翟梅娟 孫麗君 黃斌 楊俊杰 壽樂(lè)意

Pax2和E-cadherin在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及臨床意義

翟梅娟 孫麗君 黃斌 楊俊杰 壽樂(lè)意

目的 探討Pax2和E-cadherin在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及臨床意義。 方法 采用免疫組織化學(xué)EnVision兩步法檢測(cè)10例正常卵巢組織、10例卵巢良性漿液性腫瘤、28例交界性漿液性腫瘤、72例漿液性腺癌中Pax2和E-cadherin的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)與漿液性腺癌的臨床分期和組織學(xué)分級(jí)的關(guān)系。 結(jié)果 （1）Pax2和E-cadherin在正常卵巢組織、良性漿液性腫瘤、交界性漿液性腫瘤及漿液性腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為：0、40.0%、64.3%、77.8%和0、10.0%、71.4%、55.6%，Pax2和E-cadherin的陽(yáng)性率在4組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。（2）Pax2在漿液性腺癌中的表達(dá)率隨臨床分期、病理分級(jí)的升高而增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；E-cadherin在漿液性腺癌中的表達(dá)率隨臨床分期的升高而下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表達(dá)率隨病理分級(jí)的升高有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論 Pax2和E-cadherin的表達(dá)可能從正常卵巢組織、良性漿液性腫瘤、交界性漿液性腫瘤到漿液性腺癌的發(fā)生及演變過(guò)程中起促進(jìn)作用；在漿液性腺癌中，Pax2的高表達(dá)和E-cadherin的低表達(dá)可能與漿液性腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示聯(lián)合檢測(cè)Pax2和E-cadherin對(duì)判斷漿液性腺癌的惡性程度和臨床預(yù)后的評(píng)估有指導(dǎo)意義。

卵巢漿液性腫瘤 Pax2 E-cadherin 免疫組織化學(xué)

Ovarian serous tumorPax2 E-cadherin Iimmunohistochemistry

卵巢癌是卵巢最常見(jiàn)的惡性上皮性腫瘤，占卵巢惡性腫瘤的40%左右，全球每年卵巢癌發(fā)病人數(shù)19.2萬(wàn)，死亡人數(shù)為1.6萬(wàn)[1]，卵巢癌病死率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之首。腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散是癌癥致死的主要原因。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Pax2和E-cadherin在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)，探討其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用及兩者的相互關(guān)系，綜合評(píng)價(jià)其在卵巢漿液性腫瘤的惡性程度和臨床預(yù)后判斷中的價(jià)值。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集本院1999年10月至2011年10月初次手術(shù)切除并經(jīng)病理檢查證實(shí)的卵巢良性漿液性腫瘤患者10例（良性組），年齡28～62（45.2±3.228）歲；卵巢交界性漿液性腫瘤28例（交界性組），年齡17～72（50.11±2.84）歲；卵巢漿液性腺癌72例（惡性組），年齡25～79（53.25±1.550）歲。按照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ-Ⅱ期16例，Ⅲ～Ⅳ期56例；病理分級(jí)：高分化12例，中、低分化60例。所有患者術(shù)前均未行放療、化療和生物治療。選取10例同期在我院手術(shù)的正常卵巢組織作為對(duì)照組，年齡38～62（48.8± 2.255）歲。4組患者年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

1.2 方法 所有標(biāo)本均經(jīng)4%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋。免疫組化采用EnVision兩步法染色。一抗Pax2選用兔抗人多克隆抗體（福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司），E-cadherin選用鼠抗人單克隆抗體（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，克隆號(hào)4A2C7，稀釋度1：80），具體步驟按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，抗原修復(fù)采用高壓鍋高溫修復(fù)，DAB顯色，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，Pax2以輸卵管上皮組織作為陽(yáng)性對(duì)照，E-cadherin以乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) Pax2以＞5%腫瘤細(xì)胞核著色視為陽(yáng)性[2]。E-cadherin以細(xì)胞膜/少量細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。每張切片在400倍的鏡下觀察10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)數(shù)出每張切片的陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。E-Cadherin陽(yáng)性細(xì)胞百分比:≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分。著色強(qiáng)度判斷:無(wú)著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞百分比和著色強(qiáng)度判斷，由兩項(xiàng)記分相乘所得，≥2分者為陽(yáng)性表達(dá)，＜2分者為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，免疫組化結(jié)果采用χ2檢驗(yàn)和Fisher精確概率法比較，相關(guān)性分析采用Spearman秩分析檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 Pax2和E-cadherin在卵巢漿液性腫瘤各組中的表達(dá) 見(jiàn)表1。

表1 Pax2和E-cadherin在卵巢漿液性腫瘤各組中的表達(dá)（例）

由表1可見(jiàn)，Pax2的表達(dá)在4組間表達(dá)有差異（χ2= 29.151，P=0.000）；對(duì)照組、良性組和交界性組3組間表達(dá)逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=16.250，P＜0.05），在交界性組中的表達(dá)率為64.3%，在惡性組中的表達(dá)率為77.8%，兩組間表達(dá)有升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.907，P＞0.05），見(jiàn)圖1～2。

圖1 卵巢漿液性腺癌（HE染色，×100）

圖2 卵巢漿液性腺癌Pax-2免疫組化（EnVision染色，×100）

E-cadherin在4組間表達(dá)有差異（χ2=27.395，P= 0.000）；對(duì)照組、良性組和交界性組3組間表達(dá)逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=25.785，P＜0.05）；交界性組與惡性組兩組間E-cadherin的表達(dá)有降低趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.116，P＞0.05），見(jiàn)圖3～4。

圖3 卵巢漿液性腺癌（HE染色，×100）

圖4 卵巢漿液性腺癌E-cadherin免疫組化（EnVision染色，×100）

2.2 Pax2和E-cadherin的表達(dá)與卵巢漿液性腺癌的臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表2。

表2 Pax2和E-cadherin與卵巢漿液性腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系（例）

由表2可見(jiàn)，Pax2的表達(dá)與卵巢漿液性腺癌臨床分期明顯相關(guān)（P=0.005），與病理分級(jí)相關(guān)（P=0.020）。E-cadherin的表達(dá)與卵巢漿液性腺癌臨床分期明顯相關(guān)（P=0.004），在高分化腺癌與中低分化腺癌兩組相比E-cadherin表達(dá)有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 Pax2和E-cadherin在卵巢漿液性腺癌中表達(dá)的相關(guān)性 見(jiàn)表3。

表3 Pax2和E-cadherin在卵巢漿液性腺癌中表達(dá)的相關(guān)性（例）

由表3可見(jiàn)，在72例卵巢漿液性腺癌中，Pax2和E-cadherin表達(dá)共同陽(yáng)性為26例，共同陰性為2例，兩者單獨(dú)陽(yáng)性表達(dá)分別為30例和14例，經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析表明，Pax2和E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.344，P＜0.05）。

3 討論

卵巢癌因其部位隱匿，早期很難有明顯的癥狀，易被忽略或認(rèn)為是其他疾病而延誤治療，所以確診時(shí)多為晚期，且病死率很高，5年生存率只有25%左右[3]。腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散是癌癥患者死亡的主要原因，而腫瘤細(xì)胞間黏附能力降低使瘤細(xì)胞有利于局部脫落、獲得侵襲力，同時(shí)，腫瘤細(xì)胞間凋亡的抑制，使腫瘤細(xì)胞刺激性增殖和生長(zhǎng)，這均與Pax2和E-cadherin的表達(dá)有一定的相關(guān)性。

Pax基因?qū)僦匾陌l(fā)育調(diào)控基因家族，可以編碼核轉(zhuǎn)錄因子，并已在哺乳動(dòng)物發(fā)育調(diào)控的過(guò)程中被證實(shí)。Pax2是Pax基因家族中的一位重要成員，屬于原癌基因，定位于染色體10q22.1-24.3，編碼一個(gè)成對(duì)結(jié)構(gòu)域和八聚體以及部分同源結(jié)構(gòu)域，具有間接調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)、抑制細(xì)胞凋亡的作用。可調(diào)控中樞神經(jīng)系統(tǒng)、眼、耳、乳腺、泌尿系統(tǒng)等的發(fā)育，正常情況下Pax2基因在胚胎器官發(fā)育早期表達(dá)，在晚期和成熟組織中關(guān)閉[4]。有研究顯示，Pax2在Wolffian管、苗勒管起源的組織中表達(dá)，并在67%的漿液性癌中表達(dá)，而在正常卵巢上皮、包涵囊腫上皮、間質(zhì)、性索分化結(jié)構(gòu)不表達(dá)[2]。在很多原發(fā)腫瘤和泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤中Pax2呈過(guò)表達(dá)，對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)和存活有著很大的幫助[5-6]，還可以增加體內(nèi)、體外血管的生成成活。Pax2能啟動(dòng)抑制腫瘤上皮細(xì)胞的凋亡，并且刺激細(xì)胞增殖，還可以通過(guò)抑制其他腫瘤抑制因子和細(xì)胞死亡途徑而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的增殖[7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，Pax2在正常卵巢組織中不表達(dá)，從良性漿液性腫瘤、交界性漿液性腫瘤到漿液性腺癌的表達(dá)逐漸升高，可能是卵巢漿液性腫瘤連續(xù)發(fā)展的不同階段，Pax2的高表達(dá)可能抑制了細(xì)胞的凋亡，使增殖加速，促使了漿液性腫瘤的癌變。在漿液性腺癌中，Ⅲ～Ⅳ期患者的Pax2陽(yáng)性表達(dá)率明顯比Ⅰ～Ⅱ期患者增加，兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），并且隨著病理分級(jí)的升高而增加，高分化陽(yáng)性率為50%，中低分化陽(yáng)性率為83.3%，相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示Pax2的過(guò)表達(dá)可能加速了卵巢漿液性腺癌的發(fā)展，在漿液性腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要的作用，檢測(cè)Pax2的表達(dá)水平可作為卵巢漿液性腺癌的惡性程度評(píng)價(jià)的相關(guān)指標(biāo)。但沈旭霞等[8]按兩級(jí)分級(jí)系統(tǒng)研究138例卵巢漿液性癌中Pax2的表達(dá)，顯示在低級(jí)別、Ⅰ期的漿液性癌中表達(dá)顯著上調(diào)，這可能與不同的樣本選擇和不同的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道，Pax2能上調(diào)神經(jīng)細(xì)胞黏附分子（neural-celladhesion molecule，NCAM）的表達(dá)，而NCAM能增強(qiáng)細(xì)胞的抗凋亡能力，并能促進(jìn)血管生成，Pax2還能誘導(dǎo)整合素αvβ3的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)[9]。Pax2在卵巢漿液性腫瘤發(fā)展中的作用是否與NCAM和αvβ3有關(guān)有待于進(jìn)一步的研究。

E-cadherin是分子量為120kDa的跨膜糖蛋白，屬于鈣離子依賴的黏附分子家族，主要介導(dǎo)上皮細(xì)胞間的粘附、維持細(xì)胞極性、參與分化調(diào)節(jié)，對(duì)組織結(jié)構(gòu)形態(tài)的維持和完整性起著重要的作用，其功能的降低/缺失可導(dǎo)致細(xì)胞連接的破壞，與細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移相關(guān)。據(jù)Kajiyama等[10]報(bào)道，在腹膜間皮細(xì)胞遷徙能力提高時(shí)，伴隨著上皮細(xì)胞E-Cadherin的低表達(dá)，研究認(rèn)為在胃癌、肝癌中E-cadherin的低表達(dá)與轉(zhuǎn)移有關(guān)。E-cadherin在人類惡性腫瘤中常為低表達(dá),與腫瘤組織的分化差有關(guān)。佟麗波等[11]研究顯示，E-cadherin在卵巢癌中的陽(yáng)性表達(dá)率與臨床晚期、組織低分化、淋巴結(jié)或腹腔轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。Faleiro-Rodrigues等[12]研究了104例卵巢癌發(fā)現(xiàn)E-cadherin與癌的臨床分期、組織分化和腹膜轉(zhuǎn)移有相關(guān)性,表明E-cadherin表達(dá)水平下降可作為癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的一個(gè)特征。

本研究結(jié)果顯示，E-cadherin在正常卵巢組織中不表達(dá)，在良性漿液性腫瘤、交界性漿液性腫瘤、漿液性腺癌中均有表達(dá)，且從良性漿液性腫瘤到交界性漿液性腫瘤表達(dá)逐漸升高,提示E-cadherin在卵巢漿液性腫瘤的形成中被誘導(dǎo)表達(dá),易形成種植轉(zhuǎn)移，與腫瘤的發(fā)生及演進(jìn)有關(guān)。交界性漿液性腫瘤與漿液性腺癌兩組間E-cadherin的表達(dá)有降低趨勢(shì)，可能與漿液性腺癌腫瘤細(xì)胞從局部脫落發(fā)生浸潤(rùn)，E-cadherin表達(dá)相應(yīng)減少有關(guān)；在漿液性腺癌高分化與中低分化兩組相比E-cadherin表達(dá)有下降趨勢(shì)，提示E-cadherin的表達(dá)與病理分級(jí)有一定關(guān)系，E-cadherin在Ⅲ、Ⅳ期漿液性腺癌患者陽(yáng)性表達(dá)率明顯比Ⅰ、Ⅱ期患者降低，兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.502，P＜0.05），說(shuō)明在晚期患者中E-cadherin的表達(dá)下降提示腫瘤有更高的侵襲力和不良預(yù)后。

總之，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多基因、多因子、多階段作用的極其復(fù)雜的病理過(guò)程，各種相關(guān)基因在卵巢漿液性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中相互影響，共同促使了腫瘤的形成，而侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多因素參與的復(fù)雜過(guò)程。本研究結(jié)果顯示，Pax2和E-cadherin的表達(dá)可能從正常卵巢組織、良性漿液性腫瘤、交界性漿液性腫瘤到漿液性腺癌的發(fā)生及演變過(guò)程中起促進(jìn)作用；在卵巢漿液性腺癌中Pax2和E-cadherin表達(dá)率呈負(fù)相關(guān)，可能兩者具有相互誘導(dǎo)或信息傳遞的調(diào)節(jié)作用，其相互機(jī)制關(guān)系有待進(jìn)一步研究，而Pax2的高表達(dá)和E-cadherin的低表達(dá)可能與漿液性腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。提示聯(lián)合檢測(cè)Pax2和E-cadherin可能對(duì)判斷卵巢漿液性腺癌的惡性程度和臨床預(yù)后的評(píng)估有指導(dǎo)意義。

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（本文編輯：沈昱平）

《浙江醫(yī)學(xué)》對(duì)圖表的要求

稿件中若有圖表，分別按其在正文中出現(xiàn)的先后次序連續(xù)編碼。每幅圖應(yīng)冠有圖題。說(shuō)明性的文字應(yīng)置于圖下方注釋中，并在注釋中標(biāo)明圖表中使用的全部非公知公用的縮寫。線條圖應(yīng)墨繪在白紙上，高寬比例以5∶7為宜。以計(jì)算機(jī)制圖者應(yīng)提供激光打印圖樣。照片圖要求有良好的清晰度和對(duì)比度；圖中需標(biāo)注的符號(hào)（包括箭頭）請(qǐng)用另紙標(biāo)上，不要直接寫在照片上。每幅圖的背面應(yīng)貼上標(biāo)簽，注明圖號(hào)、方向及作者姓名。若刊用人像，應(yīng)征得本人的書(shū)面同意，或遮蓋其能被辨認(rèn)出系何人的部分。大體標(biāo)本照片在圖內(nèi)應(yīng)有尺度標(biāo)記。病理照片要求注明染色方法和放大倍數(shù)。圖表中如有引自他刊者，應(yīng)注明出處。電子版投稿中圖片建議采用JPG格式。表格建議采用三橫線表（頂線、表頭線、底線），如遇有合計(jì)和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理內(nèi)容（如 值值等），則在此行上面加一條分界橫線；表內(nèi)數(shù)據(jù)要求同一指標(biāo)有效位數(shù)一致，一般按標(biāo)準(zhǔn)差的1/3確定有效位數(shù)。

本刊編輯部

2011-12-31）

311200 杭州師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬蕭山第一醫(yī)院病理科

翟梅娟，E-mail:dimeijuan@sina.com

【 Abstract】 ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of Pax2 and E-cadherin in ovarian serous tumor.Methods Pax2 and E-cadherin were examined by immunohistochemistry(EnVision method)in 10 samples from normal ovarian tissue,10 from ovarian serous adenoma,28 from ovarian serous borderline tumor and 72 from ovarian serous adenocarcinoma.The correlation of Pax2 and E-cadherin expression with clinical stage,pathological grade of serous adenocarcinoma were analyzed. Results The positive expression rates of Pax2 and E-cadherin in normal ovarian tissue,ovarian serous adenoma,ovarian serous borderline tumor and ovarian serous adenocarcinoma were 0,40.0%,64.3%,77.8%and 0,10.0%,71.4%,55.6%, respectively(P＜0.05).The expression rate of Pax2 in serous adenocarcinoma was increased with the rising of clinical stage and pathological grade of the tumor(P＜0.05);while the expression rate of E-cadherin in serous adenocarcinoma was decreased with the rising of clinical stage(P＜0.05). Conclusion The expression of Pax2 and E-cadherin may be involved in evolution from normal ovarian tissue,ovarian serous adenoma,ovarian serous borderline tumor to ovarian serous adenocarcinoma.In serous adenocarcinoma the high expression of Pax2 and low expression of E-cadherin may have correlation with the invasion and metastasis of serous adenocarcinoma，indicating that the combined detection of Pax2 and E-cadherin may of value in judgment the malignancy and clinic prognosis of serous adenocarcinoma.