4℃人工腦脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)中。待腦組織冷卻后按水平切面切成400 μm厚的腦片,并將其移至含(30 ±2)℃ ACSF的孵育槽中,持續(xù)通入混合氣,孵育1~2 h。ACSF成分 (mmol· L-1)包 括:NaCl 124,KCl 4.5,NaH2PO41.6,MgCl22.1,CaCl22.7,NaHCO326,Glucose 10,pH調(diào)定在7.4左右。

      1.2.3 場(chǎng)電位記錄 將孵育的腦片移至記錄槽,持續(xù)灌流95%O2和5%CO2混合氣飽和的ACSF,灌流速度2 ml·min-1,溫度32℃。刺激電極為雙極鎢絲電極,通過(guò)高倍顯微鏡及定位儀的輔助操作,將其置于輻射層Schaffer側(cè)支通路;記錄電極為內(nèi)充2 mol·L-1NaCl的玻璃微電極,阻抗5~8 MΩ,置于CA1區(qū)錐體細(xì)胞層記錄群峰電位(population spike,PS)。刺激頻率0.033 Hz,波寬0.1 ms。由記錄電極引導(dǎo)的誘發(fā)電位經(jīng)微電極放大器放大,輸入powerlab數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)進(jìn)行觀察、記錄和分析。藥物實(shí)驗(yàn)通過(guò)腦片灌流給藥途徑,給藥前穩(wěn)定記錄誘發(fā)電位30 min。

      1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示,組間均數(shù)用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。

      2 結(jié)果

      2.1 白藜蘆醇對(duì)正常大鼠海馬CA1區(qū)PS的影響電刺激離體海馬腦片Schaffer側(cè)支,在CA1區(qū)錐體細(xì)胞層通常可記錄到單個(gè)PS,見(jiàn)Fig 1A;在灌流正常腦片的ACSF中分別加入低、中和高劑量(分別為 5、15、50 μmol·L-1)的 Res,當(dāng)含有相應(yīng)濃度的Res持續(xù)灌流腦片20 min后記錄的PS分別為灌流前的(98.32±1.3)%、(97.29±2.9)%、(96.46±1.5)%,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析PS幅度均無(wú)明顯變化(n=8,P >0.05)。見(jiàn) Fig 1B,F(xiàn)ig 1C 及 Fig 1D。

      2.2 Bicuculline及KA誘發(fā)大鼠海馬CA1區(qū)癇樣放電活動(dòng)的PS 用GABAA受體拮抗劑bicuculline(30 μmol·L-1)灌流正常海馬腦片 20 min 后可引起4~6個(gè)PS的癇樣放電活動(dòng),見(jiàn)Fig 2A;KA造模成功后所致的大鼠海馬腦片也可記錄到4~6個(gè)PS的癇樣放電活動(dòng),見(jiàn)Fig 2B。

      2.3 不同濃度的白藜蘆醇對(duì)bicuculline所致大鼠海馬CA1區(qū)癲癇樣活動(dòng)PS的影響

      2.3.1 低、中劑量 Res對(duì)大鼠海馬CA1區(qū)誘發(fā)癲癇樣活動(dòng)PS的影響 在正常海馬腦片灌流bicuculline 20 min的基礎(chǔ)上,再灌流低劑量的Res(5 μmol·L-1)20 min后,前4個(gè)PS幅度均無(wú)明顯變化,分別為灌流前的(99.61±3.1)%、(102.66±3.2)%、(98.91±3.2)%、(99.65±3.3)%(n=8,P >0.05;Fig 3A)。用中劑量的 Res(15 μmol·L-1)灌流海馬腦片20min后,前4個(gè)PS幅度也無(wú)明顯變化,分別為灌流前的(98.27±2.9)%、(97.60±4.8)%、(97.08±5.4)%、(100.40±4.6)%(n=8,P >0.05;見(jiàn) Fig 3B)。提示腦片灌流 5 ~15 μmol·L-1的Res對(duì)bicuculline所致的CA1區(qū)癲癇樣放電活動(dòng)沒(méi)有明顯的影響。

      Fig 1 Effects of resveratrol on PS in rat hippocampal CA1 region(The arrow marks the stimulus artifact of PS)

      Fig 2 PS of epileptiform discharges evoked by bicuculline(A)and KA(B)in rat hippocampal CA1 region

      2.3.2 高劑量的Res對(duì)大鼠海馬CA1區(qū)誘發(fā)癲癇樣活動(dòng)PS的影響 在正常海馬腦片灌流bicuculline 20 min的基礎(chǔ)上,再灌流高劑量的Res(50 μmol·L-1)20 min后,前4個(gè)PS幅度均出現(xiàn)明顯性降低,分別為灌流前的(70.13±5.4)%、(67.87±3.6)%、(63.09±3.5)%、(61.01±5.3)%(n=8,P<0.01;Fig 3C);并且PS數(shù)目也明顯減少,為灌流前的(82.02±1.3)%(n=8,P <0.01;Fig 3D)。以上結(jié)果表明 50 μmol·L-1的 Res對(duì) bicuculline 所致的CA1區(qū)癲癇樣放電活動(dòng)有部分抑制作用。

      2.4 不同濃度的白藜蘆醇對(duì)癲癇模型大鼠海馬CA1區(qū)PS的影響 在顳葉癲癇模型大鼠海馬腦片上,用低劑量的Res(5 μmol·L-1)灌流海馬腦片20 min后,前4個(gè)PS幅度均無(wú)明顯變化,分別為灌流前的(98.61±3.3)%、(96.55±4.9)%、(95.22±2.5)%、(98.49±3.1)%(n=6,P >0.05;Fig 4A);用中劑量的 Res(15 μmol·L-1)灌流海馬腦片20 min后,前4個(gè)PS幅度也無(wú)明顯變化,分別為灌流前的(100.52±1.3)%、(101.30±2.7)%、(102.68±3.1)%、(103.36 ±3.2)%(n=6,P >0.05,F(xiàn)ig 4B)。而用高劑量的 Res(50 μmol·L-1)灌流海馬腦片20 min后,前4個(gè)PS幅度均明顯降低,分別為灌流前的(84.39±5.4)%、(84.40±4.9)%、(83.88±4.8)%、(81.30±6.3)%(n=6,P <0.01;Fig 4C);PS數(shù)目也明顯減少,為灌流前的(84.58±2.4)%(n=6,P < 0.01;Fig 4D)。提示 50 μmol·L-1的Res對(duì)癲癇大鼠海馬CA1區(qū)場(chǎng)電位異常放電有部分抑制作用。

      3 討論

      癲癇是由多種病因引起的慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,各種癲癇發(fā)作的本質(zhì)都是由中樞神經(jīng)系統(tǒng)某些細(xì)胞群發(fā)生突然地、過(guò)度地、同步地異常放電所引起的行為異常,異常放電的確切機(jī)制至今尚未完全闡明。目前較一致的觀點(diǎn)是癲癇發(fā)病是因?yàn)橹袠猩窠?jīng)系統(tǒng)興奮性與抑制性不平衡所致。近年來(lái)的研究表明,這種興奮與抑制間的不平衡主要與突觸傳遞[6]、氧化應(yīng)激[1]及受體介導(dǎo)[7]等的改變有關(guān)。

      Bicuculline是大鼠海馬GABAA受體的拮抗劑,GABA是中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制性遞質(zhì),其離子型GABAA受體的激活可增加神經(jīng)元細(xì)胞膜的Cl-通透性,產(chǎn)生抑制性突觸后電位,發(fā)揮抑制效應(yīng)[8]。通過(guò)海馬腦片灌流bicuculline可以使這種抑制作用減弱,并記錄到多個(gè)PS的癇樣放電活動(dòng)(見(jiàn)Fig 2)。KA是從海人草中提取的一種外源性氨基酸,其化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似于谷氨酸,是興奮性氨基酸 KA受體的特異性激動(dòng)劑,具有很強(qiáng)的興奮作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)在大鼠海馬內(nèi)微量注射KA對(duì)海馬產(chǎn)生興奮毒性,從而誘發(fā)癲癇,且此種模型與人類(lèi)癲癇的病理變化和行為表現(xiàn)很相似[9-10],通過(guò)腦片灌流的方式也可記錄到多個(gè)PS的癇樣放電活動(dòng)(見(jiàn)Fig 2)。

      Fig 3 Effects of resveratrol with low,middle and high dose on PS evoked by bicuculline in rat hippocampal CA1 region

      本研究通過(guò)離體腦片的場(chǎng)電位記錄發(fā)現(xiàn)隨著白藜蘆醇灌流濃度增加到50 μmol·L-1對(duì)大鼠海馬CA1區(qū)誘發(fā)的癲癇樣電活動(dòng)有部分抑制作用,Res不但能降低大鼠海馬Bicuculline誘發(fā)的癲癇樣電活動(dòng),且能降低注射KA的造成大鼠癲癇模型的海馬CA1區(qū)的癲癇樣電活動(dòng),提示一定濃度的白藜蘆醇對(duì)癲癇的異常放電有一定的抑制效應(yīng),這與我們以往在整體癲癇大鼠模型所觀察的結(jié)果一致[10]。Bicuculline和KA均可使大鼠海馬興奮性與抑制性神經(jīng)元上受體表達(dá)失衡,興奮性神經(jīng)元過(guò)度興奮,抑制性神經(jīng)元大量死亡,從而使海馬處于過(guò)興奮狀態(tài)導(dǎo)致癲癇樣場(chǎng)電位出現(xiàn)多個(gè)群峰電位(PS)。Res能有效對(duì)抗KA誘導(dǎo)的癲癇大鼠海馬CA1、CA3和齒狀回(DG)門(mén)區(qū)神經(jīng)元死亡[10],同時(shí)Res也能有效抑制KA誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞興奮[11]。本實(shí)驗(yàn)室既往研究也發(fā)現(xiàn) Res具有保護(hù)TLE大鼠的CA1和CA3a區(qū)神經(jīng)元免受損傷的作用,并明顯地抑制MFS,降低了海馬內(nèi)神經(jīng)元同步化放電和癲癇自發(fā)發(fā)作的頻率,具有較好的抗癲癇作用[11]。Res不但能明顯地抑制KA誘導(dǎo)的慢性顳葉癲癇大鼠的癇樣自發(fā)發(fā)作,且對(duì)KA誘導(dǎo)的顳葉癲癇大鼠癲癇不同發(fā)作時(shí)期海馬興奮性/抑制性氨基酸遞質(zhì)比例的失衡有一定的逆轉(zhuǎn)作用[12]。Gupta等指出Res能對(duì)抗KA誘導(dǎo)的癲癇大鼠海馬活性氧(ROS)水平的增加,而ROS可以使大鼠海馬興奮性神經(jīng)元活性增加,推測(cè)Res通過(guò)降低大鼠腦內(nèi)氧化應(yīng)激水平抑制癲癇的發(fā)生[1]。另外,我們之前還發(fā)現(xiàn)癲癇大鼠CA1區(qū)多個(gè)PS的癲癇樣電活動(dòng)可能是由于錐體細(xì)胞軸突回返形成的突觸聯(lián)系激活了NMDA受體,并和非NMDA受體共同介導(dǎo),而NMDA受體主要參與癲癇樣電活動(dòng)靠后的PS[13]。因此,Res可能通過(guò)調(diào)節(jié)NMDA受體的功能對(duì)CA1區(qū)誘發(fā)的癲癇樣電活動(dòng)產(chǎn)生部分抑制作用。

      Fig 4 Effects of resveratrol with low,middle and high dose on PS in hippocampal CA1 region of rat TLE model

      綜上所述,白藜蘆醇可能通過(guò)改善突觸傳遞、降低氧化應(yīng)激或者調(diào)節(jié)受體功能這些機(jī)制來(lái)產(chǎn)生抗癲癇作用,且白藜蘆醇可透過(guò)血腦屏障[14],這也為臨床治療癲癇提供了依據(jù)。本研究雖然在實(shí)驗(yàn)室之前研究的基礎(chǔ)上通過(guò)腦片灌流技術(shù)進(jìn)一步揭示了白藜蘆醇的抗癲癇作用,但具體的作用機(jī)制亟待進(jìn)行更深入的研究。

      [1] Balestrazzi A,Bonadei M,Calvio C,et al.Leaf-associated bacteria from transgenic white poplar producing resveratrol-like compounds:Isolation,molecular characterization,and evaluation of oxidative stress tolerance[J].Can J Microbiol,2009,55:829 -40.

      [2] 李 珍,王斌生,孔德虎,王烈成.白藜蘆醇預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2010,26(6):802 -6.

      [2] Li Z,Wang B S,Kong D H,Wang L C.Neuroprotective effects of preconditioning with resveratrol on focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rats[J].Chin Pharmacol Bull,2010,26(6):802 -6.

      [3] Munjal M A,Bharathi H,Ashok K S.Progress in neuroprotective strategies for preventing epilepsy[J].Prog Neurobiol,2008,84:363-404.

      [4] Watson C,Paxinos G.The rat brain in stereotaxic coordinates[M].Imprint:Academic press,2007:145 -65.

      [5] Racine R,Okujava V,Chipashvili S.Modification of seizure activity by electrical stimulation.3.Mechanisms[J].Electroencephalogr Clin Neurophysiol,1972,32(3):295 -9.

      [6] Scharfman H E.The CA3“backprojection”to the dentate gyrus[J].Prog Brain Res,2007,163:627 -37.

      [7] Okazaki M M,Nadler J V.Glutamate receptor involvement in dentate granule cell epileptiform activity evoked by mossy fiber stimulation[J].Brain Res,2001,915(1):58 -69.

      [8] Jang I S,Nakamura M,Ito Y,Akaike N.Presynaptic GABAA receptors facilitate spontaneous glutamate release from presynaptic terminals on mechanically dissociated rat CA3 pyramidal neurons[J].Neuroscience,2006,138(1):25 -35.

      [9] Bragin A,Engel J J,Wilson C L,et al.Electrophysiologic analysis of a chronic seizure model after unilateral hippocampal KA injection[J].Epilepsia,1999,40(9):1210 -21.

      [10] Wu Z,Xu Q,Zhang R,et al.Protective effect of resveratrol against kainate-induced temporal lobe epilepsy in rats[J].Neurochem Res,2009,34(8):1393 -400.

      [11] Bastianetto S,Zheng W H,Quirion R.Neuroprotective abilities of resveratrol and other red wine constituents against nitric oxide-related toxicity in cultured hippocampal neurons[J].Br J Pharmacol,2000,131(4):711 -20.

      [12]李 敏,孔德虎,許 奇,王烈成.顳葉癲癇大鼠不同時(shí)期海馬和皮層氨基酸類(lèi)遞質(zhì)的變化[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,45(2):135-8.

      [12] Li M,Kong DH,Xu Q,Wang L C.Effects of resveratrol on variations of the amino acids in hippocampus and cortex in different periods of temporal lobe epilepsy[J].Acta Univ Med Anhui,2010,45(2):135-8.

      [13]王斌生,尤竹燕,解 敏,等.介導(dǎo)大鼠海馬CA1區(qū)癲癇樣活動(dòng)的離子型關(guān)酸受體的變化[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,46(7):640-7.

      [13] Wang B S,You Z Y,Xie M,et al.Variations of ionotropic glutamate receptors mediating epileptiform activity in rat hippocampal CA1 region[J].Acta Univ Med Anhui,2011,46(7):640 -7.

      [14] Mokni M,Elkahoui S,Limam F,et al.Effect of resveratrol on antioxidant enzyme activities in the brain of healthy rat[J].Neurochem Res,2007,32:981 -7.

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