應(yīng)用魚油預(yù)防大鼠慢性放射性腸炎的研究

薛 華，楊 陽，黃孝倫，鄧紹平

(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院 a.細(xì)胞移植中心，b.呼吸內(nèi)科，四川 成都 610072)

慢性放射性腸炎有較高的致死率和致殘率，目前還缺乏有效的預(yù)防措施［1］。進(jìn)行性閉塞性動(dòng)脈內(nèi)膜炎和間質(zhì)纖維化是慢性放射性腸炎的主要病理特征［2］。魚油具有維護(hù)血管正常功能的作用［3］。我們擬從保護(hù)腸壁血管免受放射線損傷的角度，來尋求慢性放射性腸炎的防治措施，于2010年4月至2011年5月進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，觀察了魚油對(duì)慢性放射性腸炎的預(yù)防作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 雄性SD大鼠30只(蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重180～200 g，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，適應(yīng)環(huán)境1周后用于實(shí)驗(yàn)。采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為3組，每組10只。實(shí)驗(yàn)組放射前7天每天定時(shí)予魚油(0.6 ml/100 g)灌胃1次。對(duì)照組放射前7天每天定時(shí)予生理鹽水(0.6 ml/100 g)灌胃1次。正常組不予放射，同期予生理鹽水(0.6 ml/100 g)灌胃7天。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 PRIMUS-M型直線加速器(德國西門子公司);SIMULIX-HO型模擬定位機(jī)(荷蘭核通公司);魚油(Sigma公司);大鼠白細(xì)胞介素(IL)-1、IL-6、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，ELISA 試劑盒和內(nèi)毒素ELISA試劑盒(RB公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 照射前準(zhǔn)備 2%戊巴比妥鈉溶液(40 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。將大鼠仰臥，四肢展開，固定于木板上。模擬機(jī)下定位照射野:上至劍突，下至恥骨聯(lián)合，側(cè)至腹壁，其余部位用鉛塊遮擋屏蔽。3組大鼠都給予相同照射前準(zhǔn)備處理。

1.3.2 照射條件 直線加速器7 MeV電子線，放射源到皮膚距離100 cm，照射野面積5.5 cm×5.5 cm，垂直單次照射，每只大鼠照射劑量10 Gy。照射后自由進(jìn)食。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠給予照射，正常組大鼠不給予照射。

1.3.3 檢測方法 放射8周后處死大鼠，無菌操作獲取標(biāo)本。左側(cè)髂總動(dòng)脈采血2 ml，入抗凝管，20℃放置2小時(shí)，離心(5000 rpm，5 min)，取上層血漿，-70℃保存待測。切取距回盲部5～10 cm間腸段，10%福爾馬林液保存，留作病理觀察。ELISA法測定血漿IL-1、IL-6、TNF-α和內(nèi)毒素含量。按試劑盒說明進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間方差齊性分析采用F檢驗(yàn)，兩組間差異性比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠腸壁病理改變情況 正常組大鼠腸絨毛結(jié)構(gòu)茂盛，可見大量杯狀細(xì)胞，黏膜下層無淋巴細(xì)胞浸潤(圖1)。對(duì)照組大鼠腸黏膜變薄，局部腸絨毛消失，腺體扁平，杯狀細(xì)胞明顯減少，黏膜下層大量淋巴細(xì)胞浸潤，部分形成生發(fā)中心樣結(jié)構(gòu)(圖2)。實(shí)驗(yàn)組大鼠腸黏膜厚度基本正常，腸絨毛稍矮于正常組，杯狀細(xì)胞減少不明顯，黏膜下層少量淋巴細(xì)胞浸潤(圖3)。

圖1 正常組大鼠腸黏膜病理(HE×200);圖2 對(duì)照組大鼠腸黏膜病理(HE×200);圖3 實(shí)驗(yàn)組大鼠腸黏膜病理(HE×200)

2.2 3組大鼠血漿 IL-1、IL-6、TNF-α及內(nèi)毒素含量比較 對(duì)照組大鼠血漿IL-1、IL-6、TNF-α及內(nèi)毒素含量明顯高于正常組和實(shí)驗(yàn)組(均P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿IL-1含量約為對(duì)照組的1/2，IL-6含量約為其1/3，TNF-α含量約為其1/4，內(nèi)毒素含量約為其1/2。3組血漿 IL-1、IL-6、TNF-α及內(nèi)毒素含量比較見表1。

表1 3組血漿IL-1、IL-6、TNF-α及內(nèi)毒素含量比較 (pg/ml)

3 討論

進(jìn)行性血管炎導(dǎo)致微動(dòng)脈和小動(dòng)脈閉塞，是慢性放射性腸炎的病理學(xué)基礎(chǔ)［2］。其進(jìn)行性發(fā)展導(dǎo)致腸壁缺血，黏膜萎縮變薄，出現(xiàn)腸狹窄、梗阻、穿孔和瘺等臨床表現(xiàn)［4］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)放射8周后對(duì)照組大鼠出現(xiàn)腸黏膜變薄，局部腸絨毛消失等慢性放射性腸炎表現(xiàn)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［5］。魚油組大鼠腸黏膜厚度基本正常，提示魚油可減輕放射線對(duì)腸壁的損傷，對(duì)慢性放射性腸炎有預(yù)防作用。

放射線導(dǎo)致腸壁損傷，腸屏障功能障礙，出現(xiàn)細(xì)菌易位，刺激免疫細(xì)胞釋放過量 IL-1、IL-6和TNF-α等炎性介質(zhì)，使腸壁血管內(nèi)皮細(xì)胞活化，促發(fā)慢性炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致腸壁動(dòng)脈閉塞性血管炎，血管炎再次加重腸壁損傷，形成腸屏障功能障礙—細(xì)菌移位—炎癥反應(yīng)—血管炎—腸屏障功能障礙惡性循環(huán)，進(jìn)行性發(fā)展，最終導(dǎo)致腸狹窄、梗阻、穿孔和瘺等慢性放射性腸炎臨床病變［6～8］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組大鼠血漿內(nèi)毒素、IL-1、IL-6和TNF-α含量明顯高于正常組大鼠，印證了細(xì)菌易位和炎癥反應(yīng)是慢性放射性腸炎的基礎(chǔ)病理生理過程。腸壁血管內(nèi)皮細(xì)胞是慢性放射性腸炎病程發(fā)展的重要參與者［5］。我們推測保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞正常功能，降低炎癥反應(yīng)，減輕血管炎的措施可能阻斷慢性放射性腸炎的病程。魚油的主要成分二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)具有對(duì)抗有害因素刺激內(nèi)皮細(xì)胞活化［9］，減少內(nèi)皮細(xì)胞炎性介質(zhì)合成［10］，維護(hù)血管正常功能的作用［3］，我們?cè)沂酒錂C(jī)制與魚油阻斷內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)［11］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，魚油組大鼠血漿內(nèi)毒素含量明顯低于對(duì)照組，證實(shí)魚油有維護(hù)受放射大鼠腸屏障功能，減少細(xì)菌易位的作用。魚油組大鼠血漿 IL-1、IL-6和TNF-α含量明顯低于對(duì)照組，證實(shí)魚油對(duì)受放射大鼠有抗炎作用，這可能得益于其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。

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