劉國(guó)忠石錚郭回希

1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院肝膽胰外科，福建 福州 350005；

2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科，福建 福州 350005

索拉菲尼、PDTC聯(lián)用對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1的作用研究

劉國(guó)忠1石錚1郭回希2

1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院肝膽胰外科，福建 福州 350005；

2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科，福建 福州 350005

背景與目的：多分子靶向藥物索拉菲尼(sorafenib)可抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，具有廣泛生物學(xué)活性，但單藥治療胰腺癌效果較差，可能與腫瘤中核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclearfactor-kappa B，NF-κB)通路激活有關(guān)，因此有必要尋求聯(lián)合NF-κB活化抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)以提高療效。本研究觀測(cè)索拉菲尼聯(lián)合PDTC對(duì)體外人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1的細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期的影響及其對(duì)細(xì)胞質(zhì)中NF-κB表達(dá)的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。方法：以單藥不同濃度的索拉菲尼(1.5、3.0、6.0、12.0 μmol/L)、PDTC(10.0、25.0、50.0、100.0 μmol/L)及低濃度聯(lián)合用藥(3.0 μmol/L索拉菲尼+25.0 μmol/L PDTC)進(jìn)行分組，在用藥后24、36、48、72 h，MTT法檢測(cè)各組對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1細(xì)胞增殖的抑制作用并分別計(jì)算出細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(IC50)；在用藥后48 h，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響；在用藥后48 h，免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察各藥物組NF-κB在細(xì)胞中表達(dá)水平的變化。結(jié)果：索拉菲尼和PDTC均能顯著抑制胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1的增殖，但單藥IC50值較高，低濃度聯(lián)合用藥組能顯著提高細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(P＜0.05)。索拉菲尼、PDTC及低濃度聯(lián)合用藥組細(xì)胞均發(fā)生G0/G1期停滯(P＜0.05)，S期細(xì)胞減少，低濃度聯(lián)合用藥組效果優(yōu)于單藥組(P＜0.05)。索拉菲尼誘導(dǎo)NF-κB在胰腺癌PANC-1細(xì)胞內(nèi)表達(dá)明顯增強(qiáng)，低濃度聯(lián)合用藥組誘導(dǎo)后胰腺癌PANC-1細(xì)胞中NF-κB的表達(dá)明顯減弱(P＜0.05)。結(jié)論：索拉菲尼和PDTC在體外對(duì)PANC-1細(xì)胞增殖均具有抑制作用，但單藥效果不佳。PDTC和索拉菲尼聯(lián)合應(yīng)用能明顯提高胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率，并使細(xì)胞發(fā)生G0/G1期停滯，其原因可能是PDTC通過(guò)抑制NF-κB活化，增強(qiáng)PANC-1細(xì)胞對(duì)索拉菲尼的敏感性。

索拉菲尼；吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽；細(xì)胞增殖；細(xì)胞周期；核轉(zhuǎn)錄因子-κB

胰腺癌目前是臨床較常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，已成為全球癌癥相關(guān)死亡的第4大原因［1-2］。外科切除是可能治愈該病的唯一手段，但預(yù)后不佳。因此，如何更有效地治療胰腺癌成為近年來(lái)醫(yī)學(xué)研究和探討的熱點(diǎn)。

近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，多分子靶向藥物索拉菲尼(sorafenib)可抑制實(shí)體性腫瘤的生長(zhǎng)［3-4］，但在抑制胰腺癌的過(guò)程中缺乏有效性，其原因可能與腫瘤中核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclearfactorkappa B，NF-κB)通路激活有關(guān)［5］。吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)是一種可以通透細(xì)胞膜的NF-κB活化抑制劑，可以在多種細(xì)胞中抑制NF-κB的激活。本研究通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，分別使用不同濃度索拉菲尼、PDTC及兩藥低濃度聯(lián)合用藥，觀察其對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1生長(zhǎng)增殖及細(xì)胞周期的影響，探討索拉菲尼對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1的NF-κB通路的激活及PDTC對(duì)索拉菲尼激活的NF-κB信號(hào)通路的抑制作用，為胰腺癌的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞與試劑

索拉菲尼購(gòu)自拜耳公司，劑型為每片200 mg，用100%DMSO溶解，-20 ℃保存，實(shí)驗(yàn)時(shí)稀釋，DMSO終濃度＜0.5%。PDTC購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整濃度配制成為2 mmol/L備用，實(shí)驗(yàn)時(shí)再稀釋。MTT購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，用PBS配制成濃度為5 mg/mL。兔抗人NF-κB多克隆抗體購(gòu)自武漢博士德公司。SP免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物公司。胰腺癌細(xì)胞系PANC-1購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

胰腺癌PANC-1細(xì)胞在37 ℃，CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含10%新生牛血清的RPMI-1640，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.3 MTT法檢測(cè)各藥物組對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖抑制作用

取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的PANC-1細(xì)胞，以5.0×103/L密度接種于8個(gè)96孔板培養(yǎng)24 h后分別加入藥物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

索拉菲尼濃度分別為1.5、3.0、6.0、12.0 μmol/L，每種濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，另設(shè)空白對(duì)照組(未加藥的培養(yǎng)液)。加藥后分別培養(yǎng)24、36、48、72 h。

PDTC藥物濃度分別為10、25、50、100 μmol/L，每種濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，其中設(shè)空白對(duì)照組(未加藥的培養(yǎng)液)。加藥后分別培養(yǎng)24、36、48、72 h。

干預(yù)藥物工作液分別為3.0 μmol/L索拉菲尼、25 μmol/L PDTC、3.0 μmol/L索拉菲尼+25 μmol/L PDTC，每種濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，另設(shè)空白對(duì)照組(未加藥的培養(yǎng)液)。加藥后培養(yǎng)24 h。

進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)后，每孔加MTT(5 mg/mL) 20 mL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，吸去原培養(yǎng)液，加入DMS0 150 μL/孔，振蕩10 min，用酶標(biāo)儀(波長(zhǎng)490 nm)測(cè)定每個(gè)孔的A值，計(jì)算細(xì)胞抑制率。抑制率(%)=( A對(duì)照組－A實(shí)驗(yàn)組)/ A對(duì)照組×100%。

1.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期

收集不同濃度藥物(3.0 μmol/L索拉菲尼、25.0 μmol/L PDTC、3.0 μmol/L索拉菲尼+25.0 μmol/L PDTC，另設(shè)空白對(duì)照組)處理48 h的細(xì)胞，常規(guī)胰酶消化后，制成單細(xì)胞懸液，離心棄上清液，再經(jīng)預(yù)冷的PBS緩沖液沖洗2次，依次加入20 mg/mL的核糖核酸酶10 μL及1 mg/mL碘化丙碇400 μL染色后流式細(xì)胞儀分析固定的樣品。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 細(xì)胞免疫化學(xué)組化法檢測(cè)NF-κB蛋白表達(dá)

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的胰腺癌PANC-1細(xì)胞接種于含蓋玻片的6孔板內(nèi)，常規(guī)培養(yǎng)24 h后，加入不同藥物濃度(3.0 μmol/L索拉菲尼、25.0 μmol/L PDTC、3.0 μmol/L索拉菲尼+25.0 μmol/L PDTC)后培養(yǎng)，設(shè)空白對(duì)照組(不含藥物的培養(yǎng)液)，常規(guī)培養(yǎng)48 h后，取出玻片，PBS緩沖液沖洗數(shù)次，4 ℃預(yù)冷的丙酮固定15 min備用。P-ERK免疫細(xì)胞化學(xué)染色，操作按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。判斷標(biāo)準(zhǔn)：將不同濃度處理組重復(fù)40次，每1張玻片置于光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)計(jì)測(cè)1 000個(gè)細(xì)胞(獨(dú)立高倍視野)中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，用GATALICA等的半定量分析方法，即對(duì)每1張切片的陽(yáng)性細(xì)胞率及陽(yáng)性細(xì)胞著色強(qiáng)度分別進(jìn)行分級(jí)計(jì)分，然后根據(jù)2向乘積確定其陽(yáng)性強(qiáng)度。將染色強(qiáng)度分為4級(jí)：無(wú)染色為0分，弱染色1分，中等染色2分，強(qiáng)染色3分，陽(yáng)性細(xì)胞百分率：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～75%為2分，＞75%為3分；然后進(jìn)行組織評(píng)分H=I×P，0～1分為-(陰性)，2～3分為+(弱陽(yáng)性)，4～6分為++(陽(yáng)性)，＞6分為+++(強(qiáng)陽(yáng)性)。本研究以++和+++記為陽(yáng)性數(shù)據(jù)，以-和+記為陰性數(shù)據(jù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 藥物處理前后細(xì)胞形態(tài)的變化

光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組的細(xì)胞呈形態(tài)各異，可呈橢圓形及類圓形，核大而圓，核質(zhì)比增大，達(dá)1∶1～2∶1，核內(nèi)核仁1～3個(gè)；藥物處理組的細(xì)胞大小趨于均勻，形態(tài)趨于規(guī)則，核漿比例降低，增殖分裂減慢，部分細(xì)胞可見(jiàn)凋亡與壞死的現(xiàn)象，細(xì)胞數(shù)量和增殖速度明顯低于空白對(duì)照組(圖1、2)。

圖 1 空白對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)Fig.1 Blank control group in cell morphology (×400)

圖 2 藥物處理組細(xì)胞形態(tài)Fig.2 Drug treatment group of cell morphology (×400)

2.2 MTT法檢測(cè)各藥物組對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用

2.2.1 MTT法檢測(cè)索拉菲尼對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖的影響

實(shí)驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，索拉菲尼可以抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖，同時(shí)呈時(shí)間和濃度依賴性，在相同的藥物濃度下，隨著作用時(shí)間(24、36、48、72 h)的延長(zhǎng)，索拉菲尼對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用逐漸增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在相同的干預(yù)時(shí)間，隨著藥物濃度(1.5、3.0、6.0、12.0 μmol/L)的增加，索拉菲尼對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用也逐漸增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。以Probit Analysis計(jì)算48 h細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)為14.102 μmol/L，濃度值較高，說(shuō)明抑制并不理想(表1)。

2.2.2 MTT法檢測(cè)PDTC對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖的影響

實(shí)驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，PDTC可以抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖，同時(shí)呈時(shí)間和濃度依賴性，在相同的藥物濃度下，隨著作用時(shí)間(24、36、48、72 h)的延長(zhǎng)，PDTC對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用逐漸增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在相同的干預(yù)時(shí)間，隨著藥物濃度(10.0、25.0、50.0、100.0 μmol/L)的增加，PDTC對(duì)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用也逐漸增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。以Probit Analysis計(jì)算48 h細(xì)胞的IC50為105.717 μmol/L，濃度值較高，說(shuō)明抑制并不理想(表2)。

表 1 不同濃度索拉菲尼及不同作用時(shí)間對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖抑制率的影響Tab. 1 Effects of different concentrations and action time of sorafenib on PANC-1 cells of pancreatic cancer proliferation

表 2 不同濃度 PDTC 及不同作用時(shí)間對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖抑制率的影響Tab. 2 Effects of different concentrations and action time of PDTC on PANC-1 cells of pancreatic cancer proliferation

2.2.3 聯(lián)合應(yīng)用 PDTC 和索拉菲尼對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖的影響

實(shí)驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，聯(lián)合藥物組(3.0 μmol/L索拉菲尼+25.0 μmol/L PDTC)應(yīng)用48 h后，對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率達(dá)(82.092±1.325)%，明顯優(yōu)于空白對(duì)照組的(6.093±0.307)%、索拉菲尼單藥組(3.0 μmol/L索拉菲尼)的(30.345±0.591)%及PDTC單藥組(25.0 μmol/L PDTC)的(6.093±0.307)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響

實(shí)驗(yàn)和統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，3.0 μmol/L索拉菲尼和25.0 μmol/LPDTC處理48 h后PANC-1細(xì)胞的G0/G1期百分比升高，分別為(50.93±3.51)%和(48.07±1.70)%，而空白對(duì)照組為(37.97±1.21)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；S期細(xì)胞數(shù)百分比減少，分別為(37.30±1.70)%和(38.17±0.51)%，而空白對(duì)照組為(45.33±2.03)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示索拉菲尼及PDTC處理組細(xì)胞發(fā)生G0/G1期停滯。而聯(lián)合藥物組處理48 h后PANC-1細(xì)胞的G0/G1期百分比升高至(74.07±2.40)%，S期細(xì)胞數(shù)減少，百分比降低至(22.23±1.68)%，與空白對(duì)照組及單藥組差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；同時(shí)聯(lián)合藥物組G2/M期減少了(4.70±1.54)%，與空白對(duì)照組的(16.70±1.32)%相比明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示聯(lián)合藥物組對(duì)細(xì)胞周期的抑制作用強(qiáng)于空白對(duì)照組及單藥組(圖3、4)。

圖 3 各藥物組對(duì)PANC-1細(xì)胞周期的影響Fig. 3 Effects of different groups on PANC-1 cells cycles

圖 4 各藥物組PANC-1細(xì)胞周期圖Fig. 4 Diagram of different groups PANC-1 cells cycle

2.4 免疫組化法檢測(cè)各組藥物對(duì)細(xì)胞內(nèi)NF-κB表達(dá)水平的影響

免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，在胰腺癌PANC-1細(xì)胞中，NF-κB主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，染成棕褐色，而細(xì)胞核內(nèi)也可見(jiàn)棕褐色顆粒，陽(yáng)性表達(dá)率為40.0%；經(jīng)25.0 μmol/L PDTC作用48 h后，細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕褐色變淺，陽(yáng)性表達(dá)率下降為10.0%；經(jīng)3.0 μmol/L索拉菲尼作用48 h后，細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕褐色明顯加深，陽(yáng)性表達(dá)率上升為62.5%；若經(jīng)兩藥聯(lián)合作用48 h后，細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕褐色再次變淺，陽(yáng)性表達(dá)率為17.5%，提示NF-κB在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核的表達(dá)較3.0 μmol/L索拉菲尼明顯下降?？瞻讓?duì)照組及藥物處理組間的兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。以上結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)索拉菲尼能激活胰腺癌PANC-1細(xì)胞中NF-κB表達(dá)，而PDTC恰好能抑制此作用(表3，圖5)。

表 3 藥物組作用48 h后的胰腺癌PANC-1細(xì)胞NF-κB的表達(dá)Tab. 3 Expression of NF- κB on PANC-1 cells of pancreatic cancer after different drugs action 48 h

圖 5 各藥物組作用48 h后NF-κB表達(dá)情況Fig. 5 Expression of NF- κ B after different drugs action 48 h

3 討 論

胰腺癌是臨床較常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其總體預(yù)后較差［1-2］。因此，如何更有效地治療胰腺癌成為困擾眾多學(xué)者的問(wèn)題。近年來(lái)，使用多分子靶向藥物治療惡性腫瘤逐漸成為研究的熱點(diǎn)。然而，單一的分子靶向藥物在臨床治療中經(jīng)常效果不佳，主要原因是對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的“信號(hào)通路”軸缺乏足夠的抑制以及可以代償性激活某些通路如NF-κB，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖［6-7］，從而缺乏對(duì)腫瘤的強(qiáng)有效抑制。因此，尋找一些藥物聯(lián)合分子靶向藥物以協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，將成為一個(gè)更有效的策略。

本研究中的分子靶向藥物索拉菲尼屬于多酶抑制劑，一方面可以抑制受體酪氨酸激酶KIT和FLT-3以及Raf/MEK/ERK途徑中絲氨酸/蘇氨酸激酶，明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖；另一方面，通過(guò)上游抑制受體酪氨酸激酶VEGFR和PDGFR及下游抑制Raf/MEK/ERK途徑中絲氨酸/蘇氨酸激酶，明顯抑制腫瘤血管生成［3］。我們的研究結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)，1.5～12.0 μmol/L濃度的索拉菲尼可以對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖具有抑制作用，并呈現(xiàn)的劑量和時(shí)間雙效應(yīng)；這也同索拉菲尼在治療其他腫瘤中具有一定療效相一致［3,8］。PDTC在其他腫瘤中可以發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用［9］，本研究中得以證實(shí)10～100 μmol/L濃度的PDTC對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖具有抑制作用。但無(wú)論是索拉菲尼還是PDTC，其單藥的細(xì)胞的IC50均較高，說(shuō)明單藥抑制腫瘤細(xì)胞增殖并不理想，這在諸多研究中得到證實(shí)，主要原因是代償性激活某些通路如NF-κB［6-7］，所以本研究采用索拉菲尼聯(lián)合PDTC進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。而兩藥聯(lián)合作用48 h后對(duì)胰腺癌PANC-1細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，優(yōu)于索拉菲尼、PDTC單藥組和空白對(duì)照組，進(jìn)一步證實(shí)聯(lián)合用藥更加有效。此外，本研究結(jié)果提示，NF-κB在胰腺癌PANC-1細(xì)胞內(nèi)有表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為40.0%，經(jīng)3.0 μmol/L索拉菲尼、25.0 μmol/L PDTC及兩者聯(lián)合作用48 h后，其陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.5%、10.0%、17.5%，這說(shuō)明索拉菲尼能激活人胰腺癌PANC-1細(xì)胞中NF-κB蛋白表達(dá)的作用，而PDTC恰好能抑制此作用。

綜上所述，索拉菲尼及PDTC均能在體外抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞株的增殖，但需要較高的有效濃度。索拉菲尼在對(duì)胰腺癌細(xì)胞株作用過(guò)程中會(huì)激活NF-κB通路，這可能使胰腺癌細(xì)胞的凋亡減少，從而造成胰腺癌細(xì)胞對(duì)索拉菲尼的敏感性降低。而PDTC能夠減少NF-κB活化，抑制NF-κB的抗凋亡作用，從而增加胰腺癌細(xì)胞對(duì)索拉菲尼的敏感性。

此外，本研究發(fā)現(xiàn)，相同濃度下索拉菲尼和PDTC聯(lián)用能提高索拉菲尼的抑制作用，這表明在胰腺癌治療中，低劑量PDTC抑制NF-κB活性，然后聯(lián)合低濃度的索拉菲尼，不僅能取得良好的抗癌效果，而且也增強(qiáng)了索拉菲尼的殺傷作用，提高化療效果和減輕化療藥物造成的不良反應(yīng)。這對(duì)胰腺癌的臨床治療有一定的理論意義。

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Interactions sorafenib of and pyrrolidine dithiocarbamate in pancreatic cancer cells

LIU Guo-zhong1, SHI Zheng1, GUO Hui-xi2(1.Department of Hepatopancreatobiliary and Laparoscopic Minimally Invasive Surgery, the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou Fujian 350004, China; 2. Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou Fujian 350004, China)

LIU Guo-zhong E-mail: lgzpt2002@163.com

Background and purpose: Sorafenib, a multiple targeted agent, can inhibit proliferation and induce apoptosis of diverse tumor cell in vitro. It has extensive biological activities, but the pancreatic cancer effect of monotherapy is poor. This may be related to nuclear factor-kappa B (NF-κB) pathway activation in cancer. Therefore, it is necessary to combine with Pyrrolidinedithiocarbamate (PDTC, a NF-κB activation inhibitor) to enhance curative effect. To investigate the influences of cell proliferation, cell cycle and expression of NF-κB via their acting on human pancreatic cancer PANC-1, and explore their possible mechanism. Methods: The experiment groups were divided into sorafenib group with different concentrations (1.5, 3.0, 6.0, 12.0 μmol/L), PDTC group with different concentrations (10.0, 25.0, 50.0, 100.0 μmol/L) and combination group with low concentration (3.0 μmol/L sorafenib +25.0 μmol/L PDTC). The proliferative activity of PANC-1 of each group was measured by MTT assay at different time points of 24,36, 48 and 72 h, and the half inhibitory concentration (IC50) was calculated, respectively. Cell cycle in each group was detected by flow cytometry instrument after 48 h. The changes of NF-κB expression level in each group were observed by immunocytochemistry after 24 h. Results: Sorafenib and PDTC can significantly inhibit the proliferation of PANC-1, but IC50value of the single medicine was higher, combination group with low concentration can significantly increase the cell growth inhibition rate (P＜0.05). Three groups can induce the cell stagnation at G0/G1phase (P＜0.05) and cells at S phase were decreased. The effect of combination group with low concentration was better than the single drug group (P＜0.05). The NF-κB expression level in sorafenib group was significantly enhanced, while the level in combination group was significantly decreased (P＜0.05). Conclusion: Sorafenib and PDTC can significantly inhibit the growth of human pancreatic cancer PANC-1 cells in vitro, but the effect of one drug is unsatisfactory. PDTC combined with sorafenib significantly improve the inhibition rate of the proliferation of human pancreatic cancer PANC-1, and induce the cell stagnation at G0/G1phase. This may relate to inhibit the activation of NF-κB by PDTC and enhance the sensitivity of PANC-1 cells to sorafenib.

Sorafenib; Pyrrolidinedithiocarbamate; Cell proliferation; Cell cycle; NF-κB

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.06.005

R735.9

：A

：1007-3639(2013)06-0425-07

2013-03-13

2013-05-27）

《上海醫(yī)學(xué)影像》雜志正式更名為《腫瘤影像學(xué)》

福建省衛(wèi)生廳青年科研課題基金(No：2011-1-21)。

劉國(guó)忠 E-mail:lgzpt2002@163.com

2013年3月20日，《上海醫(yī)學(xué)影像》雜志接到上海市新聞出版局文件（滬新出報(bào)[2013]31號(hào)），正式批準(zhǔn)《上海醫(yī)學(xué)影像》雜志更名為《腫瘤影像學(xué)》。新編國(guó)內(nèi)統(tǒng)一連續(xù)出版物號(hào)為CN31-2087/R。辦刊宗旨為：貫徹理論與實(shí)踐、普及與提高相結(jié)合的方針，反映腫瘤影像學(xué)臨床應(yīng)用和科研工作成果，增進(jìn)國(guó)內(nèi)外腫瘤影像學(xué)學(xué)術(shù)交流，提高我國(guó)腫瘤影像學(xué)診斷技術(shù)和治療水平。更名后的《腫瘤影像學(xué)》雜志將在2013年6月28日正式出刊，并將按上海市新聞出版局及總署的要求，不斷地?cái)U(kuò)大腫瘤影像學(xué)科領(lǐng)域的學(xué)術(shù)交流水平和提高本領(lǐng)域的學(xué)術(shù)影響力，將《腫瘤影像學(xué)》雜志辦得更好、更強(qiáng)！希望大家繼續(xù)支持我們，并踴躍投稿！