宋 革 王奇玲 劉興章 唐運(yùn)革

廣東省計(jì)劃生育專科醫(yī)院(廣州，510600)

導(dǎo)致男性不育的因素較復(fù)雜，主要涉及遺傳因素、神經(jīng)內(nèi)分泌疾病、免疫因素、外傷及感染等方面。在各種影響人類精子發(fā)生的因素中，遺傳因素是導(dǎo)致無精子癥及少精子癥的主要原因之一［1］。其中染色體異常最常見，其次是基因突變，約有3% ～15%的無精子癥或少精子癥患者存在Y染色體無精癥因子(AZF)基因片段微缺失，其不同片段的微缺失將導(dǎo)致不同程度的精子發(fā)生障礙，嚴(yán)重者表現(xiàn)為特發(fā)性無精子癥或少精子癥［2］。本文對(duì)2008年3月～2010年3月在本院就診的男性不育患者遺傳學(xué)檢查資料進(jìn)行病因分析，以探討遺傳因素與男性不育及精子異常之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1．1 樣本來源

共收集男性不育患者2 406例，年齡22～49歲，排除梗阻性因素，女方婦科檢查正常，不孕時(shí)間2～13年。患者均經(jīng)臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查。正常人群染色體異常發(fā)生率按照文獻(xiàn)［3］作為對(duì)照。

1．2 方法

1．2．1 精液分析常規(guī)檢查 非梗阻性無精子癥、隱匿精子癥、嚴(yán)重少弱畸精子癥、少弱畸精子癥按WHO實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊(cè)(第4版)精液分析診斷標(biāo)準(zhǔn)確定。常規(guī)檢測(cè)，并將精液分析異?；颊甙瓷偃趸影Y、嚴(yán)重少弱畸精子癥和無精子癥進(jìn)行分類。

1．2．2 核型分析 常規(guī)方法制備外周血染色體，進(jìn)行G顯帶分析，必要時(shí)進(jìn)行C顯帶聯(lián)合分析，計(jì)數(shù)中期分裂象30個(gè)，嵌合型計(jì)數(shù)100例，分析3個(gè)分裂象。核型分析按人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制(ISCN 2005)進(jìn)行。

1．2．3 AZF微缺失分析 常規(guī)提取外周血樣本的基因組DNA。AZF檢測(cè)位點(diǎn)及PCR的條件按照文獻(xiàn)［4，5］，即 AZFa區(qū)域 2個(gè)位點(diǎn):sY86和 sY84;AZFb區(qū)域 4個(gè)位點(diǎn):sY124、sY127、sY132和sY134;AZFc區(qū)域 6 個(gè)位點(diǎn):sY152、sY239、sY242、sY254、sY255和sY157。根據(jù)需要增加位于 Yq12的sY160位點(diǎn)，用單純PCR擴(kuò)增。

2．結(jié)果

2．1 不育患者的染色體異常分析

精液分析2 406例男性不育患者中，非梗阻性無精子癥1 992例，隱匿精子癥216例，嚴(yán)重少弱畸精子癥76例，少弱畸精子癥122例。各組染色體異常情況見表1。

2．2 不育患者的核型異常分析

核型異常病癥主要表現(xiàn)為47，XXY(克氏征)和嵌合體。見表2。

2．3 不育患者的基因異常分析

非梗阻性無精子癥、隱匿精子癥和嚴(yán)重少弱畸精子癥各組AZF基因缺失異常者分別為96例(4.82%)、27 例(12．5%)、7 例(9．21%)，總 AZF基因缺失130例。

表1 各種精液分析異常組染色體異常及核型異常情況［例(%)］

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)非梗阻性無精子癥、嚴(yán)重少弱畸精子癥組染色體異常率(26．46%、27．63%)與國內(nèi)外報(bào)道(2．2% ～33%)［6］相似，染色體異常檢出率(27．10%)高于國內(nèi)報(bào)道的正常人群染色體異常發(fā)生率(0．47%)［3］。進(jìn)一步分析，各組性染色體異常率(22．29%、15．74%、9.21%)與文獻(xiàn)報(bào)道新生男嬰性染色體異常發(fā)生率(0．1%)［7］比較顯著增高。其中非梗阻性無精子癥性染色體異常率略高于其他組，可能是由于其性染色體的異常造成了性腺發(fā)育異常，引起生精障礙，表現(xiàn)為非梗阻性無精子癥［8，9］。核型檢查也證明此觀點(diǎn)。同時(shí)在少弱畸精子癥組也發(fā)現(xiàn)了18．85%的常染色體異常，可能與本研究患者的來源有關(guān)。

通過細(xì)胞遺傳學(xué)檢查，在非梗阻性無精子癥1 992例中發(fā)現(xiàn)異常核型328例，其中以克氏征患者最多，占異常核型的94．8%。隱匿精子癥組發(fā)現(xiàn)克氏癥7例，與國內(nèi)外相關(guān)研究［8，9］結(jié)果相似。少弱畸精子癥組和嚴(yán)重少弱畸精子癥組均未發(fā)現(xiàn)克氏征患者。另一種異常核型嵌合體在非梗阻性無精子癥組檢測(cè)到18例。一般來說，嵌合型個(gè)體比純合型個(gè)體癥狀要輕，異常細(xì)胞與正常細(xì)胞的比值越大，患者癥狀越重，反之比值越小，癥狀越輕，個(gè)別嵌合型個(gè)體可具有生精功能［10］。在少弱畸精子癥組發(fā)現(xiàn)了2例嵌合體也驗(yàn)證了這一點(diǎn)。

有研究認(rèn)為，位于Yq11．2的AZF區(qū)域上有些基因或基因家族與精子發(fā)生相關(guān)，它的缺失將導(dǎo)致無精子或嚴(yán)重的少精子表型。文獻(xiàn)報(bào)道，男性原發(fā)無精子癥和少精子癥患者中約有3% ～15% 存在Y染色體AZF區(qū)域微缺失，提示這可能是男性原發(fā)不育的一個(gè)重要遺傳學(xué)病因［11］。在無精癥、少精癥患者中，AZF基因區(qū)微缺失主要發(fā)生在AZFc基因區(qū)，占Y染色體微缺失的60% 以上。目前，AZF基因區(qū)特定位點(diǎn)的缺失與表型的對(duì)應(yīng)關(guān)系還不十分清楚，一般認(rèn)為，AZFa基因區(qū)多個(gè)大片段缺失表現(xiàn)為唯支持細(xì)胞綜合征，AZFb基因區(qū)缺失表現(xiàn)為生精阻滯，而 AZFc 基因區(qū)缺失可有多種表現(xiàn)［12，13］，不同部位的微缺失可導(dǎo)致男子不同程度的精子發(fā)生障礙。本研究顯示非梗阻性無精子癥、隱匿精子癥和嚴(yán)重少弱畸精子癥各組AZF基因缺失異常率(4．82%、12．5%、9．21%)顯著高于正常人群(0．05%)［14］，其中隱匿精子癥最高，嚴(yán)重少弱畸精子癥其次。目前尚沒有足夠的證據(jù)說明AZF基因區(qū)微缺失與精子密度及精子活率高低相關(guān)，其在少精子癥發(fā)病過程中的分子機(jī)制，還需進(jìn)一步深入研究。然而在患者面臨輔助生殖技術(shù)選擇的過程中，臨床上應(yīng)對(duì)男性不育癥患者進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)檢查和AZF檢測(cè)，以盡量減少因染色體異常遺傳給下一代帶來的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，遺傳學(xué)因素是導(dǎo)致男性不育的重要原因，其中染色體異常及Y染色體AZF微缺失引起的無精子癥和少精子癥最常見，在進(jìn)行男性不育的病因?qū)W分析以及臨床診斷和治療時(shí)，遺傳因素應(yīng)予以高度重視。僅從Y染色體的形態(tài)改變判斷其是否與男性不育相關(guān)還不夠可靠，但僅進(jìn)行AZF檢測(cè)而不進(jìn)行核型分析尚不能發(fā)現(xiàn)性染色體嵌合體的存在。因此將這兩項(xiàng)技術(shù)對(duì)比檢測(cè)，用于診斷男性不育可能更為全面且有意義。

1 Dada R，Gupta NP，Kucheria K．Molecular screening forY qmicrodeletion in men with id iopathic oligozoospermia and azoospermia［J］．J Biosc，2003，28(2):163 －168．

2 Kleiman SE，Yogev L，Paz G，et al．The prognost ic value of thesite and ex ten t ofY ch rom osom em icrodelet ions on sperm atogenesis［J］．Harefuah，2002，141(2):178 －180，222，221．

3 夏家輝，李麓云．染色體病〔M〕．北京:科學(xué)出版社，1989:264．

4 Kirsch S，W eiss B，De RosaM，et al．FISH deletionm app ing defines a single locat ion for the Y － chrom osom e statu re gene，GCY［J］．J Med Genet，2000，37(8):593 －599．

5 Cui YX．An infertile male with apparent 45，X turned out to have 45，X，d er(Y)t(Y;13)(q11．2;q12)，－ 13［J］．Clinicopathologic and Cytogenomics Studies，2007，88(6):1676 －1611．

6 化愛玲，鄭梅玲，丁琰．SRY基因診斷在臨床中的應(yīng)用［J］．中國優(yōu)生與遺傳雜志，1999，7(3):34．

7 Egozcue S，Blanco J，Vendrell JM，et al．Human male infertility:chromosome anomalies，meiotic disorders，abnormal spermatozoa and recurrent abortion［J］．Hum Reprod Update，2000，6:93 －105．

8 Bhasin S．Approach to the infertile man［J］．J Clin Endocrinol M －etab，2007，92(6):1995 －2004．

9 李克秋，李光，王春蘭，等．1823例無精子患者的染色體畸變類型及生殖激素水平［J］．中國優(yōu)生與遺傳雜志，2006，14(6):35－38．

10 Tiepolo L，Zuffardi O．Localization of factors controlling spermatogenes is in the nonfluorescent portion of the human Y chromosome long arm［J］．Hum Genet，1976，34(2):119－124．

11 賈味存，魏莎莉．人類Y染色體微缺失與精子生成障礙的研究進(jìn)展［J］．國際遺傳學(xué)雜志，2006，29(4):273－276．

12 Krausz C，Quintana Murci L，McElreavey K．Prognostic value of Y deletion analysis［J］．Hum Reprod，2000，15(7):1431 －1434．

13 Foresta C，F(xiàn)erlin A，Garolla A，et al．High frequency of well defined Y chromosome deletions inidiopathic Sertoli cell only syndrome［J］．Hum Reprod，1998，13(2):302 －307．

14 Gardner RJM，Sutherland GR．Chromosome Abnormalities and Genetic Counseling．Sex chromosome translocations［M］．Oxford:Oxford University Press，1996:95 －114．