鮑勁松 白英歌

(呼倫貝爾市人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 海拉爾 021000)

嘎日迪－12由漏蘆花、多葉棘豆、麥冬、紅花、人工牛黃等12味藥組成。其中漏蘆花功能為殺“粘”、清熱解毒，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)其進(jìn)行蘆丁、槲皮素、山奈素的考察，結(jié)果未檢出明顯的色譜峰。紅花具通經(jīng)散瘀，消腫止痛功能，參照《中國(guó)藥典》2005年版一部紅花項(xiàng)下高效液相色譜法(附錄ⅥD)對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定，通過實(shí)驗(yàn)分析，結(jié)果分離效果和重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)。

1 儀器與試劑

LC－10ATvP泵，SCL－10AvP型控制器，SPD－10AvP型檢測(cè)器，CLass－vP色譜工作站。島津UV—1700型紫外—可見分光光度儀。HU3120B超聲波清洗器。羥基紅花黃色素A對(duì)照品(批號(hào):111637－200503):由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;嘎日迪－12由呼倫貝爾市鄂溫克旗蒙醫(yī)院提供。甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:本實(shí)驗(yàn)采用Dimonsi C18色譜柱 (250×4.6mm，5μm);甲醇 － 乙腈 －0.7%磷酸(26:2:72)(用三乙胺調(diào)pH至6.0±0.1)為流動(dòng)相;柱溫30℃;403nm作為檢測(cè)波長(zhǎng);對(duì)照品及樣品理論板數(shù)不低3000。進(jìn)樣量:10μL

2.2 供試品與對(duì)照的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備:取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成每1mL含15μg的溶液，即得。

2.2.2 樣品溶液的制備:取本品，研細(xì)，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，稱定重量，超聲(功率250w，頻率33kHz)40min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 提取效率的考察:以25%甲醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲提取，為保證被測(cè)成分的完全提取，實(shí)驗(yàn)中考察了超聲10、20、30、40min不同提取時(shí)間對(duì)提取效率的影響，含量測(cè)定結(jié)果見表1。從表中數(shù)據(jù)可見，超聲40min供試品中羥基紅花黃色素A的含量基本穩(wěn)定不變，故將提取時(shí)間定為超聲40min。

表1 羥基紅花黃色素A提取效率的考察

2.3.2 線性關(guān)系考察:取羥基紅花黃色素 A對(duì)照品約8mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加25%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻(0.0668 mg·mL－1)，精密吸取 1、2、4、5、8、10mL，分別置25mL量瓶中，加25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取10μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)對(duì)照品進(jìn)入的量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果羥基紅花黃色素A在0.00668μg～0.0668μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為 y=19639728x+4795.9，r=0.9998。標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值見表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值表

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn):溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，分別于 0、2、6、8、12h 進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。從表中數(shù)據(jù)可以看出，羥基紅花黃色素A在12h內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。2.3.4 精密度(重復(fù)性試驗(yàn)):取同一批號(hào)(20090802)供試品6份，各約2g，精密稱定，按擬定方法制備供試品溶液，測(cè)定每份供試品的含量，結(jié)果見表4。

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值表

表4 重復(fù)性試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果

2.3.5 準(zhǔn)確度(加樣回收試驗(yàn)):取供試品(含量為0.4328 mg·g－1)6份，各約1g，精密稱定，分別置6個(gè)具塞錐形瓶中，精密加入25mL25%甲醇，再精密加入用25%甲醇配制的羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液(羥基紅花黃色素A濃度0.0168 mg·mL－1)25mL，分別按擬定方法制備供試品溶液，測(cè)定每份的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表5。

表5 羥基紅花黃色素A加樣回收試樣結(jié)果

2.3.6 耐用性實(shí)驗(yàn):換不同的廠家，不同型號(hào)的色譜柱，取樣品重復(fù)性試驗(yàn)中的1號(hào)、2號(hào)供試品及對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣，測(cè)定含量。結(jié)果見表6。

表6 不同色譜柱的耐用試驗(yàn)

2.3.7 樣品含量測(cè)定:取本品按擬定方法制備供試品溶液，測(cè)定3批樣品的測(cè)定結(jié)果見表7。

表7 樣品中羥基紅花黃色素A含量測(cè)定結(jié)果

2.3.8 專屬性考察:陰性對(duì)照試驗(yàn):按擬定方法制備供試品溶液和對(duì)照品溶液。另取按處方比例并以相同工藝制備的缺紅花的陰性對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備法制得的陰性對(duì)照溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)得結(jié)果為:陰性對(duì)照色譜圖中在與羥基紅花黃色素A對(duì)照品以及供試品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對(duì)羥基紅花黃色素A的測(cè)定無干擾。見圖 1、2、3。

圖1 對(duì)照品圖譜

圖2 供試品圖譜

圖3 陰性對(duì)照?qǐng)D譜

3 小結(jié)

采用高效液相色譜法對(duì)嘎日迪－12散進(jìn)行了羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定，該方法簡(jiǎn)便快速，經(jīng)加樣回收試驗(yàn)及精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、耐用性等試驗(yàn)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為該藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定了良好的基礎(chǔ)。