孔 勤，劉瑞敏，壽旗揚(yáng)，肖 穎，朱科燕，陳民利

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心 比較醫(yī)學(xué)研究中心，杭州 310053)

肺纖維化(pulmonary fibrosis)是一種慢性、進(jìn)行性、不可逆轉(zhuǎn)的間質(zhì)性肺疾病，也是最常見的一種肺部疾病，主要以肺泡上皮損傷、成纖維細(xì)胞大量異常增生和細(xì)胞外基質(zhì)聚集增多為病理特征。臨床癥狀主要表現(xiàn)為干咳、呼吸困難，后期多死于呼吸衰竭。流行病學(xué)研究表明，該病病因各異，發(fā)病機(jī)制不清，導(dǎo)致近年全球發(fā)病率呈現(xiàn)不斷上升趨勢(shì)，預(yù)后較差，死亡率較高，且目前缺乏行之有效的治療方法［1］。因此尋找有效的治療藥物對(duì)于肺纖維化的防治就顯的十分重要。

丹參(salvia miltiorrhiza Bunge)為我國(guó)傳統(tǒng)重要藥用植物，為活血化瘀第一要藥。丹酚酸 A(salvianolic acid A，SAA)是從丹參中提取的水溶性酚酸類成分，也是其主要活性成分之一?，F(xiàn)代基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，SAA具有多種藥理作用，如抗氧化，抑制血栓形成，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞等［2－4］，且對(duì)于防止纖維發(fā)生類似的藥理作用亦有相關(guān)報(bào)道［5］。為了有效開發(fā)中藥的現(xiàn)代化應(yīng)用，本文主要觀察SAA對(duì)博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠模型的保護(hù)作用并初步探究其可能機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)環(huán)境

SPF級(jí)6～7周齡 Wistar雄性大鼠，體重200～220 g，60只，來源于中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心/上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，生產(chǎn)許可證:［SCXK(滬)2008-0016］;飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心屏障環(huán)境［SYXK(浙)2008-0115］。

1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑與儀器

丹酚酸A粉針劑，北京本草天源藥物研究院提供(批號(hào):100611);氫化可的松注射液，山西晉新雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司(批號(hào):201001285);注射用鹽酸博萊霉素(Bleomycin，BLM)，日本化藥株式會(huì)社(批號(hào):Y91450);超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)及谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)試劑盒(批號(hào):201000504);Allegra X-15R大容量離心機(jī)，美國(guó)貝克曼公司;MPA肺功能分析系統(tǒng)，上海奧爾科特生物科技有限公司;ALC壓力傳感器，上海奧爾科特生物科技有限公司;STP120組織脫水機(jī)、AP280包埋機(jī)、HM335E半自動(dòng)石蠟切片機(jī)、Leica ST5010染色劑，美國(guó) MICROM公司;尼康80I相差顯微鏡，日本 NIKON公司;Carl Zeiss Imaging Systems，德國(guó) ZEISS公司;HITACHI-7650型透射電鏡，Hitachi公司。

1.3 動(dòng)物分組與模型制備

Wistar大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后編號(hào)，按體重分層隨機(jī)分為6組，即正常對(duì)照組、模型組、丹酚酸A低(2.5 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高(10 mg/kg)劑量組、陽性對(duì)照組，每組10只。參照 Li等［6］方法進(jìn)行造模，正常對(duì)照組外，其余各組乙醚誘導(dǎo)麻醉，分離并暴露氣管，緩慢刺入氣管注入0.1 mL BLM(5 mg/kg)生理鹽水溶液，造模后第2天開始給藥，陽性對(duì)照組尾靜脈注射給予劑量為5 mg/(kg·bw)的氫化可的松注射液，模型組和正常對(duì)照組尾靜脈注射給予生理鹽水10 mL/(kg·bw)，每日一次，連續(xù)28 d。

1.4 肺指數(shù)的測(cè)定

大鼠麻醉后，取血，迅速取肺臟，用生理鹽水洗去血跡，剝凈表面粘連組織，濾紙吸干表面血液后，稱重，并計(jì)算臟器指數(shù)。

1.5 自由基測(cè)定

處死動(dòng)物，迅速打開腹腔，行腹主動(dòng)脈取血，3 000 rpm離心10 min，分離血清，按試劑盒測(cè)定血清SOD和GSH-Px活性，MDA含量。

1.6 肺功能測(cè)定

大鼠麻醉后固定于鼠臺(tái)，剪去頸部手術(shù)野毛，切開皮膚及肌層，分離氣管，在氣管上端剪一倒“T”字切口，插入“Y”型氣管插管，固定結(jié)扎。注意氣管插管要盡量靠近頭端，以免插管時(shí)損傷氣管隆凸或進(jìn)入一側(cè)肺。連接系統(tǒng)，待信號(hào)良好波形穩(wěn)定后開始數(shù)據(jù)采集及分析，連續(xù)記錄10 min。

1.7 肺組織蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin，HE)染色

取各組肺組織，10%中性甲醛固定，乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，進(jìn)行HE染色。

1.8 肺組織透射電鏡的觀察

取大鼠左肺，從不同部位取3小塊組織，2.5%戊二醛和1%鋨酸雙重固定，乙醇系列脫水，包埋，超薄切片。電鏡觀察。

1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察

正常大鼠精神狀態(tài)良好、活潑好動(dòng)、皮毛光澤發(fā)亮，體重日漸增加，呼吸平穩(wěn);模型對(duì)照組精神不振，行動(dòng)遲緩，皮毛枯槁、無光澤、多見皮毛倒立，身體較其他組消瘦，呼吸急促;給藥組及陽性對(duì)照組精神狀態(tài)良好、行動(dòng)相對(duì)靈活，飲食較好，毛發(fā)較潤(rùn)澤，狀態(tài)較好于模型對(duì)照組。

2.2 丹酚酸A對(duì)博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠體重及肺指數(shù)的影響

通過氣道給予博來霉素復(fù)制大鼠纖維化模型后，大鼠體型消瘦，體重增加緩慢，與正常組相比有顯著性差異(P＜0.05);給予丹酚酸 A后狀態(tài)較好于模型組，體重增加略高于模型組動(dòng)物，但均不具有顯著性差異;給予丹酚酸A后肺指數(shù)均較模型組有下降趨勢(shì)(圖1，彩插3)。

2.3 丹酚酸A對(duì)博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠血清自由基代謝的影響

由圖2可知，模型對(duì)照組大鼠血清中MDA含量顯著升高，SOD與GSH-Px的活性顯著降低，表明大鼠體內(nèi)自由基代謝出現(xiàn)異常，有氧化應(yīng)激反應(yīng)，給予SAA50，各組大鼠具有不同程度的恢復(fù)，提示丹酚酸A能夠增加氧自由基清除劑的含量，抑制體內(nèi)脂質(zhì)過氧化過程，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量，降低氧自由基代謝產(chǎn)物的損害，達(dá)到調(diào)節(jié)氧化/抗氧化系統(tǒng)平衡的作用，從而使機(jī)體細(xì)胞和組織免受損害，表明丹酚酸A可能是通過此機(jī)制一定程度緩解肺纖維化引起的損傷。

2.4 丹酚酸A對(duì)博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠肺

功能的影響

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，造模4周后，大鼠各項(xiàng)肺功能均較正常組有下降，可能是由于肺間質(zhì)存在大量成纖維細(xì)胞，導(dǎo)致呼吸不暢和限制性通氣功能障礙。由表2可知，造模后肺纖維化大鼠潮氣量(tidal volume，Vt)、每分鐘通氣量(minute ventilation，Ve)有顯著的下降，給予丹酚酸A后Vt和Ve有明顯增加;呼吸頻率(respiratory frequency，RF)亦有下降，但無顯著性差異。此外，與模型組大鼠相比，丹酚酸A還可改善肺纖維化大鼠吸氣峰值流速(peak flow of inspiration，PIF)，呼氣峰值流速(peak flow of expiration，PEF)，吸入75%和25%潮氣量時(shí)吸氣和呼氣流速見表3～5。

表1 丹酚酸A對(duì)肺纖維化大鼠自由基SOD、MDA及GSH-Px的影響(±s，n=10)Tab.1 Effects of SAA on SOD、MDA and GSH-Px of pulmonary fibrosis rats

表1 丹酚酸A對(duì)肺纖維化大鼠自由基SOD、MDA及GSH-Px的影響(±s，n=10)Tab.1 Effects of SAA on SOD、MDA and GSH-Px of pulmonary fibrosis rats

注:與正常對(duì)照組比較，ΔP ＜0.05，ΔΔP ＜0.01;與模型對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。Note:ΔP ＜0.05 and ΔΔP ＜0.01vs.control group;*P ＜0.05 and ＊＊P ＜0.01 vs.BLM group.

對(duì)照組 (Control) Saline，10 mL/kg 199.37±10.79 2.06±0.32 1074.16±152.64博來霉素 (BLM) Saline，10 mL/kg 186.47±8.66Δ 3.53±0.51ΔΔ 833.69± 81.00ΔΔ丹酚酸 A(SAA) 10 mg/kg 192.84 ±9.76 2.92 ±0.38＊＊ 919.37 ± 65.87*丹酚酸 A(SAA) 5 mg/kg 198.35 ±6.97＊＊ 3.24 ±0.72 1031.22 ±117.4＊＊丹酚酸 A(SAA) 2.5 mg/kg 195.18±5.84* 3.23±0.78 947.51± 91.49*氫化可的松 (HYD) 5 mg/kg 199.48 ±7.33＊＊ 3.05 ±0.42* 993.40 ±123.81＊＊

注:Δ:與正常對(duì)照組相比P＜0.05;*與BLM組相比P＜0.05。圖2 肺纖維化大鼠血清自由基的變化。Note:ΔP ＜ 0.05 and ΔΔP ＜ 0.01 vs.control group;*P ＜0.05 and ＊＊P ＜0.01 vs.BLM group.Fig.2 Changes of SOD，MDA and GSH-Px of bleomycin-induced pulmonary fibrosis rats.

表2 丹酚酸A對(duì)肺纖維化大鼠肺功能RF、Vt及Ve的影響(x±s，n=10)Tab.2 Effects of SAA on respiratory frequency，tidal volume，minute ventilation of pulmonary fibrosis rats

表2 丹酚酸A對(duì)肺纖維化大鼠肺功能RF、Vt及Ve的影響(x±s，n=10)Tab.2 Effects of SAA on respiratory frequency，tidal volume，minute ventilation of pulmonary fibrosis rats

注:與正常對(duì)照組比較，ΔP ＜0.05，ΔΔP ＜0.01;與模型對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。Note:ΔP ＜ 0.05 and ΔΔP ＜0.01vs.control group;*P ＜ 0.05 and ＊＊P ＜ 0.01 vs.BLM group.

對(duì)照組 (Control) Saline，10 mL/kg 161.08±36.70 0.976±0.189 158.01±51.13博來霉素 (BLM) Saline，10 mL/kg 136.79 ±22.28 0.393 ±0.065ΔΔ 53.91 ±13.83ΔΔ丹酚酸 A(SAA) 2.5 mg/kg 136.57 ±19.28 1.003 ±0.259＊＊ 132.40 ±41.57＊＊丹酚酸 A(SAA) 5 mg/kg 141.04 ±19.18 1.074 ±0.206＊＊ 150.90 ±36.18＊＊丹酚酸 A(SAA) 10 mg/kg 147.42 ±18.84 0.940 ±0.184＊＊ 137.03 ±26.23＊＊?dú)浠傻乃?(HYD) 5 mg/kg 141.67 ±27.99 0.942 ±0.224＊＊ 132.74 ±42.34＊＊

表3 丹酚酸A對(duì)肺纖維化大鼠肺功能PIF和PEF的影響(±s，n=10)Tab.3 Effects of SAA on peak flow of inspiration and expiration of pulmonary fibrosis rats

表3 丹酚酸A對(duì)肺纖維化大鼠肺功能PIF和PEF的影響(±s，n=10)Tab.3 Effects of SAA on peak flow of inspiration and expiration of pulmonary fibrosis rats

注:與正常對(duì)照組比較，ΔP ＜0.05，ΔΔP ＜0.01;與模型對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。Note:ΔP ＜ 0.05 and ΔΔP ＜0.01 vs.control group;*P ＜ 0.05 and ＊＊P ＜ 0.01 vs.BLM group.

10 mL/kg 11.101±3.186 9.141±2.386博來霉素 (BLM) Saline，10 mL/kg 3.426±0.911ΔΔ 4.568±1.007ΔΔ丹酚酸 A(SAA) 2.5 mg/kg 10.744 ±2.919＊＊ 7.641 ±2.553＊＊丹酚酸 A(SAA) 5 mg/kg 12.332 ±3.874＊＊ 8.827 ±1.368＊＊丹酚酸 A(SAA) 10 mg/kg 12.557 ±3.209＊＊ 7.569 ±2.092＊＊?dú)浠傻乃?(HYD) 5 mg/kg 10.845±3.334＊＊ 7.820±1.911對(duì)照組 (Control) Saline，＊＊

表4 丹酚酸A對(duì)肺纖維化大鼠肺功能IF75和IF25的影響(±s，n=10)Tab.4 Effects of SAA on inspiration flow 75%and 25%of pulmonary fibrosis rats

表4 丹酚酸A對(duì)肺纖維化大鼠肺功能IF75和IF25的影響(±s，n=10)Tab.4 Effects of SAA on inspiration flow 75%and 25%of pulmonary fibrosis rats

注:與正常對(duì)照組比較，ΔP ＜0.05，ΔΔP ＜0.01;與模型對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。Note:ΔP ＜0.05 and ΔΔP ＜0.01vs.control group;*P ＜0.05 and ＊＊P ＜0.01 vs.BLM group.

10 mL/kg 8.846±2.776 10.677±2.869博來霉素 (BLM) Saline，10 mL/kg 2.045±0.525ΔΔ 3.158 ±0.863ΔΔ丹酚酸 A(SAA) 2.5 mg/kg 7.333 ±2.906＊＊ 10.803 ±2.492＊＊丹酚酸 A(SAA) 5 mg/kg 8.587 ±2.442＊＊ 11.902 ±2.723＊＊丹酚酸 A(SAA) 10 mg/kg 9.305 ±2.916＊＊ 11.271 ±2.755＊＊?dú)浠傻乃?(HYD) 5 mg/kg 7.792±2.615＊＊ 9.810±2.781對(duì)照組 (Control) Saline，＊＊

表5 丹酚酸A對(duì)肺纖維化大鼠肺功能EF75及EF25的影響(±s，n=10)Tab.5 Effects of SAA on expiration low 75%and 25%of pulmonary fibrosis rats

表5 丹酚酸A對(duì)肺纖維化大鼠肺功能EF75及EF25的影響(±s，n=10)Tab.5 Effects of SAA on expiration low 75%and 25%of pulmonary fibrosis rats

注:與正常對(duì)照組比較，ΔP ＜0.05，ΔΔP ＜0.01;與模型對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。Note:ΔP ＜0.05 and ΔΔP ＜0.01 vs.control group;*P ＜0.05 and ＊＊P ＜0.01 vs.BLM group.

4.866±1.161 10 mL/kg 7.040±2.159 7.492±1.863博來霉素 (BLM) Saline，10 mL/kg 3.099±0.813ΔΔ 3.966±0.833ΔΔ丹酚酸 A(SAA) 2.5 mg/kg 5.450±1.604＊＊ 4.810±1.104丹酚酸 A(SAA) 5 mg/kg 5.877±1.921＊＊ 5.418±1.314*丹酚酸 A(SAA) 10 mg/kg 5.179±0.999＊＊ 4.555±0.793氫化可的松 (HYD) 5 mg/kg 4.846±1.117＊＊對(duì)照組 (Control) Saline，

2.5 肺組織HE染色結(jié)果

正常對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡內(nèi)未見炎性細(xì)胞，肺泡間隔無充血、水腫及增厚;給予博來霉素的大鼠肺組織有著明顯的病變，肺泡間隔增寬，有纖維結(jié)締組織增生，肺泡壁破壞，內(nèi)見淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)血管充血，文獻(xiàn)報(bào)道一致，可判斷模型成功。給予高、中、低劑量的丹酚酸 A和氫化可的松注射液后，肺泡間隔輕度增寬，有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡炎不明顯(圖3，彩插3)。

2.6 丹酚酸A對(duì)博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠組織透射電鏡的影響

正常大鼠肺I型、II型上皮細(xì)胞無變性損傷和增生，基底膜延續(xù)、無中斷;給予博來霉素造模后，大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞輕度增生，肺組織呈現(xiàn)空泡樣變，纖維細(xì)胞增生，膠原纖維明顯增多;基底膜增厚，間質(zhì)巨噬細(xì)胞增多;給予不同劑量的丹酚酸A和氫化可的松注射液后，雖與模型組大鼠表現(xiàn)出基本一致的病理變化，但膠原沉積減少，肺泡型細(xì)胞微絨毛破壞、脫落，線粒體腫脹，但線粒體清晰可見(圖4)。

3 討論

肺纖維化是臨床上較常見的一種肺間質(zhì)疾病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，尚不明晰，對(duì)人類健康危害極大，確診后3～5年內(nèi)大多死于呼吸衰竭，傳統(tǒng)藥物療效不理想，目前除肺移植外沒有確切可行的治療方法［7］。肺纖維化動(dòng)物模型是探討肺纖維化機(jī)制以及篩選抗纖維化藥物研究的重要實(shí)驗(yàn)材料和手段。博來霉素為弱堿性糖肽類抗生素抗腫瘤藥物，臨床上主要被用于治療淋巴瘤;但其可嚴(yán)重?fù)p傷肺組織，造成急性肺損傷和間質(zhì)類纖維疾病，故博來霉素多被用于復(fù)制動(dòng)物肺纖維化模型，利用其研究纖維化發(fā)病機(jī)制和開發(fā)新藥之用［8］。

研究表明肺纖維化的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜，涉及有氧化應(yīng)激，上皮細(xì)胞的損傷與修復(fù)，炎性細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的釋放及成纖維細(xì)胞的異常增生，由于肺纖維化的發(fā)生對(duì)于肺組織結(jié)構(gòu)有著嚴(yán)重的破壞，與此同時(shí)會(huì)造成肺功能的失調(diào)，肺泡微環(huán)境紊亂，結(jié)構(gòu)破壞。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，給予博來霉素后，體重增加緩慢，肺指數(shù)升高，且一般生理特征較正常組均有一定下降;給予不同劑量的丹酚酸 A后，體重明顯增加，肺指數(shù)明顯提高，肺通氣得到有效緩解，肺功能得到明顯改善，表明丹酚酸A可有效減輕博來霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化。此外，病理檢測(cè)發(fā)現(xiàn)給予丹酚酸A后肺組織肺泡間隔變窄，炎癥減輕，肺纖維程度有明顯減弱;投射電鏡結(jié)果表明丹酚酸A可保護(hù)肺泡上皮細(xì)胞，保護(hù)肺組織結(jié)構(gòu)和減少膠原纖維等生成，尤其是膠原的生成，會(huì)充斥著整個(gè)肺泡間隙并嚴(yán)重破壞肺組織結(jié)構(gòu)［9］。通過電鏡結(jié)果進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)丹酚酸A對(duì)于保護(hù)上皮細(xì)胞以及抑制膠原纖維的生成有著較好的作用。

注:A:正常對(duì)照組 (×6000);B:模型對(duì)照組 (×5000);C:丹酚酸A高劑量組 (×5000);D:丹酚酸A中劑量組(×12000);E:丹酚酸A低劑量組 (×5000);F:陽性對(duì)照組 (×6000)。圖4 肺纖維化大鼠肺組織透射電鏡圖Note:A:Controlgroup-Magnification×6000;B:BLM group-Magnification×5000;C:SAA(10 mg/kg)group-Magnification×5000;D:SAA(5 mg/kg)group-Magnification×12000;E:SAA(2.5 mg/kg)group-Magnification×5000;F:HYD group-Magnification×6000.Fig.4 Transmission electron microscopes of lung tissues

此外，研究發(fā)現(xiàn)肺纖維化發(fā)病過程中存在氧化/抗氧化失衡，過度的氧化損傷會(huì)造成細(xì)胞的壞死性死亡及機(jī)體損傷。氧自由基能破壞生物膜和損害細(xì)胞功能，研究表明丹酚酸A是丹參提取物中抗氧化作用最強(qiáng)的物質(zhì)，且有研究報(bào)道丹酚酸A可一定程度的保護(hù)大鼠肝纖維化的發(fā)生［10］，故我們還進(jìn)一步觀察了丹酚酸 A對(duì)血清中 SOD、MDA和GSH-Px的影響，研究表明丹酚酸A可提高 SOD和GSH-Px活性并降低MDA含量，從而達(dá)到抑制體內(nèi)脂質(zhì)過氧化過程、平衡系統(tǒng)的作用，具有較強(qiáng)的清除自由基作用和抗氧化作用，這表明丹酚酸A抗纖維化作用可能與其有關(guān)。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)丹酚酸A可有效緩解博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠癥狀，有效改善限制性通氣障礙，恢復(fù)肺功能;透射電鏡觀察顯示，丹酚酸A具有減緩Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞增生，抑制纖維結(jié)締組織沉積及保護(hù)肺泡壁的作用;同時(shí)，丹酚酸A具有抑制體內(nèi)脂質(zhì)過氧化過程，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量，從而使機(jī)體細(xì)胞和組織免受損害，起到保護(hù)肺纖維化的作用。這也體現(xiàn)了丹酚酸A多靶點(diǎn)的藥理作用，但具體相關(guān)機(jī)制仍需要我們進(jìn)一步探討研究。

(本文圖 1，3 見彩插 3。)

注：Δ：與正常對(duì)照組相比P＜0.05；*與BLM組相比P＜0.05.圖1 肺纖維化大鼠體重及肺指數(shù)的變化Note: Δ P ＜0.05 vs. control group; *P ＜0.05 vs. BLM group.Fig.1 Changes of weight and pulmonary index of bleomycin induced pulmonary fibrosis rats

圖3 肺纖維化大鼠肺組織切片HE染色(×400)Fig.3 HE staining of lung tissues of pulmonary fibrosis of rats (×400)

［1］King TJ，Pardo A，Selman M.Idiopathic pulmonary fibrosis［J］.Lancet，2011，378(9807):1949 －1961.

［2］Huang ZS，Zeng CL，Zhu LJ，et al.Salvianolic acid A inhibits platelet activation and arterialthro mbosisvia inhibition of phosphoinositide 3-kinase［J］.J Thromb Haemost，2010，8(6):1383－1393.

［3］Yang LL，Li DY，Zhang YB，et al.Salvianolic acid A inhibits angiotensin II-induced proliferation ofhuman umbilicalvein endothelial cells by attenuating the production of ROS［J］.Acta Pharmacol Sin，2012，33(1):41－48.

［4］Yang XY，Qiang GF，Zhang L，et al.Salvianolic acid A protects against vascular endothelial dysfunction in high-fat diet fed and streptozotocin-induced diabetic rats［J］.J Asian Nat Prod Res，2011，13(10):884－894.

［5］Tsai MK，Lin YL，Huang YT.Effects of salvianolic acids on oxidative stress and hepatic fibrosis in rats［J］.Toxicol Appl Pharmacol，2010，242(2):155 －164.

［6］Li S，Yang X，Li W，et al.N-acetylcysteine down regulation of lysyl oxidase activity alleviating bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats［J］.Respiration，2012，84(6):509 －517.

［7］Degryse AL，Tanjore H，Xu XC，et al.Repetitive intratracheal bleomycin models several features of idiopathic pulmonary fibrosis［J］.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2010，299(4):L442 －452.

［8］Mouratis MA，Aidinis V.Modelingpulmonaryfibrosiswith bleomycin［J］.Curr Opin Pulm Med，2011，17(5):355 － 361.

［9］Noble PW， BarkauskasCE， Jiang D.Pulmonary fibrosis:patterns and perpetrators［J］.J Clin Invest，2012，122(8):2756－2762.

［10］Tsai MK，Lin YL，Huang YT.Effects of salvianolic acids on oxidative stress and hepatic fibrosis in rats［J］.Toxicol Appl Pharmacol，2010，242(2):155 －164.