葉明霞，孔利佳

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實驗動物學(xué)部，武漢 430030)

大鼠是國際通用的標(biāo)準(zhǔn)化的實驗動物，在多種醫(yī)學(xué)、生物學(xué)試驗研究中廣泛應(yīng)用，在行大鼠開胸手術(shù)需呼吸機(jī)輔助呼吸、呼吸功能檢測或氣管內(nèi)給藥等動物實驗中，順利的大鼠氣管插管是實驗成敗的前提。目前常用的插管方法有:頸部切口插管法［1］、頸部切口鋼絲引導(dǎo)插管法［2、3］、盲插法、內(nèi)窺鏡輔助插管法［4、5］、經(jīng)口明視插管法［6］和經(jīng)頸部透照氣管插管法等，但前兩種是有創(chuàng)的插管方法，會對氣管及咽喉部周圍組織造成損傷，從而影響插管的重復(fù)進(jìn)行，進(jìn)而影響整個實驗的結(jié)果。盲插的成功率低，反復(fù)插易損傷氣道，容易造成喉痙攣、喉水腫、氣管穿孔、出血和分泌物過多阻塞氣管導(dǎo)致窒息等并發(fā)癥，影響實驗結(jié)果;所以無創(chuàng)的插管方法為大家所推崇，但由于大鼠呼吸頻率較快、口腔狹小、聲門位置較高，插管時聲門暴露困難，多年來諸多學(xué)者對大鼠氣管內(nèi)插管的方法和插管器械做了大量的研究和改進(jìn)。專用的大小鼠氣管插管內(nèi)窺鏡小導(dǎo)管裝置，價格昂貴，不適于教學(xué)實驗;也有人借助臨床耳鼻喉科的額鏡進(jìn)行輔助插管。我們在反復(fù)實踐中，對直視插管方法進(jìn)行了多方面的摸索，自創(chuàng)了小器械，取得了較為滿意的效果，并采用經(jīng)額鏡輔助和經(jīng)頸透照兩種直視氣管插管方法，為大鼠進(jìn)行插管操作，對兩種方法的安全性和有效性進(jìn)行了比較，現(xiàn)報道如下:

1 材料和方法

1.1 動物

SD大鼠40只，雌雄各半，體重180～300 g，由華中科技大學(xué)實驗動物中心提供【SCXK(鄂)2010-0009】。實驗操作在華中科技大學(xué)實驗動物中心屏障動物實驗設(shè)施內(nèi)進(jìn)行【SYXK(鄂)2010-0057】。根據(jù)體重分層隨機(jī)分配的原則，將大鼠分為經(jīng)額鏡輔助組和經(jīng)頸透照組兩個組。

1.2 其他材料

額鏡、照明燈、干凈紗布、大功率冷光源、自制開口器、氣管導(dǎo)管、小棉簽、玻片一個。

1.2.1 自制開口器

成年大鼠聲門張開時直徑約為1.5～2.5 mm，從切牙到舌根的距離約為3 cm，切牙到氣管聲門的距離約為5 cm，從第一氣管環(huán)到氣管分叉處的距離為3 cm左右，氣管環(huán)呈扁橢圓形，水平徑約3.5 mm，垂直徑約2 mm。根據(jù)其解剖結(jié)構(gòu)，使用一次性2 mL塑料注射器針筒，尾端部加工成為楔形(如圖1，彩插4)，楔形前端角度約為25°，前端處理光滑，以防刮傷大鼠口腔內(nèi)黏膜組織，導(dǎo)管頂端和底端長度可根據(jù)大鼠體重略加修改。

1.2.2 氣管導(dǎo)管

采用16～20 G靜脈留置針，針頭鈍化處理，針頭長度略短于套管，彎曲約15度;或者使用12號灌胃針［7］(16 G)(如圖 2，彩插 4)。根據(jù)不同體重大鼠選擇不同型號留置針。150 g左右體重大鼠采用20G留置針、200～300 g大鼠采用18 G留置針、300～350 g大鼠采用16 G留置針。

1.3 麻醉

動物稱重后，阿托品1 mg/(kg·bw)皮下注射，10 min后10%的水合氯醛，3 mL/kg體重的劑量腹腔注射麻醉，針刺大鼠腳掌無反射，證明麻醉完全。

1.4 經(jīng)額鏡輔助組

術(shù)者戴上額鏡，調(diào)整光源。將大鼠仰臥于手術(shù)板上，頭朝向術(shù)者，用棉線將大鼠上門齒固定于手術(shù)板一端的釘子上，傾斜手術(shù)板約45°，使大鼠頭側(cè)墊高，左手將鼠舌用紗布包裹，向左嘴角外上方拉出口腔，使口腔張開，調(diào)整額鏡將照射光源引入口腔，右手持插管，彎曲端朝上，向上輕壓大鼠舌根部，即能看到大鼠的聲門隨著呼吸開啟與閉合，趁聲門打開瞬間迅速將氣管導(dǎo)管插入氣道，退出管芯，將玻片放置于管口，如插管是在氣道中，則有圓形霧斑產(chǎn)生(即水蒸氣凝結(jié))，若無則判定插入不成功，應(yīng)立即拔管，稍后重插。

1.5 經(jīng)頸透照組

大鼠固定方法同上，將光源靠近大鼠下頜部，術(shù)者左手將鼠舌用紗布包裹，向左嘴角外上方拉出口腔，右手持自制開口器，長端在上插入大鼠口腔(如圖3，彩插4)，尾端抵住大鼠上門齒，然后捏住開口器，口腔外側(cè)端下壓，口腔內(nèi)側(cè)長端上挑，使其輕壓舌根部，暴露聲門，光源透過大鼠頸部薄薄的皮膚和肌層，能清楚的看到大鼠的聲門隨著呼吸如魚嘴般開啟與閉合(如圖4，彩插4)，此時術(shù)者左手放開鼠舌，捏住開口器，保持喉部暴露狀態(tài)，右手持插管，彎曲端朝上(如圖5，彩插4)，從開口器中進(jìn)入，趁聲門打開瞬間迅速將氣管插管插入氣道，退出針芯，將留置套管留在氣道內(nèi)。將玻片放置于管口，如插管是在氣道中，則有圓形霧斑產(chǎn)生(即水蒸氣凝結(jié))，若無則判定插入不成功，應(yīng)立即拔管，稍后重插。圖6(彩插4)示插入氣管成功后，插管前端到達(dá)的部位(箭頭所示)。

1.6 觀察指標(biāo)

兩組均用秒表計時，分別統(tǒng)計兩組插管操作時間(從大鼠麻醉固定好，準(zhǔn)備插管開始到確定插管成功所需時間，以秒為單位)、插管次數(shù)、插管一次成功率、一周后存活率。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組氣管插管時間、插管次數(shù)及插管一次成功率的比較

經(jīng)頸透照組的插管操作時間、插管次數(shù)、一次插管成功率均優(yōu)于經(jīng)額鏡輔助組(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組氣管插管時間、插管次數(shù)的比較(x±s，n=20)Tab.1 Comparison of the time and frequency of intubation between groups

表1 兩組氣管插管時間、插管次數(shù)的比較(x±s，n=20)Tab.1 Comparison of the time and frequency of intubation between groups

注:與經(jīng)額鏡輔助組比較，★P＜0.05。Note:Compared with the conventional groups，★ P ＜0.05.

別插管時間 插管次數(shù) 一次插Thefrequency of intubation管成功率(%)組Group The time of intubation The success rate of the first intubation經(jīng)額鏡輔助組The conventional group 36.41±3.71 1.78±1.03 60(12/20)經(jīng)頸透照組The homemade instruments group 10.83±1.69★ 1.04±0.21★ 95(19/20)★

表2 兩組大鼠氣管拔管1 w后存活率比較(±s，n=20)Tab.2 Comparison of the survival rate after extubation 1 week between two groups

表2 兩組大鼠氣管拔管1 w后存活率比較(±s，n=20)Tab.2 Comparison of the survival rate after extubation 1 week between two groups

注:與經(jīng)額鏡輔助組比較，★P＞0.05。Note:Compared with the conventional groups，★ P ＞0.05.

經(jīng)額鏡輔助組The conventional group 17 85經(jīng)頸透照組The homemade instruments group 20 100★

2.2 兩組大鼠氣管拔管1周后存活率比較

經(jīng)頸透照組大鼠均存活，存活率100%，術(shù)后能自主飲食，活動自如。經(jīng)額鏡輔助組大鼠存活率80%，其中一只在術(shù)中死亡，另2只在術(shù)后1d內(nèi)死亡，拔管1周后的存活率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表 2。

3 討論

3.1 順利進(jìn)行直視下插管須注意以下要點(diǎn):

(1)適度的麻醉:合適的麻醉深度是成功完成氣管插管的前提，麻醉過淺，過度牽拉舌體會造成大鼠抵抗，插管過程中會造成強(qiáng)烈應(yīng)激反應(yīng)，大鼠嘔吐反射明顯，并且出現(xiàn)肢體扭動、呼吸節(jié)律紊亂、聲門關(guān)閉、氣管高度緊張和分泌物增加等，不易將導(dǎo)管插入氣道，強(qiáng)行插管易造成口咽部水腫、聲帶損傷、喉痙攣、會厭或上氣道出血等并發(fā)癥。麻醉過深則易造成實驗動物發(fā)生呼吸抑制，如不能盡快完成氣管插管極易致實驗動物死亡。大鼠麻醉后用一小棉簽輕觸其喉頭，以沒有嘔吐反射為宜。

(2)適當(dāng)?shù)捏w位:將大鼠的上切牙固定在手術(shù)板邊緣，手術(shù)板抬高傾斜45°，保持大鼠頭和頸背部在同一水平位，有利于顯露聲門和進(jìn)行插管操作。

(3)大鼠呼吸道檢查:麻醉劑容易使大鼠喉部產(chǎn)生分泌物，阿托品可有效減少氣道分泌物產(chǎn)生。插管前先檢查喉頭、聲門周圍粘膜有無出血和水腫，有無分泌物，若有出血和水腫的大鼠放棄插管，并給予該動物相應(yīng)的治療;若只是有分泌物，先用自制小消毒棉簽對口腔及喉部進(jìn)行輕柔擦拭干凈后，再行插管。術(shù)畢拔管后，仍需要再進(jìn)行一次呼吸道清潔。

(4)合適的氣管導(dǎo)管:采用筆者所介紹的靜脈留置針或小鼠灌胃針，長度和直徑合適，可避免插入過深進(jìn)入一側(cè)支氣管，或管徑過粗損傷氣道。另外插管彎曲角度不可過大，插管方向要正確，避免將氣道及喉部扎破而造成大鼠死亡。

(5)正確的插管方法:大鼠仰臥固定，氣道在食道上方，開口器上挑，氣道口一般清晰可見，聲門呈魚嘴狀開合，將插管弧度朝上，把握好大鼠呼吸節(jié)奏、趁吸氣時聲門張開，快速插入導(dǎo)管，即可成功，可有效避免插入食管。

(6)插管成功的檢測標(biāo)準(zhǔn):將一張玻片放置在導(dǎo)管口處，觀察玻片上是否有水蒸氣凝結(jié)，插入成功有霧斑，不成功則沒有，此方法簡單方便，準(zhǔn)確，節(jié)約時間。

3.2 采用本開口器直視插管法值得推廣

本試驗中對比使用了兩種在大鼠試驗中常用的無創(chuàng)直視氣管插管的方法，發(fā)現(xiàn)這兩種方法都能完成大鼠氣管插管，額鏡輔助插管的優(yōu)點(diǎn)為材料易得，操作直觀，缺點(diǎn)為插管視野狹小、口腔內(nèi)亮度不足，影響聲門的暴露和識別。采用筆者自制的開口器，經(jīng)頸透照插管操作更簡單，不需佩戴和調(diào)整額鏡，而且視野更清楚，氣道口清晰可見，只要把握好大鼠呼吸節(jié)奏，插管成功率很高，且縮短了操作時間，顯著降低氣管插管后的死亡率，是進(jìn)行大鼠氣管插管的好方法，而且此開口器材料易得，價格低廉，使用簡單，值得大力推廣，特別適用于廣大動物實驗教學(xué)中。

氣管插管是多種動物實驗的基本操作之一。多年來大鼠氣管插管的方法不斷改進(jìn)，總體遵循著減少創(chuàng)傷和應(yīng)激，改善聲門暴露條件，提高插管速度和成功率，減少插管時缺氧發(fā)生的原則。隨著科技不斷進(jìn)步，對大鼠氣管插管方法的改進(jìn)集中在插管工具的革新上，各種插管工具有效降低了大鼠氣管插管的難度，使動物實驗質(zhì)量有了明顯提高。與此同時，工具再好，操作者只有通過不斷實踐，積累經(jīng)驗，才能真正提高大鼠氣管插管的質(zhì)量。

(本文圖 1，2，3，4，5，6 見彩插 4。)

圖1 自制開口器Fig.1 Homemade instrument

圖2 氣管導(dǎo)管Fig.2 Orotracheal intubation

圖3 開口器插入方法Fig.3 Method of the mouth-gag insert

圖4 通過開口器看到聲門Fig.4 Seen glottis through the mouth-gag

圖5 插管進(jìn)入方法Fig.5 Method of the intubation insert

圖6 插管到達(dá)的部位Fig.6 Parts of the intubation reach

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