慢性自發(fā)性蕁麻疹患者白細(xì)胞介素-35及白細(xì)胞介素-26表達(dá)水平

朱慧蘭，楊　婧，李潤(rùn)祥，梁碧華，畢　超，梁艷華，戴京萍

(廣州市皮膚病防治所，廣州 510095)

慢性自發(fā)性蕁麻疹(chronic spontaneous urticaria，CSU)是一種多種炎性細(xì)胞參與、累及皮膚黏膜的異質(zhì)性疾病。目前研究發(fā)現(xiàn)，介導(dǎo)免疫耐受的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg)和介導(dǎo)炎性反應(yīng)的輔助性T細(xì)胞(helper T cell，Th)17這兩類(lèi)不同的T淋巴細(xì)胞與CSU的發(fā)生有密切關(guān)系[1]。白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-35由Collison等[2]于2007年發(fā)現(xiàn)并命名，歸屬于IL-12家族，具有免疫抑制功能，表達(dá)和分泌方式僅局限于Treg細(xì)胞。IL-26是由Knappe等于2000年在研究單純皰疹病毒轉(zhuǎn)化的T細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)的炎性細(xì)胞因子，歸屬于IL-10家族，主要由Th17細(xì)胞分泌[3]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于IL-35及IL-26的研究仍處于起步階段，尚無(wú)關(guān)于CSU與IL-35及IL-26相關(guān)性的報(bào)道。本文通過(guò)對(duì)CSU患者外周血中IL-35及IL-26表達(dá)水平的檢測(cè)和分析，探討IL-35及IL-26與CSU發(fā)病機(jī)制的關(guān)系。

對(duì)象和方法

臨床資料

2012年2月至6月廣州市皮膚病防治所收入的CSU患者，根據(jù)CSU疾病活動(dòng)評(píng)估分為靜止期組及活動(dòng)期組。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)反復(fù)起風(fēng)團(tuán)，單個(gè)風(fēng)團(tuán)皮損持續(xù)時(shí)間<24 h，伴或不伴瘙癢；(2)每天或幾乎每天發(fā)作，病程持續(xù)6周以上；(3)除外物理性蕁麻疹等有明確誘因的蕁麻疹；(4)1個(gè)月內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素和(或)免疫抑制劑，采血前1周內(nèi)未使用抗組胺藥物；(5)非妊娠或者哺乳者，無(wú)嚴(yán)重心、肝、腎等主要器官病變及其他系統(tǒng)性疾病。健康對(duì)照組均來(lái)自同期廣州市社區(qū)醫(yī)院體檢中心，體檢結(jié)果正常，無(wú)感染、自身免疫病和腫瘤。采血均經(jīng)研究對(duì)象知情同意。

CSU疾病活動(dòng)評(píng)估

臨床癥狀觀察指標(biāo)包括風(fēng)團(tuán)發(fā)作頻率及瘙癢程度，所有CSU患者按0～4級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，0級(jí)為靜止期，1～4級(jí)為活動(dòng)期[4](表1)。

主要試劑與儀器

人IL-35及IL-26酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒(武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司，E92008HU)，全自動(dòng)酶免分析儀(意大利SEAC公司，ALISEI QUALITY SYSTEM)。

IL-35及IL-26表達(dá)水平檢測(cè)

分別用真空采血管抽取受試者靜脈血3 ml，室溫凝固30 min，1000 r/min離心15 min，取上清液微量離心管分裝、標(biāo)記后置于-80℃冰箱中凍存，備測(cè)。操作步驟嚴(yán)格按照IL-35及IL-26酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。每個(gè)試劑盒使用前先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)測(cè)試劑盒正常，標(biāo)準(zhǔn)孔設(shè)復(fù)孔，檢測(cè)人IL-35及IL-26光密度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)孔和復(fù)孔的平均值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)曲線回歸方程計(jì)算出待測(cè)孔人IL-35及IL-26濃度。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

表1　慢性自發(fā)性蕁麻疹評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1　The score criteria of chronic spontaneous urticaria

結(jié)　　果

基本資料

CSU患者89例，男42例，女47例，年齡為13～58歲，平均年齡為32.4歲。CSU靜止期組41例，男21例，女20例；活動(dòng)期組48例，男21例，女27例。對(duì)照組48例，男、女各24例，年齡為14～53歲，平均年齡為30.0歲。各組性別及年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

IL-35及IL-26水平組間比較

CSU活動(dòng)期組血清IL-35水平明顯高于CSU靜止期組及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)；但CSU靜止期組IL-35水平與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

CSU活動(dòng)期組患者血清IL-26水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；但CSU活動(dòng)期組IL-26水平與CSU靜止期組及CSU靜止期組與對(duì)照組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)(表2)。

IL-35及IL-26水平與臨床癥狀相關(guān)性

CSU患者IL-35水平與臨床癥狀評(píng)分呈顯著正相關(guān)，但與病程無(wú)相關(guān)；CSU患者IL-26水平與臨床癥狀評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，但與病程無(wú)相關(guān)(表3)。

討　　論

本研究發(fā)現(xiàn)，CSU活動(dòng)期組IL-35表達(dá)水平較健康對(duì)照組及CSU靜止期組明顯升高，提示CSU患者體內(nèi)可能存在IL-35表達(dá)水平的異常。經(jīng)過(guò)有效治療后，患者癥狀減輕甚至消失，CSU靜止期IL-35表達(dá)水平明顯低于活動(dòng)期組。IL-35是由IL-27的EBI3和IL-12的p35組成的異源二聚體[5]，兩組相關(guān)基因均可發(fā)揮抑制作用。IL-35可選擇性抑制效應(yīng)細(xì)胞，其主要由Treg細(xì)胞分泌。Langhans等[6]研究發(fā)現(xiàn)，在慢性肝炎和自限性慢性丙型肝炎感染患者的Treg細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基中加入抗IL-35物質(zhì)能有效阻斷抑制效應(yīng)，IL-35可能是Treg細(xì)胞發(fā)揮免疫抑制作用的關(guān)鍵因子之一。大量研究結(jié)果顯示，無(wú)論是接種注射IL-35還是在體外培養(yǎng)中加入IL-35，均可促進(jìn)Treg細(xì)胞增殖，同時(shí)抑制Th17的分化和IL-17的合成[7]。以上結(jié)果提示，IL-35可能通過(guò)刺激Treg細(xì)胞分化增殖抑制Th17細(xì)胞生成，導(dǎo)致細(xì)胞免疫系統(tǒng)紊亂，從而參與CSU的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

表2血清白細(xì)胞介素-35及白細(xì)胞介素-26水平組間比較

分組例數(shù)白細(xì)胞介素?35(pg/ml)白細(xì)胞介素?26(pg/ml) 健康對(duì)照組4894 57±11 1160 60±8 83 CSU靜止期組41108 71±25 3856 10±10 30 CSU活動(dòng)期組48147 94±17 08△?43 95±7 73?

CSU：慢性自發(fā)性蕁麻疹；與CSU靜止期組比較，△P<0.01；與健康對(duì)照組比較，*P<0.01

IL-26是由IL-20Rl和IL-10R2組成的異二聚體。部分學(xué)者通過(guò)對(duì)IL-26基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)的研究發(fā)現(xiàn)，IL-26存在兩個(gè)異型單核苷酸D12S2510 和D12S2511，這兩個(gè)異型單核苷酸與自身免疫性疾病和變態(tài)反應(yīng)性疾病的易感性相關(guān)，異型單核苷酸rs2870946與介導(dǎo)炎性疾病發(fā)生密切相關(guān)[8]。IL-26主要由Th17細(xì)胞分泌，當(dāng)IL-17分泌增多時(shí)，IL-26表達(dá)水平增加；IL-26可能促進(jìn)IL-17細(xì)胞因子表達(dá)，提示IL-26可能可“放大”Th17的細(xì)胞功能。本研究發(fā)現(xiàn)，CSU活動(dòng)期患者IL-26表達(dá)水平較健康對(duì)照組明顯降低，推測(cè)可能系Th17細(xì)胞分化相對(duì)減少，導(dǎo)致T細(xì)胞活動(dòng)異常，從而參與CSU發(fā)病。本研究還發(fā)現(xiàn)，CSU患者外周血IL-35及IL-26表達(dá)水平和癥狀評(píng)分明顯相關(guān)。說(shuō)明IL-35及IL-26血清表達(dá)水平可能是CSU活動(dòng)程度的有效指標(biāo)之一，檢測(cè)其表達(dá)水平有助于病情活動(dòng)水平的判斷。

由于IL-35的結(jié)構(gòu)和功能使其與多種疾病相關(guān)。Niedbala等[9]研究發(fā)現(xiàn)，IL-35可改善小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritis， CIA)臨床癥狀，有效阻止關(guān)節(jié)破壞。Huang等[10]發(fā)現(xiàn)，經(jīng)肺給予pVAX-IL35 DNA，可減輕小鼠地塞米松敏感性嗜酸粒細(xì)胞性氣道炎性反應(yīng)。張耀源和張孔[11]發(fā)現(xiàn)，支氣管哮喘患者血清中IL-35水平較健康對(duì)照組低，隨著治療深入與疾病控制，IL-35表達(dá)水平呈上升趨勢(shì)直至與健康對(duì)照組無(wú)明顯差異，據(jù)此提示IL-35可能作為一種保護(hù)因子參與哮喘治療水平的評(píng)估。Langhans等[6]研究證明，丙型肝炎病毒中Treg細(xì)胞通過(guò)分泌IL-35抑制效應(yīng)T細(xì)胞分化，發(fā)揮免疫抑制作用。以上研究均提示，IL-35作為抑制性細(xì)胞因子在自身免疫性疾病和病毒感染性疾病中發(fā)揮著重要作用。炎性疾病和自身免疫性疾病都與免疫系統(tǒng)異常調(diào)控有關(guān)，IL-26的作用機(jī)制還有待深入研究，而其在人體內(nèi)的低表達(dá)也給研究帶來(lái)了挑戰(zhàn)。

表3　慢性自發(fā)性蕁麻疹患者IL-35及IL-26表達(dá)水平與臨床癥狀評(píng)分及病程相關(guān)性分析Table 3　Correlation analysis between expression of IL-35 and IL-26 in the CSU patients and score of clinical symptom and course of disease

綜上所述，通過(guò)檢測(cè)IL-35及IL-26表達(dá)水平，推測(cè)這兩種細(xì)胞因子可能在CSU的發(fā)病中發(fā)揮一定作用，而作用機(jī)制仍有待研究。另外，隨著研究深入，IL-35有可能為CSU的臨床評(píng)價(jià)和治療帶來(lái)新思路。

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