染色體異常核型圖像庫在染色體核型分析室間質(zhì)評(píng)中的應(yīng)用

翁炳煥

（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院，浙江 杭州 310006）

染色體核型分析是確診染色體病的金標(biāo)準(zhǔn)，隨著我國對(duì)生殖健康的日益重視，目前已廣泛應(yīng)用于產(chǎn)前胎兒和植入前胚胎染色體病的診斷，并作為異常妊娠、不孕不育、血液病、腫瘤等臨床診斷及發(fā)病機(jī)制研究的重要項(xiàng)目。作為實(shí)驗(yàn)診斷項(xiàng)目，均應(yīng)有規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制方法，這已形成共識(shí)并已成為政府行為［1-4］。近年來國內(nèi)外有較多的文獻(xiàn)［5-7］對(duì)染色體核型分析的室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)方法作了報(bào)道，但其在質(zhì)控物的制備、發(fā)放和染色體制作等方面的操作條件還有待于更進(jìn)一步地優(yōu)化，一時(shí)還難以較廣泛地推廣應(yīng)用。本文試驗(yàn)了以染色體異常核型圖像作為質(zhì)評(píng)材料，用于染色體核型分析的室間質(zhì)評(píng)試驗(yàn)，簡(jiǎn)便易行。

1 材料和方法

1.1 染色體異常核型圖像的收集及其圖像庫的建立 從各相關(guān)實(shí)驗(yàn)室中采集經(jīng)細(xì)胞遺傳學(xué)或分子遺傳學(xué)確診的疑難、罕見、易誤診染色體異常核型圖像，用常規(guī)染色體核型分析軟件處理其背景及核型圖橡至最佳狀態(tài)，將每6幅不同染色體異常核型作為1個(gè)組合單位，編入計(jì)算機(jī)，建立染色體異常核型圖像庫。

1.2 試驗(yàn)方法 在2006年1月至2012年6月期間，從染色體異常核型圖像庫中取出1個(gè)組合單位（6幅）的易誤診染色體異常核型圖，以電子郵件、通信和當(dāng)面的形式進(jìn)行室間質(zhì)評(píng)試驗(yàn)。按試驗(yàn)前約定，全部受試對(duì)象均采用隱名回報(bào)結(jié)果，不向外公布成績(jī)。

1.3 結(jié)果評(píng)價(jià) 按4級(jí)打分法評(píng)價(jià)各受試者反饋的結(jié)果（表1）。

表1 染色體核型分析室間質(zhì)評(píng)4級(jí)打分法評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié) 果

2.1 建立了染色體異常核型圖像庫 制作了1個(gè)組合單位（6幅）的染色體異常核型圖像，其核型分別為46，X，t（Y；5）（q12；q21）；46，XY，15P+；46，

XX，t（13；18）（q12；q21）；46，X，r（Xp）；46，X，t（Y；Y）；46，XX，t（9；20）（P13；p13）（圖1）。

圖1 1個(gè)組合單位的染色體異常核型質(zhì)控圖

2.2 室間質(zhì)評(píng)結(jié)果 向35家受試者各發(fā)放1個(gè)組合單位的染色體異常核型圖像（圖1），其反饋的染色體核型分析結(jié)果如下（表2、3）。

表2 染色體核型分析4級(jí)打分法室間質(zhì)評(píng)結(jié)果

表3 6類染色體異常核型質(zhì)控圖室間質(zhì)評(píng)中的誤診類型

3 討 論

染色體核型分析是診斷染色體病的金標(biāo)準(zhǔn)，隨著國家對(duì)產(chǎn)前診斷工作的日益重視，目前已廣泛應(yīng)用于羊水脫落細(xì)胞、絨毛組織的染色體病產(chǎn)前診斷。作為實(shí)驗(yàn)診斷項(xiàng)目，均應(yīng)有相應(yīng)規(guī)范的質(zhì)量控制措施，這已成為政府的行政行為并已形成共識(shí)［1-4］。近年來有較多的文獻(xiàn)［8-11］報(bào)道了要加強(qiáng)并開展影像學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷及母血清產(chǎn)前篩查的質(zhì)量控制。Bastien P等［12］對(duì)多家實(shí)驗(yàn)室就羊水中弓形蟲的產(chǎn)前分子診斷作了為期3年的室間質(zhì)量控制；Tosto F等［13］對(duì)地中海貧血的基因分型、報(bào)告結(jié)果及試驗(yàn)方法作了5年時(shí)間的調(diào)查，并提出了當(dāng)?shù)厥议g質(zhì) 評(píng) 的 實(shí) 施 計(jì) 劃；Ramsden SC 等［7］報(bào)道了3年來利用分子遺傳學(xué)技術(shù)對(duì)染色體數(shù)目異常的快速產(chǎn)前診斷的室間質(zhì)量評(píng)估經(jīng)歷。國內(nèi)文獻(xiàn)［5-7］對(duì)細(xì)胞遺傳學(xué)診斷的質(zhì)量控制及其室間質(zhì)評(píng)方法提出了較好的見解，但其在質(zhì)控物的制備、發(fā)放和染色體制作方面的優(yōu)化條件還有待于更進(jìn)一步地研究。

為了試驗(yàn)一種簡(jiǎn)便易行的染色體核型分析室間質(zhì)評(píng)方法，本文以6例易于誤診的染色體異常核型分裂相組成了1個(gè)組合單位的染色體異常核型質(zhì)控圖，其核型分別為46，X，t（Y；5）（q12；q21）、46，XY，15P+、46，XX，t（13；18）（q12；q21）、46，X，r（Xp）、46，X，t（Y；Y）和46，XX，t（9；20）（P13；p13）6類，均屬較為疑難、罕見的異常核型，并作了染色體核型分析的室間質(zhì)評(píng)試驗(yàn)。由表2的試驗(yàn)結(jié)果可知，我們向35家受試者各發(fā)放了1個(gè)組合單位的染色體異常核型圖，共計(jì)35個(gè)組合單位，含有210份異常核型的質(zhì)控圖，其中有19份質(zhì)控圖未回報(bào)結(jié)果，據(jù)了解是因?yàn)闆]有把握確診這類罕見的核型?；貓?bào)結(jié)果的有191份，總的回報(bào)率為90.95%。各受試者回報(bào)的結(jié)果，相對(duì)應(yīng)于46，X，t（Y；5）（q12；q21）；46，XY，15P+；46，XX，t（13；18）（q12；q21）；46，X，r（Xp）；46，X，t（Y；Y）和46，XX，t（9；20）（P13；p13）的6染色體異常核型排序的結(jié)果，其完全正確率分別為81.82%、78.13%、86.67%、78.79%、78.13%、90.32%，完全錯(cuò)誤率分別為15.15%、21.88%、10.00%、18.18%、21.88%、6.45%，總 的完全正確率、部分正確率、部分錯(cuò)誤率和完全錯(cuò)誤率分別為82.20%、0.52%、1.57%和15.71%。表明受試者的染色體核型分析結(jié)果存在一定比例的誤診率，如果將因沒有把握確診而未回報(bào)的19份質(zhì)控圖計(jì)算在內(nèi)，其誤診率會(huì)更高。這可能是因?yàn)椋孩僖匀旧w異常核型圖作室間質(zhì)評(píng)，對(duì)特別疑難、罕見的異常核型難以作進(jìn)一步地鑒定；②被選擇的室間質(zhì)評(píng)對(duì)象偏向于基層單位；③染色體核型分析是近年才被普遍開展起來的，技術(shù)人員缺乏對(duì)疑難罕見染色體病例的實(shí)驗(yàn)診斷經(jīng)驗(yàn)；④初次作室間質(zhì)評(píng)試驗(yàn)，缺乏相關(guān)的室間質(zhì)評(píng)經(jīng)驗(yàn)；⑤沒有按統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化地描述染色體核型的結(jié)構(gòu)；⑥本室間質(zhì)評(píng)方法所確定的4級(jí)打分法評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)偏高；⑦所用的質(zhì)評(píng)圖像疑難、易誤診；⑧本次室間質(zhì)評(píng)試驗(yàn)并非由衛(wèi)生主管部門正式組織，結(jié)果不計(jì)成績(jī)，是基于自愿、隱名的形式進(jìn)行的；⑨大多問題出在未按規(guī)范的染色體核型命名方法描述核型的區(qū)、帶，而非染色體核型分析的性質(zhì)錯(cuò)誤。表3列舉了室間質(zhì)評(píng)中被誤診的核型及例數(shù)，其中有5例46，X，t（Y；5）（q12；q21）被誤診為46，X，t（5；15），前者除了生育功能可能會(huì)有影響外，臨床體征一般正常，但后者表現(xiàn)為原發(fā)性閉經(jīng)的性異常；有7 例46，XY，15P+被誤診為46，XY，t（15；21），前者一般為臨床體征正常的多態(tài)性核型，但后者為先天愚型的核型；有2例46，XX，t（13；18）（q12；q21）被誤診斷為46，XX，-18，+mar、1例被誤診為46，XX，del（18），前者在生育子代時(shí)易發(fā)生流產(chǎn)，其本人臨床體征一般正常，但后者表現(xiàn)為染色體缺失的癥狀，一般不會(huì)活到出生；有3 例46，X，r（Xp）被誤診為46，X，+mar、2例被誤診為45，X、被誤診為46，XY 和46，X，Xp各1例，特別是被誤診為46，XY 后，就要采取外科手術(shù)切除“隱睪”以防惡變；有4例46，X，t（Y；Y）被誤診為46，X，-Y+11、3例被誤診為46，X，-Y，+del（11），原核型多了1個(gè)Y 染色體，誤診后卻沒有Y 染色體了；46，XX，t（9；20）被誤診為46，XX，-20，+17、和46，XX，del（9）各1例，原核型屬染色體易位，在生育子代時(shí)易發(fā)生自然流產(chǎn)，本人臨床體征一般正常，但誤診后的46，XX 為正常核型、另外2 種核型一般都不會(huì)成活到出生。

由此可見，在染色體核型分析中，除了應(yīng)同時(shí)作分子遺傳學(xué)等方法佐證外，還應(yīng)定期以疑難、罕見、易誤診的染色體異常核型圖像發(fā)送給各實(shí)驗(yàn)室作室間質(zhì)評(píng)，以及時(shí)發(fā)現(xiàn)存在的問題，增加技術(shù)人員對(duì)易誤診病例的見識(shí)。本文試用的以疑難染色體核型圖像進(jìn)行染色體核型分析的室間質(zhì)評(píng)，簡(jiǎn)便易行，具有推廣應(yīng)用價(jià)值。

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