菅艷艷 楊永利

(1.內(nèi)蒙古包頭市藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 包頭 014030;2.內(nèi)蒙古包頭市婦幼保健所，內(nèi)蒙古 包頭 014030)

沙日崩－8湯為黃花蒿、草烏芽、瞿麥、甘草、玉簪花等8味藥組成的復(fù)方制劑，屬于蒙藥驗方，至今尚無質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。甘草為處方中的主藥，筆者選用本品中甘草的主要成分甘草酸作為檢測指標(biāo)。采用高效液相色譜法對本品中的甘草酸建立含量測定方法。

1 儀器與試藥

島津LC—10ATvp泵，SPD－10Avp型檢測器，進樣器為島津SIL－10AF，CLASS－VP工作站，sartorious BP211D型電子天平，METTLER TOLEDO AB104型電子天平，UV－1100紫外－可見分光光度儀。沙日崩－8湯(包頭市蒙中醫(yī)院提供，批號為090416、090518、090622)。甘草酸單銨鹽(批號:110731－200615，供含量測定用):中國藥品生物制品檢定所;乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純)，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:色譜柱:色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實驗研究采用phenomenex Gemini C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流動相:乙腈 －0.017mol/L－1磷酸(35:65)為流動相，在該條件下，甘草酸單銨鹽具有較好的保留時間，與其他雜質(zhì)分離完全，且峰形好，陰性樣品不干擾測定，理論板數(shù)較高，甘草酸單銨鹽的理論板數(shù)為3000以上。

檢測波長的選擇:精密稱取甘草酸對照品適量，用60%甲醇制成1ml含0.1mg的溶液，在200～600nm波長范圍掃描。結(jié)果:甘草酸在250.0nm處有最大吸收。參照中國藥典2005年版第59頁甘草含量測定項下甘草酸的測定方法，故選擇250.0nm作為檢測波長。

2.2 對照品溶液的制備:取甘草酸單銨鹽對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液(相當(dāng)于每1mL含甘草酸97.95μg)，即得。見圖1。

圖1 對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對照品色譜圖

2.3 供試品溶液的制備:取樣品，研細，取約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 －0.017mol/L－1磷酸(13:7)的混合溶液50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率350W，頻率40KHz)40分鐘，放冷，再稱定重量，用上述混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。見圖2。

2.4 陰性對照液的制備:按處方配比取缺甘草的陰性對照3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 －0.017mol/L－1磷酸(13:7)的混合溶液50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率350W，頻率40KHz)40min，放冷，再稱定重量，用上述混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。見圖3。

2.5 線性關(guān)系考察:精密稱取甘草酸單銨鹽對照品12.5mg(實際為12.11mg)，置50mL量瓶中，加60%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取 1、2、4、6、8和 10mL，分別置10ml量瓶中，用60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取10μL進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對對照品進樣量進行回歸分析，結(jié)果甘草酸在0.2372～2.3723μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為:Y=724077.29X+8347.76 ，r=0.999。

標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值表

2.6 提取效率的考察:取同一份樣品(批號:090614)以甲醇－0.017mol/L－1磷酸溶液(13:7)作為提取溶劑進行超聲提取(功率350W，頻率40kHz)，實驗中考察了超聲提取30min、40min和50min不同超聲提取時間對提取效率的影響，含量測定結(jié)果見表2。

表2 提取效率結(jié)果表

從表中數(shù)據(jù)可見，超聲處理30min甘草酸的含量稍低，超聲處理40min和50min甘草酸的含量基本一致，故超聲提取時間定為40min。

2.7 穩(wěn)定性試驗:取同一份樣品(批號:090614)溶液，分別在 0h、4h、8h、12h 進行測定，結(jié)果見表3。

表3 不同時間測定樣品中甘草酸的峰面積積分值

從表中數(shù)據(jù)可見，甘草酸單銨鹽在12小時內(nèi)峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。

2.8 重復(fù)性試驗:取同一批號(090614)供試品6份，按樣品測定項處理，分別測定甘草酸的含量，其RSD為1.1%。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性好。結(jié)果見表4。

表4 甘草酸含量重現(xiàn)性試驗結(jié)果

2.9 加樣回收率試驗:加樣回收試驗 取供試品(批號:090416，含量 1.62mg·g－1)9 份，各約 1.5g，精密稱定，再分別在其中3個具塞錐形瓶中各精密加入濃度為0.2372mg/ml的甘草酸對照品60%甲醇溶液5mL(約相當(dāng)于供試品含有量的50%)及甲醇 －0.017mol/L－1磷酸溶液(13:7)45ml、另3個具塞錐形瓶中各精密加濃度為0.8584mol/L－1的甘草酸對照品60%甲醇溶液3mL(約相當(dāng)于供試品含有量的100%)及甲醇－0.017mol/L－1磷酸溶液(13:7)47mL、其余3個具塞錐形瓶中各精密加入濃度為0.8584mg·ml－1的甘草酸對照品60%甲醇溶液5mL(約相當(dāng)于供試品含有量的150%)及甲醇 －0.017mol/L－1磷酸溶液(13:7)45mL，分別稱定重量，超聲處理40min，取出，再稱重，用甲醇－0.017mol/L－1磷酸溶液(13:7)補足減失的重量，搖勻，濾過。各取續(xù)濾液10μL進樣，測定每份含量，計算回收率，結(jié)果見表5。結(jié)果表明本方法回收率良好。

表5 甘草酸加樣回收率試驗結(jié)果

2.10 樣品測定:取本品按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)【含量測定】項下的方法處理并測定，3批樣品的測定結(jié)果見表6。

表6 樣品中甘草酸含量測定結(jié)果

2.11 藥材的含量測定:實驗中分別用上述的方法和藥典方法對上述3批樣品中使用的甘草藥材進行了含量測定，測定結(jié)果見表7。

表7 甘草藥材中甘草酸含量測定結(jié)果

按理論值折算，成品應(yīng)含甘草酸1.89mg·g－1，轉(zhuǎn)移率=1.67/1.89 ×100%=88.4.0%(以模擬樣計算)?！吨袊幍洹?005年版一部甘草項下規(guī)定:含甘草酸(C42H62O16)不得少于2.0%。含量低限=1772/15001×2.0% ×1000×88.4% ×90%=1.88mg·g－1。因此暫定本品每 1g 含甘草以甘草酸(C42H62O16)計，不得少于1.8mg。

3 討論

沙日崩－8湯作為蒙醫(yī)驗方，尚無質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本研究旨在建立對其中的主藥的含量測定方法，通過測定主藥中目標(biāo)成分的含量，從而有效地進行質(zhì)量控制。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版一部，59－60