腦梗死后血清血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子濃度變化與神經(jīng)功能缺損的關(guān)系

官俏兵 張曉玲 王琰萍 余波 杜瑛媛 萬(wàn)里紅

腦梗死后血清血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子濃度變化與神經(jīng)功能缺損的關(guān)系

官俏兵 張曉玲 王琰萍 余波 杜瑛媛 萬(wàn)里紅

目的 研究急性腦梗死后血清血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子濃度（PD-ECGF）變化與神經(jīng)功能缺損的關(guān)系。方法測(cè)定60例腦梗死患者發(fā)病后24h內(nèi)、第3天、第7天、第14天的PD-ECGF濃度，同步評(píng)估美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院腦卒中量表（NIHSS）評(píng)分，并記錄腦梗死的體積。結(jié)果 腦梗死患者發(fā)病后24h內(nèi)、第3天、第7天、第14天的平均血清PD-ECGF濃度分別為（4 080．62±1 569．27）、（4 386．03±1 746．05）、（5 473．24±2 312．75）、（3 365．72±1 421．76）pg/ml，4個(gè)時(shí)點(diǎn)間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=14．297，P＜0．05），并均高于對(duì)照組（2 687．92±950．60）pg/ml。相應(yīng)時(shí)點(diǎn)的NIHSS評(píng)分分別為（6．35±4．09）、（6．25±4．45）、（5．42±4．44）、（4．68±4．49）分，4個(gè)時(shí)點(diǎn)間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1．925，P＞0．05）。發(fā)病后第3天腦梗死體積與血清PD-ECGF濃度無(wú)相關(guān)性（r=0．107，P＞0．05），但與NIHSS評(píng)分具有相關(guān)性（r=0．619，P＜0．05）。結(jié)論 血清PD-ECGF濃度在腦梗死后即有升高，但濃度的高低與神經(jīng)功能缺損程度和康復(fù)無(wú)關(guān)，與急性腦梗死的病理生理過(guò)程相一致。

血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 腦梗死 神經(jīng)功能缺損

隨著人口老齡化，腦血管病發(fā)病率在我國(guó)逐年上升，對(duì)我國(guó)人群的危害也進(jìn)一步增加。腦血管病中最常見的是缺血性腦血管病，以腦梗死最常見。目前腦梗死的治療以溶栓為主，但由于時(shí)間窗問(wèn)題，僅有不到5%的患者能接受溶栓治療。因此，國(guó)內(nèi)外學(xué)者不斷探索促進(jìn)腦梗死后神經(jīng)功能恢復(fù)的新方法，其中對(duì)腦組織缺血區(qū)的保護(hù)及血管再通的研究已引起了眾人的高度關(guān)注。血管生長(zhǎng)因子可使血管通透性增加，促使新生血管形成，并使閉塞血管再通。關(guān)于血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的研究最多，但對(duì)血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（platelet derivedendothelial cell growth factor，PD-ECGF）研究則較少。因此，筆者測(cè)定了患者急性腦梗死后不同時(shí)期的血清PDECGF濃度，并與神經(jīng)功能缺損程度的相關(guān)性作了研究，旨在發(fā)現(xiàn)兩者間的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 收集2009-11—2010-12在我院接受住院治療的急性腦梗死患者60例（研究組），其中男37例，女23例，年齡43～88歲，平均（68.18±11.73）歲。所有患者均在發(fā)病24h內(nèi)入院，并行急診頭顱CT或MRI檢查，梗死部位均位于大腦半球，未行溶栓治療。參照全國(guó)第4屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，排除既往有腦梗死、腦外傷、心肌梗死、腫瘤、嚴(yán)重肝、腎功能障礙等患者。選擇同期健康體檢者30例作為對(duì)照組，其中男19例，女11例，年齡50～83歲，平均（69.30±9.40）歲。否認(rèn)有高血壓病、糖尿病、心、腦血管病等病史。兩組間年齡、性別的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法 所有腦梗死患者在發(fā)病24h內(nèi)（T1）、發(fā)病后第3天（T2）、第7天（T3）、第14天（T4）各采血1次，除T1為入院后即刻采血，其余為晨間空腹采血。血樣靜置30min，3 000r/min離心10min，收集血清，-20℃保存。對(duì)照組為晨間空腹采血1次，同樣方法分離、保存。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)定。人PD-ECGF ELISA試劑盒購(gòu)于上海西唐生物科技有限公司，嚴(yán)格按說(shuō)明書操作。酶標(biāo)儀為芬蘭Thermo公司生產(chǎn)，型號(hào)為DENLEY DRAGON Wellscan MK 3，分析軟件采用Ascent software for Multiskan。T1、T2、T3和T4同步記錄美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院卒中量表（national institutes of health stroke scale，NIHSS）評(píng)分。所有患者發(fā)病24h內(nèi)行頭顱CT或MRI檢查，發(fā)病72h后復(fù)查，并以最大的梗死體積作為本研究的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。腦梗死體積計(jì)算根據(jù)Pullicino公式[2]測(cè)定，即腦梗死體積=長(zhǎng)×寬×CT掃描陽(yáng)性層數(shù)×1/2。MRI以相同層距及層厚對(duì)照上述公式折算。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多個(gè)時(shí)點(diǎn)間比較采用方差分析，兩兩比較采用Q檢驗(yàn)，血清PD-ECGF濃度與NIHSS評(píng)分，以及腦梗死體積與血清PD-ECGF濃度和NIHSS評(píng)分的關(guān)系采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 研究組患者不同時(shí)點(diǎn)血清PD-ECGF濃度與對(duì)照組的比較 研究組患者T1、T2、T3、T4的平均血清PDECGF濃度分別為（4080.62±1569.27）、（4386.03±1746.05）、（5 473.24±2 312.75）、（3 365.72±1 421.76）pg/ml，4個(gè)不同時(shí)點(diǎn)血清PD-ECGF濃度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 14.297，P＜0.05）。4個(gè)時(shí)點(diǎn)兩兩比較發(fā)現(xiàn)，除T1與T2之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外（P＞0.05），其余差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。對(duì)照組血清PD-ECGF濃度為（2 687.92±950.60）pg/ml，腦梗死患者4個(gè)時(shí)點(diǎn)的血清PD-ECGF濃度均高于對(duì)照組（t=4.462、4.963、6.321、2.358，均P＜0.05）。

2.2 研究組患者血清與NIHSS評(píng)分的關(guān)系 研究組患者T1、T2、T3、T4時(shí)的NIHSS評(píng)分分別為（6.35±4.09）、（6.25±4.45）、（5.42±4.44）、（4.68±4.49）分，不同時(shí)點(diǎn)間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.925，P＞0.05），各時(shí)點(diǎn)血清PD-ECGF濃度與NIHSS評(píng)分均無(wú)相關(guān)性（r=0.053、0.001、-0.053、-0.082，均P＞0.05）。

2.3 發(fā)病后第3天腦梗死體積與血清PD-ECGF濃度、NIHSS評(píng)分的關(guān)系 急性腦梗死發(fā)病后第3天最大腦梗死體積平均為（4.41±4.52）ml，腦梗死體積與血清PDECGF濃度無(wú)相關(guān)性（r=0.107，P＞0.05），但與NIHSS評(píng)分具有相關(guān)性（r=0.619，P＜0.05），腦梗死體積越大，NIHSS評(píng)分越高。

3 討論

急性腦梗死后血管再生對(duì)神經(jīng)功能康復(fù)的影響日益受到重視，有研究證實(shí)大腦中動(dòng)脈缺血后12～24h均可見在梗死區(qū)周圍沿著血管出現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖[3]。而血管生長(zhǎng)因子在內(nèi)皮細(xì)胞增殖及血管形成了起到了決定性作用。據(jù)研究報(bào)道，缺氧及酸中毒均可誘導(dǎo)血管生長(zhǎng)因子基因的表達(dá)[4]。在腦缺血發(fā)生后3h即可見血管生長(zhǎng)因子的表達(dá)[5]。VEGF是最早被用于腦缺血疾病研究的血管生長(zhǎng)因子。但VEGF可增加腦血管通透性，有加重腦水腫的風(fēng)險(xiǎn)[6-7]；而PD-ECGF在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的研究中并無(wú)此作用[8]。PD-ECGF最早在1985年由Miyazono從新鮮血小板溶解物中提取。目前已知PD-ECGF基因位于22號(hào)染色體q13帶，分子量44 000～46 000，是一種陰離子蛋白質(zhì)，呈二聚體。哺乳動(dòng)物中PD-ECGF由兩種相同的亞單位組成。PD-ECGF促血管生成過(guò)程中其酶的活性起重要作用，它可能通過(guò)降低抑制內(nèi)皮細(xì)胞的胸苷水平而促進(jìn)血管生成，能夠可逆性地將胸腺嘧啶脫氧核苷轉(zhuǎn)變?yōu)樾叵汆奏ず?-脫氧核糖1-磷酸，后者去磷酸化形成2-脫氧D-核糖，而胸腺嘧啶、2-脫氧核糖1-磷酸和2-脫氧D-核糖均有促血管生成作用[9]。有學(xué)者對(duì)急性心肌梗死后的狗進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用PDECGF基因治療可減少狗的心肌梗死面積，降低心肌細(xì)胞凋亡數(shù)，增加血管形成及動(dòng)脈血管形成數(shù)量，心肌血供及心肌功能改善[10-11]。有學(xué)者在對(duì)兔的肢體缺血的研究中得到相同的結(jié)果[12]。Hayashi等[5]應(yīng)用免疫組化方法，發(fā)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)性大鼠中發(fā)現(xiàn)缺血灶周圍神經(jīng)元在再灌注3h后在缺血區(qū)周圍已出現(xiàn)PD-ECGF染色陽(yáng)性細(xì)胞，并在第4～10天達(dá)到高峰，神經(jīng)元細(xì)胞是表達(dá)PDECGF的來(lái)源。筆者采用放射免疫方法對(duì)腦梗死后不同時(shí)間點(diǎn)的外周血清PD-ECGF濃度進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)發(fā)病后24h內(nèi)患者的血清濃度較對(duì)照組高，說(shuō)明PDECGF表達(dá)在腦梗死后早期即已開始。隨時(shí)間推遲外周血濃度增加，到發(fā)病后第7天達(dá)到高峰，第14天濃度明顯回落，低于發(fā)病后24h內(nèi)水平，說(shuō)明PD-ECGF表達(dá)啟動(dòng)時(shí)間早，持續(xù)時(shí)間短。Hayashi等[5]發(fā)現(xiàn)大神經(jīng)元細(xì)胞PD-ECGF表達(dá)第4天達(dá)到高峰，第10天明顯減少，這與本研究結(jié)果相似。有學(xué)者在對(duì)VEGF的研究中發(fā)現(xiàn)急性期血清VEGF濃度與患者的預(yù)后相關(guān)，急性期高血清VEGF濃度能增進(jìn)3個(gè)月后NIHSS評(píng)分[13]。但本研究發(fā)現(xiàn)血清PD-ECGF濃度與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的NIHSS評(píng)分并無(wú)相關(guān)性；在14d的觀察期內(nèi)并沒發(fā)現(xiàn)4個(gè)時(shí)點(diǎn)的NIHSS評(píng)分有顯著變化，說(shuō)明血清PD-ECGF濃度并不能預(yù)示患者病情嚴(yán)重程度或神經(jīng)功能康復(fù)程度。但這可能受觀察時(shí)間較短的影響，有必要進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間的觀察研究。發(fā)病后第3天的血清PD-ECGF濃度與腦梗死的體積大小無(wú)相關(guān)性，可能是PD-ECGF的表達(dá)主要位于腦梗死周圍組織，這些組織表達(dá)的多少?zèng)Q定血清濃度的高低。另外血管形成受眾多因素影響，Navarro-Sobrino等[14]通過(guò)化學(xué)發(fā)光及ELISA技術(shù)對(duì)109例腦梗死患者的血漿成血管因子（PDGF-AA、PDGF-BB、HGF、FGF、KGF、HB-EGF、TPO、VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2 and SDF-1α）和成血管抑制劑（endostatin，angiostatin，thrombospondin-1 and thrombospondin-2）進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血管形成前的兩者之間的平衡與短期的神經(jīng)功能缺損有關(guān)，而急性期endostatin血漿水平?jīng)Q定了抗血管生長(zhǎng)狀態(tài)，高endostatin濃度預(yù)示著更差的長(zhǎng)期預(yù)后。

綜上所述，筆者認(rèn)為腦缺血后血管形成是眾多因素作用的結(jié)果。血清PD-ECGF濃度在腦梗死后即有升高，與急性腦梗死的病理生理過(guò)程相一致，但并非神經(jīng)功能缺損程度和康復(fù)程度的決定因素。

[1]全國(guó)第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議．腦卒中患者臨床神經(jīng)功能缺損程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)(1995)[J]．中華神經(jīng)科雜志,1996,29(6):381-383．

[2]Pullicino P,Nelson R F,Kendall B E．Small deed infarcts diagnosed on computer tomography[J]．Neurology,1980,30(10):1090-1096．

[3]Hayashi T,Noshita N,Sugawara T,et al．Temporal profile of angiogenesis and expression of related genes in the brain after ischemia[J]．J Cereb Blood Flow Metab,2003,23(2):166-180．

[4]Griffiths L,Dachs G U,Bicknell R,et al．The influence of oxygen tension and pH on the expression of platelet-derived endothelial cell growth factor/thymidine phosphorylase in human breast tumor cells grown in vitro and in vivo[J]．Cancer Res,1997,57(4): 570-572．

[5]Hayashi T,Wang X Q,Zhang H Z,et al．Induction of platelet derived-endothelial cell growth factor in the brain after ischemia[J]．Neurol Res,2007,29(5):463-468．

[6]Zhang Z G,Zhang L,Jiang Q,et al．VEGF enhances angiogenesis and promotes blood-brain barrier leakage in the ischemic brain[J]．J Clin Invest,2000,106(7):829-838．

[7]Van Bruggen N,Thibodeaux H,Palmer J T,et al．VEGF antagonism reduces edema formation and tissue damage after ischemia/reperfusion injury in the mouse brain[J]．J Clin Invest, 1999,104(11):1613-1620．

[8]Szigeti K,Sule N,Adesina A M,et al．Increased blood-brain barrier permeability with thymidine phosphorylase deficiency[J]．Ann Neurol,2004,56(6):881-886．

[9]Brown N S,Bicknell R．Thymidine phosphorylase,2-deoxy-Dribose and angiogenesis[J]．Biochem J,1998,334(Pt 1):1-8．

[10]Li W,Tanaka K,Morioka K,et al．Long-term effect of gene therapy for chronic ischemic myocardium using platelet-derived endothelial cell growth factor in dogs[J]．J Gene Med,2008,10 (4):412-420．

[11]Hemalatha T,Balachandran C,Manohar B M,et al．Myocardial expression of PDECGF is associated with extracellular matrix remodeling in experimental myocardial infarction in rats[J]．Biochem Cell Biol,2010,88(3):491-503．

[12]Yamada N,Li W,Ihaya A,et al．Platelet-derived endothelial cell growth factor gene therapy for limb ischemia[J]．J Vasc Surg, 2006,44(6):1322-1328．

[13]Lee S C,Lee K Y,Kim Y J,et al．Serum VEGF levels in acute ischaemic strokes are correlated with long-term prognosis[J]．Eur J Neurol,2010,17(1):45-51．

[14]Navarro-Sobrino M,Rosell A,Hernández-Guillamon M,et al．A large screening of angiogenesis biomarkers and their association with neurological outcome after ischemic stroke[J]．Atherosclerosis,2011,216(1):205-211．

Serum concentrations of platelet derived-endothelial cell growth factor in patients with cerebral infarction

Objective To investigate serum concentrations of platelet derived-endothelial cell growth factor(PD-ECGF) in patients with acute cerebral infarction．Methods Sixty patients with acute cerebral infarction were included．Serum concentrations of PD-ECGF and scores of National Institutes of Health Stroke Scale(NIHSS)were measured at 24h and d3,7,14 after the onset of stroke;and the volume of infarction were also documented．Results The mean values of serum PD-ECGF concentrations at 24 hours and d3,7,14 after onset were 4 080．62±1 569．27pg/ml,4 386．03±1 746．05pg/ml,5 473．24±2 312．75pg/ml and 3 365．72±1 421．76pg/ml,respectively(F=14．297,P＜0．05）,which were all higher than that of controls(2 687．92±950．60pg/ml,P＜0．05)．NIHSS scores at the corresponding time points were 6．35±4．09,6．25±4．45,5．42±4．44 and 4．68±4．49,respectively (F=1．925,P＞0．05)．The serum PD-ECGF concentrations were not correlated with cerebral infarction volumes(r=0．107,P＞0．05), but the cerebral infarction volume on d3 after the onset was correlated with NIHSS score(r=0．619,P＜0．05)．Conclusion The serum concentrations of PD-ECGF begin to rise after occurrence of infarction,which are consistent with the pathophysiological process of acute cerebral infarction,but not correlated with the degree of neurological impairment or rehabilitation．

Platelet derived-endothelial cell growth factor Cerebral infarction Neurologic impairment

2012-04-11）

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

嘉興市科技局科技計(jì)劃項(xiàng)目（2010AY1038）

314000 嘉興市第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（官俏兵、張曉玲、王琰萍、余波、萬(wàn)里紅），生化室（杜瑛媛）

張曉玲，E-mail:ruanguan@yahoo.cn