袁玉榮 滕林 余旻 劉先哲

【摘要】目的 檢測Ⅳ型膠原及基質(zhì)金屬蛋白酶-9在多器官功能障礙綜合征（MODS）大鼠腎組織及血清中變化，探討細(xì)胞外基質(zhì)的破壞與MODS腎功能衰竭的關(guān)系。方法 實驗在三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗中心完成。將40只成年雄性SD大鼠（隨機數(shù)字表法）分為健康對照組（8只）、MODS模型組（32只），模型組又分為造模后6、12、24、48 h不同時點，每組8只。 采用“二次打擊”即眼球失血加腹腔注射脂多糖（LPS）制備MODS模型：大鼠左眼球取血2 ml/100g,在放血4 h后予無菌腹腔注射LPS 5 mg/kg。對照組予以腹腔注射等量的生理鹽水，造模完成后在不同的時相點搜集標(biāo)本。血生化檢測各組血清肌酐（Cr）及尿素氮（BUN）的變化；光鏡及電鏡觀察腎組織的形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)變化；酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測血清中Ⅳ型膠原及MMP-9的濃度變化；western印跡技術(shù)測定腎組織中Ⅳ型膠原及MMP-9的蛋白水平。組間比較采用單因素方差分析（SNK法）。結(jié)果 （1）與對照組相比，MODS組各個時點腎功能損害較為明顯，Cr及BUN均明顯增高(P＜0.05)。（2）光鏡下對照組腎組織結(jié)構(gòu)無改變；MODS組腎組織損傷較重。電鏡下對照組腎組織基底膜膠原纖維連續(xù)完整，MODS組腎組織基底膜水腫、膠原纖維分布缺損明顯。（3）與對照組比較，造模后6～48 h，MODS組大鼠血清中MMP-9水平均明顯增高，于造模后12 h達(dá)到高峰(P＜0.05)。造模后血清Ⅳ型膠原的質(zhì)量濃度各組均高于對照組，6～12 h組升高不明顯（P＞0.05），24～48 h顯著高于對照組(P＜0.01)。(4) 造模后腎組織MMP-9的濃度6～12 h比對照組明顯增加（P＜0.01），24 h達(dá)到高峰（P＜0.01），隨后48 h下降。造模后各組腎組織Ⅳ型膠原的質(zhì)量濃度均較對照組明顯降低 (P＜0.05)。結(jié)論 細(xì)胞外基質(zhì)的破壞是引起MODS腎損傷的一個重要因素，可能成為MODS 早期腎功能損害的診療和干預(yù)靶點。

【關(guān)鍵詞】多器官功能障礙綜合征；基質(zhì)金屬蛋白酶-9 ；內(nèi)皮細(xì)胞；細(xì)胞外基質(zhì)；Ⅳ膠原；脂多糖；全身炎癥反應(yīng)綜合征；二次打擊；大鼠

Observation of extracellular matrix damage in the kidney of rats with multiple organ dysfunction syndrome YUAN Yu-rong， TENG Lin，YU Min， LIU Xian-zhe. The People's Hospital of Three Gorges University, The first People's Hospital of Yichang , Yichang 443000, China

Corresponding author: LIU Xian-zhe, Email: yxylxz@ctgu.edu.cn

【Abstract】Objective To determine the levels of type Ⅳ collagen and matrix metalloproteinase-9（MMP-9）in the serum and kidney of rats with the multiple organ dysfunction syndrome （MODS）and investigate the mechanism of extracellular matrix damage in renal failure of MODS. Methods Forty adult male Sprague-Dawley（SD）rats were randomly (ramdom number) divided into two groups, namely the normal control group (n=8) and the MODS model group (n=32). The rats of model group were further divided into four sub-groups as per different intervals, 6 h, 12 h, 24 h and 48 h, after modeling (n=8 in each). The animal models of MODS were established by two hits, the left eyeball of each model rat was removed to bleed to 2 ml blood/100 g body weight and lipopolysaccharide (LPS, 5 mg/kg) was injected into intraperitoneal cavity of model rats four hours later. The same volume of saline instead was injected intraperitoneally into rats of control group. All rats were sacrificed at different intervals. Creatinine （Cr）and blood urea nitrogen (BUN) were determined by using a Hitachi Automatic Biochemical Analyzer. The histological changes in renal tissue were observed under light microscope and transmission electronic microscope. The levels of serum type Ⅳ collagen and MMP-9 protein were measured by using enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Type Ⅳ collagen and MMP-9 protein levels in renal tissue were detected by western blot. One-way ANOVA was used for comparison among multiple groups. Results Compared with the control group, Cr and BUN were significantly higher in MODS group (P<0.05). There were no histopathological changes in kidney of rats in control group, and the renal injury was serious in rats with MODS. The remarkable edema of basement membrane and defect of collagen fibers in renal tissue were observed in MODS group. Compared with the control group, the levels of MMP-9 in serum increased 6-48 hours after modeling and peaking at interval of 12 hours after modeling (P<0.05). The protein levels of type Ⅳ collagen increased not significantly in 6 h group and 12 h group in comparison with control group (P>0.05), while those in 24 h group and 48 h group significantly increased (P<0.01). The levels of MMP-9 in renal tissue of rats with MODS increased in 6 h group and 12 h group（P<0.05）, peaked in 24 h group（P<0.05）, and decreased in 48 hours. However, the level of Ⅳ collagen in serum of rats with MODS decreased significantly 6-48 hours after modeling（P<0.05） Conclusions The injury of extracellular matrix is an important factor to the kidney damage in MODS and it may be used for early diagnose and as a treatment target for kidney injury in MODS.

【Key words】Multiple organ dysfunction syndrome；Matrixmetalloproteinase-9；Endothelial cell；Extracellular matrix； Collagen Ⅳ； Lipopolysaccharide； Systemic inflammatory response syndrome；Two hits；Rat

多器官功能障礙綜合征是臨床危重患者死亡的主要原因之一^［1］。業(yè)已證明，內(nèi)皮細(xì)胞的激活和損傷是引起MODS器官功能障礙的基礎(chǔ)^［2-4］ , 而細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）作為內(nèi)皮細(xì)胞直接生存和活動的場所，對細(xì)胞的一切生理活動具有重要的影響，目前關(guān)于ECM的損傷在MODS病理過程中的作用及其與組織器官損傷衰竭之間的關(guān)系仍不清楚。筆者以往的臨床和基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，通過對膿毒癥和MODS發(fā)病過程中內(nèi)皮損傷及降解ECM的主要標(biāo)志物——血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）以及基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的檢測，初步驗證了內(nèi)皮細(xì)胞和ECM的損害可能是導(dǎo)致MODS器官損傷的共同環(huán)節(jié)^［5-8］ 。

ECM 由膠原、非膠原糖蛋白和蛋白多糖構(gòu)成，在膠原成分中，最重要的是Ⅳ膠原蛋白，是ECM主要骨架蛋白之一。Ⅳ型膠原是典型的基質(zhì)膠原，在腎組織中可由活化的腎小球系膜細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞等合成和分泌^［9］。因此，Ⅳ型膠原的合成及降解是許多腎臟疾病發(fā)展、ECM 損傷、終至腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化的主要原因或重要參與因素之一。MMP-9作為ECM的主要降解酶之一，其主要作用底物正是ECM中的結(jié)構(gòu)成分Ⅳ型膠原，目前關(guān)于MODS時直接觀察損傷衰竭器官ECM的狀態(tài)改變國內(nèi)外尚未見報道。因此，本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，選擇了Ⅳ型膠原作為觀察ECM損傷的指標(biāo),并與其主要的降解酶MMP-9同時檢測分析，進(jìn)一步探討ECM的破壞在MODS腎功能衰竭中的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

40只健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體質(zhì)量250～300 g，由華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供，符合國家醫(yī)用動物使用標(biāo)準(zhǔn)（許可證號：SCXK(鄂)2010-0007，等級：SPF），動物予以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由攝食飲水，22～30 ℃條件下飼養(yǎng)兩周后實驗，實驗前禁食12 h，禁飲4 h。

1.2 材料

脂多糖（LPS，E.coli.O55:B5）由美國Sigma公司提供；血清MMP-9 及Ⅳ型膠原ELISA試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供；MMP-9、Ⅳ型膠原抗體由武漢博士德試劑公司提供。日本Olympus公司光學(xué)顯微鏡，日本日立公司H-7500透射電鏡，美國寶特800酶標(biāo)儀，德國Leica公司TP1020型脫水機、德國Leica公司CM1800型恒冷箱切片機、德國Leica公司DMR型多功能顯微鏡及圖象分析系統(tǒng)。

1.3 動物的分組和模型制備

實驗動物稱重后按隨機數(shù)字表法將大鼠分為健康對照組（8只）、MODS模型組（32只），模型組又分為造模后6，12，24，48 h不同時相，每組8只。參照并改良陳德暉等 ^［10］“二次打擊”方法和標(biāo)準(zhǔn)制備MODS大鼠模型：采用左眼球取血2 ml/100 g，4 h后以5 mg/kg無菌腹腔注射LPS。對照組予以腹腔注射等量的生理鹽水。造模后在各時相點將動物腹腔注射3%戊巴比妥鈉（30 mg/kg）麻醉后，常規(guī)消毒皮膚, 對應(yīng)時間點迅速打開胸腔及腹腔，立即心臟采血4 ml，離心提取血清，冰箱保存，備查MMP-9及Ⅳ型膠原。取腎臟，用生理鹽水洗去血液，按免疫組化、光鏡及電鏡切片要求，取適量腎組織，置于10%甲醛溶液固定，盡量做到取材部位大致相同。

1.4 腎功能測定

采用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血清肌酐（Scr）及尿素氮（BUN）。

1.5 腎臟病理形態(tài)學(xué)檢查

（1）光鏡觀察 將所取腎組織浸泡在10%中性甲醛中固定24 h，常規(guī)梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，作厚為4 μm的連續(xù)切片。切片貼于經(jīng)10%多聚賴氨酸處理過的玻片，60 ℃烤片過夜，HE染色，在光鏡下觀察其組織形態(tài)學(xué)改變。

（2）透射電鏡觀察 標(biāo)本經(jīng)2.5％戊二醛前固定，1%的鋨酸緩沖液4 ℃后固定2 h，乙醇梯度脫水，環(huán)氧樹脂（Epon812）滲透，平板包埋，用超薄切片機切厚約70 nm的超薄切片，載膜銅網(wǎng)撈片，醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛雙重染色，透射電鏡觀察各組腎組織超微結(jié)構(gòu)并攝片。

1.6 ELISA檢測血清中MMP-9及Ⅳ型

膠原的水平嚴(yán)格按照ELISA試劑盒操作說明書進(jìn)行檢測。（1）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。（2）試劑盒平衡至室溫，配置工作液。（3）加入100 μl標(biāo)準(zhǔn)品、血清于反應(yīng)板孔中，將反應(yīng)板充分混勻后置37 ℃120 min。（4）洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌5次，向濾紙上印干。（5）每孔加入第一抗體工作液Biotinylated Antibody 100 μl ，將反應(yīng)板充分混勻后置37 ℃ 60 min后洗滌5次。（6）每孔加酶標(biāo)抗體工作液Enzyme Conjugate 100 μl。將反應(yīng)板置37 ℃ 30 min，再洗滌5次。（7）每孔加入底物工作液TMB Solution 100 μl，置37 ℃暗處反應(yīng)15 min。（8）每孔加入100 μl終止液，30 min內(nèi)用酶標(biāo)儀在450 nm處測吸光值。ELISA結(jié)果計算與判斷：所有OD值減除空白值后再行計算，以標(biāo)準(zhǔn)品20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0 ng/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)含量以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的濃度。

1.7 western印跡技術(shù)檢測腎組織中MMP-9

及Ⅳ型膠原的蛋白水平應(yīng)用western印跡技術(shù)檢測腎組織中MMP-9及Ⅳ型膠原的蛋白表達(dá)。組織塊用冷TBS洗滌2～3次，去除血污，剪成小塊置于勻漿器。加入10倍組織體積組織裂解液體，提取組織總蛋白溶液， 采用Bradford方法進(jìn)行蛋白定量。制備分離膠進(jìn)行電泳，每孔加入蛋白含量約20 μg，8%質(zhì)量濃度的SDS-PAGE電泳后PVDF轉(zhuǎn)膜。5%脫脂奶室溫封閉1 h后加入一抗（1∶ 200稀釋），4℃搖床過夜，用TBST室溫下脫色搖床下洗滌3次，再加入生物素標(biāo)記的二抗（1∶ 3000），搖床常溫孵育1 h , TBST洗滌，ECL發(fā)光，X線底片曝光, 顯影及定影, 條帶的灰度值以β-actin作為內(nèi)參。對電泳條帶掃描及圖像分析，重復(fù)3次后得出條帶的平均吸光度（A）分析。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，先進(jìn)行數(shù)據(jù)的正態(tài)分布檢驗（Kolmogorov-Smirnov），方差齊性檢驗，組間比較采用單因素方差分析（SNK-q法），以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠基本情況

對照組大鼠無死亡，MODS模型組12 h死亡2只，24 h死亡3只，48 h死亡1只。對照組活動如常，精神可，無拉稀便。6～24 h存活大鼠均精神萎靡，少動，反應(yīng)遲鈍；毛松，毛色無光澤；拉稀便，進(jìn)食少，體質(zhì)量減輕。48 h組動物有所恢復(fù)，精神狀態(tài)開始好轉(zhuǎn)，毛色轉(zhuǎn)有光澤。

2.2 對照組與MODS組腎功能的變化

與對照組相比較，MODS模型組各時間點Cr及BUN均顯著升高（P＜0.05），24 h腎功能損害達(dá)到高峰（P＜0.01），其后48 h組有所下降，但仍高于對照組（P＜0.05）。見表1。

2.3 對照組與MODS組腎組織病理形態(tài)學(xué)檢查

2.3.1 光鏡觀察 對照組腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)基本正常。6 h可見腎單位萎縮，大小不一，部分代償性擴大。12～24 h腎小球毛細(xì)血管多擴張充血，出血，毛細(xì)血管腔內(nèi)有中性粒細(xì)胞浸潤。系膜細(xì)胞輕至中度增生，系膜區(qū)擴大。腎小管內(nèi)皮細(xì)胞顯示廣泛而顯著的濁腫、空泡變性和壞死，腎間質(zhì)及集合管血管擴張，充血。48 h腎小球擴張充血，少部分腎小球萎縮，腎小管上皮輕度濁腫。見圖1。

2.3.2 電鏡觀察 電鏡下對照組基底膜膠原纖維連續(xù)完整，近、遠(yuǎn)曲小管細(xì)胞規(guī)整，近曲小管細(xì)胞微絨毛排列整齊緊密，線粒體無腫脹，基質(zhì)豐富均勻，腎小球濾過膜3層結(jié)構(gòu)完整清晰。6 h可見基底膜疏松輕度水腫，近曲小管上皮細(xì)胞微絨毛輕度腫脹增粗, 腎小球基本正常。12～24 h可見腎組織基底膜水腫、膠原纖維分布缺損明顯。大部分腎小球上皮細(xì)胞足突有不規(guī)則融合。上皮細(xì)胞變性、壞死，腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)水腫, 個別退變壞死；48 h仍可見腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及足突水腫，基底膜膠原纖維稀疏。見圖2。

2.4 血清中MMP-9及Ⅳ型膠原的蛋白質(zhì)量濃度變化

與對照組比較，造模后6～12 h，MODS組大鼠血清中MMP-9質(zhì)量濃度即高于對照組（P＜0.05），于造模后12 h達(dá)到高峰（P＜0.01），24～48 h開始下降，但仍然高于對照組（P＜0.01）。見圖3。造模后血清Ⅳ型膠原的質(zhì)量濃度各組均高于對照組。6～12 h開始升高，但幅度較緩，與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），24 h升高明顯（P＜0.01），至48 h上升變緩，但仍顯著高于對照組（P＜0.01）。見圖4。

2.5 腎組織MMP-9及Ⅳ型膠原的蛋白表達(dá)

各組大鼠腎組織中均能觀察到MMP-9的蛋白表達(dá)，與對照組比較，在造模后6～12 h MMP-9的濃度比對照組明顯增加（P＜0.01），24 h達(dá)到高峰（P＜0.01），隨后48 h下降，仍顯著高于對照組（P＜0.01）。見圖5。與對照組相比，造模后各組腎組織Ⅳ型膠原的質(zhì)量濃度明顯降低，6 h組與對照組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其最低值見于造模后24 h（P＜0.01），至48 h腎組織Ⅳ型膠原的質(zhì)量濃度有輕度升高，但仍顯著低于對照組（P＜0.01）。見圖6。

3 討論

MMPs是一組能降解ECM分子的鋅依賴性蛋白酶，對ECM有廣泛的降解作用是調(diào)節(jié)ECM動態(tài)平衡的最重要的一大酶系。在腎組織中，MMP-9主要由腎小球系膜細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等合成及分泌^［11］。Ⅳ型膠原是一種大分子物質(zhì)，是基底膜的固有成分，也是構(gòu)成腎小球ECM骨架的主要成分。MMP-9的水平可以反映腎基底膜膠原蛋白特別是Ⅳ型膠原的代謝狀態(tài)，隨著膠原合成增加及降解減少，MMP-9在血清中水平會相應(yīng)降低和升高^［12-13］。正常情況下MMP-9的表達(dá)量很少, 但在細(xì)菌毒素、細(xì)胞因子等外源性和內(nèi)源性因素的刺激下, 活化的中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等可釋放大量的MMP-9, 從而破壞血管基底膜及組織結(jié)構(gòu), 導(dǎo)致組織損傷^［14-15］；同時內(nèi)皮細(xì)胞失去了生存和活動的依托, 促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡, 使內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生不可逆的損傷^［16-17］。

在本研究中造模后不同時相點腎組織Ⅳ型膠原的質(zhì)量濃度均比對照組明顯降低，且電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，MODS組腎組織基底膜水腫、膠原纖維分布稀疏，部分缺損明顯，提示在MODS病變發(fā)生發(fā)展過程中存在Ⅳ型膠原代謝及調(diào)節(jié)異常情況。在靶器官內(nèi)皮損傷的過程中，伴隨著細(xì)胞外骨架蛋白Ⅳ型膠原的破壞，且隨著時間的延長，Ⅳ型膠原的組織濃度越來越低，說明ECM的破壞逐漸加重，而且與不同時相點的腎功能、病理損傷程度和表現(xiàn)相一致，研究結(jié)果表明，在MODS 腎衰竭發(fā)生的早期由于大量炎癥介質(zhì)的釋放而導(dǎo)致ECM的破壞，ECM的破壞參與了MODS腎損傷至衰竭的病理過程。正常情況下血清中Ⅳ型膠原的濃度很低，在本研究中，MODS模型組血清Ⅳ型膠原的濃度伴隨著病情的進(jìn)展逐漸升高，在最初的6～12 h變化幅度較小，24 h顯著增高并達(dá)到高峰，至48 h上升變緩，但仍顯著高于對照組。已有報道證實在基底膜受到損傷時，Ⅳ型膠原從基底膜降解脫落，其抗原決定簇進(jìn)入外周血中，通過放射免疫學(xué)檢測可發(fā)現(xiàn)其血清濃度升高^［17］，這是ECM損傷的一面，與本實驗檢測的結(jié)果相一致。另外筆者考慮，在MODS病情發(fā)生發(fā)展的早期，由于受到外界因素導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞和基質(zhì)的損傷，機體保護性代償機制來不及完善。但是隨著外界刺激及病情的加重，機體出現(xiàn)了保護代償性修復(fù)，體內(nèi)有許多細(xì)胞合成分泌Ⅳ型膠原也相應(yīng)增多，這也極有可能是機體防御性修復(fù)導(dǎo)致血清Ⅳ型膠原增高的因素之一。因此在本實驗中觀察到了Ⅳ型膠原血清學(xué)與組織中的濃度背道而馳的現(xiàn)象。作為ECM的主要降解酶之一，血清及腎組織中MMP-9質(zhì)量濃度亦有顯著性升高。在造模后6～48 h均高于對照組，而且血清和腎組織中的濃度在各個時相點的增加具有同步性，這說明在腎功能障礙的過程中，由于MMP-9的大量釋放引起ECM降解導(dǎo)致腎臟損傷逐漸加重，ECM的破壞是引起MODS腎損傷并最終導(dǎo)致衰竭的密切相關(guān)因素，可以通過檢測Ⅳ型膠原的濃度來反應(yīng)ECM的破壞情況，對MODS 的組織器官功能損傷做出早期診斷，為及時干預(yù)ECM的過度降解、保護組織器官的功能提供重要依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

［1］周榮斌, 于學(xué)忠. 多器官功能障礙綜合征——困惑與思考，挑戰(zhàn)與對策［J］. 中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2007,16(12):1237-1238.

［2］ William CA. The role the endothelium in severe sepsis and multiple organ dysfunction syndrome ［J］. Blood, 2003, 101 (23): 3765-3777.

［3］ Hack CE, Zeerleder S. The endothelium in sepsis: source of and a target for inflammation ［J］. Crit Care Med, 2001, 29 Suppl 7: 21-27.

［4］ Vallet B. Bench-to-bedside review: endothelial cell dysfunction in severe sepsis: a role in organ dysfunction? ［J］. Crit Care, 2003, 7(2): 130-138.

［5］ 余旻, 劉先哲, 鄧群，等. 血栓調(diào)節(jié)蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶在膿毒癥及多器官功能障礙綜合征中的意義［J］. 中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2006,15(6):558-561.

［6］ 滕林, 余旻, 李俊明，等. 多器官功能障礙綜合征大鼠血清及肝組織中基質(zhì)金屬蛋白酶9的表達(dá)及意義［J］. 中國急救醫(yī)學(xué), 2011, 31（4）:331-334.

［7］ 滕林, 余旻, 李俊明，等. 基質(zhì)金屬蛋白酶9在多器官功能障礙綜合征大鼠腎組織的表達(dá)［J］. 中華腎臟病雜志, 2010, 26(3)：223-224.

［8］ 滕林, 余旻, 李俊明，等. 多器官功能障礙綜合征大鼠肺組織血栓調(diào)節(jié)蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)［J］. 中華急診醫(yī)學(xué)雜志, 2009, 18(10): 1031-1036.

［9］ Erickson AC, Couchman JR. Still more complexity in mammalian basement membranes ［J］. J Histochem Cytochem., 2000, 48 (10): 1291-1306.

［10］陳德暉，黎毅敏，陳福雄，等. 兩次打擊大鼠所致多器官功能障礙綜合征動物實驗?zāi)Ｐ偷慕⒓安±碛^察［J］. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志， 2006, 5(3): 273-275.

［11］ Suzuki D, Miyazaki M, Jinde k，et al. In situ hybridization studies of matrix metalloproteinase. Tissue inhibitor of metalloproteinase-l and type Ⅳcollagen in diabetic nephropathy ［J］. Kidney Int, 1997, 52(11):111-119.

［12］ Sheu JR,Fong Th,Liu CM,et al.Expression of matrix metalloproteinase-9 in human platelets:regulation of platelet activation in in vitro and vivo studies［J］. Pharmacol, 2004,143(1):193-201.

［13］ Wilson SR,Gallagher S,Warpeha K,et al.Amplification of MMP-2 and MMP-9 production by prostate cancercell lines via activation of protease-activated receptors［J］ .Pro-state,2004,60(2):168-174.

［14］ Brew K, Dinakarpandian D,Nagase H. Tissue lnhibitors of metalloproteinases: evolution , structure and function ［J］ . Biochim Biophys Acta , 2000 , 1477 (12) : 267-283.

［15］ Gando S, Nanzaki S, Morimoto Y, et al. Out of hospital cardiac arrest increases soluble vascular endothelial adhesion molecules and neutrophil elastase associated with endothelial injury ［J］.Intensive Care Med, 2000, 26(1):38-44.

［16］ Chen H, Inocencio R, Alam HB, et al. Differential expression of extracellular matrix remodeling genes in rat model of hemorrhagic shock and resuscitation ［J］.Surg Res , 2005 , 123 (2) : 235-244.

［17］ 李敬蘭,趙純平,林治庫，等.血清層粘連蛋白、透明質(zhì)酸檢測在癌癥與肝病的臨床意義［J］.中國綜合臨床,2002,18(2):126-127.

（收稿日期：2012-01-04）

（本文編輯：何小軍）

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2012.08.005：

作者單位:443000 湖北省宜昌，三峽大學(xué)人民醫(yī)院/湖北省宜昌市第一人民醫(yī)院（袁玉榮為三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生，現(xiàn)在湖北枝江七星臺醫(yī)院工作，滕林為上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2010級博士研究生，劉先哲、余旻）

通信作者：劉先哲，Email: yxylxz@ctgu.edu.cn

中華急診醫(yī)學(xué)雜志2012年8月第21卷第8期Chin J Emerg Med,August 2012,Vol.21,No.8

P819-824