方麗 陳獻(xiàn)花 李家忠 李雪來(lái) 趙金川 （浙江省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所 杭州 310009）

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復(fù)方卡波姆誘導(dǎo)的兔慢性高眼壓模型探討

方麗 陳獻(xiàn)花 李家忠 李雪來(lái) 趙金川 （浙江省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所 杭州 310009）

采用新西蘭兔16只，每只兔的左眼為模型眼，右眼為對(duì)照眼。注入復(fù)方卡波莫溶液0.3ml，測(cè)量眼壓、角膜厚度并觀察兔眼的變化。結(jié)果表明，16只兔均造模成功，在手術(shù)4周內(nèi)平均眼壓值為23~25mmHg，術(shù)后4周的實(shí)驗(yàn)眼平均眼壓仍有23.17mmHg，對(duì)照眼為14.33 mmHg，2組相比較有顯著性差異(P<0.05)。因此，兔眼前房注射復(fù)方卡波姆是一種理想的慢性高眼壓模型。

高眼壓 模型 動(dòng)物 卡波姆

青光眼是一種以視神經(jīng)損害和視野缺損為特征的致盲眼病，其發(fā)病機(jī)制目前尚不十分明確，普遍認(rèn)為眼壓升高是青光眼視神經(jīng)損害發(fā)生和發(fā)展機(jī)制中最主要的危險(xiǎn)因素[1]。通過(guò)實(shí)驗(yàn)方法誘導(dǎo)動(dòng)物高眼壓，是研究其發(fā)病機(jī)制的主要手段，而建立有效穩(wěn)定的高眼壓模型是進(jìn)行研究的關(guān)鍵[2]。因此，筆者在2010年9~11月用復(fù)方卡波姆誘導(dǎo)，建立兔眼慢性高眼壓模型，以眼壓、并發(fā)癥及病理檢查作為觀察指標(biāo)，評(píng)價(jià)其建模效果。

1 材料和方法

1.1 試劑與儀器 含0.3%卡波姆和0.025%地塞米松的復(fù)方卡波姆溶液，pH值4，卡波姆(山東正大福瑞達(dá)藥液集團(tuán)生產(chǎn))，0.5%地塞米松(廣州白云山天心制藥有限公司生產(chǎn))；手持接觸眼壓計(jì)(美國(guó)Reichert公司)；裂隙燈顯微鏡(蘇州六六視覺(jué)科技有限公司)；角膜A型超聲測(cè)量?jī)x(美國(guó)Alcon公司)；Nikon ECLIPSE E200光學(xué)顯微鏡。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及分組 新西蘭兔16只，雌雄不限，體重2~3kg，兔齡12周。由浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供[SCXK(浙)2008-0025]。造模前用裂隙燈顯微鏡、眼底鏡檢查眼前段及眼底無(wú)異常。每只動(dòng)物的左眼為模型眼，右眼為對(duì)照眼。

1.3 方法 新西蘭兔耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，0.4%倍諾喜眼液(鹽酸奧布卡因)液滴眼局部麻醉。試驗(yàn)眼注射復(fù)方卡波姆溶液前，先在對(duì)側(cè)角膜緣穿刺，然后注入復(fù)方卡波姆溶液0.3ml。對(duì)照眼單純角膜緣穿刺。測(cè)量眼壓、角膜厚度并觀察兔眼的變化。手術(shù)4周后耳緣靜脈注射空氣處死動(dòng)物，取雙側(cè)眼球，常規(guī)固定、脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察。

1.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所獲數(shù)據(jù)作配對(duì)資料的t檢驗(yàn)，使用excel進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，顯著標(biāo)準(zhǔn)P=0.05。

2 結(jié)果

2.1 眼壓變化 試驗(yàn)前雙眼眼壓無(wú)明顯差異(P>0.05)，基線眼壓為12.58mmHg，試驗(yàn)眼術(shù)后平均眼壓為37.3mmHg，眼壓峰值為55.5mmHg，時(shí)間為術(shù)后8h，術(shù)后4周的平均眼壓為23.17mmHg，對(duì)照眼為14.67mmHg，兩組相比差異顯著(P＜0.05)。

表1 實(shí)驗(yàn)眼、對(duì)照眼眼壓比較 (mmHg)

注：試驗(yàn)眼與對(duì)照眼相比，術(shù)后各時(shí)間段差異顯著(P＜0.05)。

2.2 眼前部、角膜變化 試驗(yàn)眼前房注射后均出現(xiàn)不同程度的睫狀充血、角膜水腫及前房混濁。1周左右達(dá)到高峰，角膜厚度為902.33mm，后逐漸下降，4周時(shí)仍有463.67mm，與術(shù)前395.67mm相比差異顯著(P＜0.05)。

表2 試驗(yàn)眼、對(duì)照眼角膜中心厚度比較 (mm)

注：試驗(yàn)眼與對(duì)照眼相比，術(shù)后各時(shí)間段差異顯著(P＜0.05)。

2.3 眼組織病理改變 試驗(yàn)眼角膜上皮組織有增生，可見(jiàn)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，部分小梁網(wǎng)纖維組織增生，變致密(圖1、2)。對(duì)照眼未見(jiàn)明顯異常(圖3、4)。

圖1 試驗(yàn)組(HE×40)

圖2 試驗(yàn)組(HE×100)

圖3 對(duì)照組(HE×40)

圖4 對(duì)照組(HE×100)

3 討論

青光眼作為人類主要致盲性眼病之一，對(duì)青光眼的發(fā)病機(jī)制、發(fā)展過(guò)程并不是十分明確，有效治療手段也欠缺，需要進(jìn)行大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行探討。選擇方法簡(jiǎn)單、成本低廉、易于操作、易于控制、眼壓穩(wěn)定的理想青光眼實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型十分必要。目前國(guó)內(nèi)外建立實(shí)驗(yàn)性青光眼模型的方法大致可分為3類[3]：一是破壞小梁結(jié)構(gòu)，引起房水流出受阻導(dǎo)致高眼壓的方法，如高滲鹽水注入房水靜脈，以及激光破壞小梁網(wǎng)組織等；二是從眼球外部來(lái)妨礙房水正常引流的方法，如增加上鞏膜靜脈壓力升高眼，結(jié)扎渦靜脈、結(jié)扎眼球后部的血管、熱灼燒或化學(xué)燒灼角膜緣結(jié)膜下組織、硅膠帶眼球環(huán)扎術(shù)等；三是阻塞房角流出道引起的高眼壓法，如前房?jī)?nèi)注入甲基纖維素、a糜蛋白酶、血影細(xì)胞、空氣、礦物油等。

復(fù)方卡波姆誘導(dǎo)的兔慢性高眼壓模型即為含0.3%卡波姆和0.025%地塞米松的復(fù)方卡波姆溶液注入前房阻塞房角流出道引起的。卡波姆是內(nèi)烯酸與烯內(nèi)基蔗糖或季戊四醇交鏈而成的高分子聚合物，是一種優(yōu)良的藥劑新輔料[4]。有良好的乳化性、增稠性、助懸性和成膜性。當(dāng)ph值較低時(shí)呈溶液狀，隨著ph值的升高，藥液的黏稠度逐漸增加而形成水凝膠狀；而當(dāng)ph值為6~12時(shí)最為黏稠；在高眼壓模型中主要應(yīng)用的是該藥的黏合性、凝膠性、增稠性等特點(diǎn)，使注入前房的卡波姆溶液在房水作用下隨著ph值的升高變?yōu)槟z狀阻礙房水排出。將卡波姆液中加入地塞米松的目的：一是增加眼壓升高的幅度及延長(zhǎng)眼壓升高的時(shí)間，二是減輕眼部炎性反應(yīng)。而對(duì)側(cè)角膜緣穿刺形成一個(gè)針孔，是由于注入復(fù)方卡波姆溶液過(guò)程中，眼內(nèi)容物突然增加，會(huì)造成眼內(nèi)壓急劇升高，房水在過(guò)高的壓力下會(huì)自動(dòng)從此針孔中滲漏出，防止兔眼角鞏膜擴(kuò)張。

本試驗(yàn)由復(fù)方卡波姆溶液誘導(dǎo)的高眼壓模型，操作簡(jiǎn)單，眼壓升高穩(wěn)定，4周后仍有23.17mmHg，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。雖然由于眼壓升高和炎癥刺激出現(xiàn)不同程度的睫狀充血、角膜水腫及前房混濁等情況，但大部分持續(xù)一段時(shí)間后可減輕或消失。試驗(yàn)術(shù)后8h眼壓即達(dá)到峰值，但角膜水腫情況為1周時(shí)最高，3周時(shí)結(jié)膜充血及前房滲出已經(jīng)不明顯，角膜厚度雖然仍比正常為高，但角膜已經(jīng)完全透明，眼壓仍高，還可持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，可進(jìn)行青光眼實(shí)驗(yàn)研究。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)病理改變顯示部分小梁網(wǎng)纖維組織增生，變致密，從病理上間接證明慢性青光眼模型建立成功。

兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，其成本低廉，雖然其房角與人的房角有明顯的形態(tài)學(xué)差異，如梳狀韌帶、狹窄薄弱的睫狀肌系統(tǒng)以及鞏膜靜脈叢，但兔的房水外流通道卻和人眼一樣，而且由于兔眼大小接近于人眼，可用于觀察手術(shù)對(duì)高眼壓模型的降眼壓作用，是理想的青光眼模型動(dòng)物。

[1] van Buskirk EM. Coiffi glaucomatous optic neuropathy[J]. Am Ophthalmol 1992,113(4): 447-451.

[2] 徐巖, 陳祖基, 宋潔貞. 復(fù)方卡波姆誘發(fā)的兔高眼壓模型與其它兔高眼壓模型的比較研究[J]. 中華眼科雜志, 2002, 38(3): 172-175.

[3] 陳曄, 崇曉霞. 慢性高眼壓動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志, 2008, 40(5): 519-522.

[4] 羅明生, 高天惠. 藥劑輔佐大全[M]. 成都: 四川科學(xué)技術(shù)出版社, 1995: 383-386.

（2011–11–03）

浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科研計(jì)劃項(xiàng)目2008F80008

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1007-1733(2012)01-0011-02