崔亞男 管 華 劉春華 付英杰 王慧云

（1濟寧醫(yī)學院藥學院，山東 日照276826；2濟寧醫(yī)學院臨床學院，山東 濟寧272067）

本文作者曾成功制備了復方參芍注射劑［1－2］。但近年來，隨著中藥注射劑的產(chǎn)銷量快速增長，有關中藥注射劑的產(chǎn)品質(zhì)量問題和臨床安全問題的報道也逐漸增多。因此，本文在前期研究的基礎上，進一步對復方參芍進行研究，擬通過微囊化技術，將白芍及人參莖葉皂苷分別包囊，提高儲存穩(wěn)定性，延長和控制膜內(nèi)物質(zhì)的釋放，提高生物利用度。

1 儀器與試劑

白芍飲片（日照市藥材公司）；芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢驗所）；AB－8型大孔吸附樹脂（南開大學化工廠）；Eudragit L100（連云港制藥廠）；HPMC（石家莊優(yōu)甫化工有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純；其它均為分析純；DMBA數(shù)碼顯微鏡（麥克奧迪實業(yè)集團有限公司）；光學顯微鏡（Nikon YS100）；78HW－1型恒溫磁力攪拌器（杭州儀表電機廠）；冷凍干燥機（北京四環(huán)科學儀器廠）；LC－10ATVP高效液相色譜泵（日本島津株式會社）；SPD－10AVP高效液相檢測器（日本島津株式會社）；柱溫箱（大連中匯達科學儀器有限公司）；ZRS－8G智能溶出試驗儀（天津大學無線電廠）。

2 方法與結果

2.1 白芍提取物的制備

將白芍飲片粉碎過20目篩，取100g，加80%乙醇200ml，回流提取2次，每次2h［2］，合并提取濾液，將提取液減壓濃縮至稠膏，于真空干燥箱內(nèi)60℃干燥至恒重，稱取提取物0.02g，加水超聲定容至10ml容量瓶中，用離心機離心20min（4 000 r／min），取上清，定容10ml，抽濾，得上柱液。取該液35ml，用AB－8型大孔吸附樹脂吸附，選擇5倍柱體積的25%乙醇為洗脫劑，洗脫流速為6ml／min。收集洗脫液，于60℃干燥，最終得白芍提取物。以指標成分芍藥苷為代表，其含量占提取物的33%。

2.2 白芍提取物腸溶微囊的制備

本文采用改進的相凝聚法制備微囊［3］。將10g的Eudragit L100溶于100ml丙酮中制成膠液，4.2g白芍提取物中加入少許span－60潤濕后，加入Eudragit L100膠液中，作為油相。將HPMC溶于0.1mol／L的磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）中制成1%HPMC溶液作為水相。將15ml的1%HPMC溶液逐漸滴加到10ml的油相中，于750rpm攪拌10min后，并逐漸升溫至45℃，溶液出現(xiàn)渾濁，繼續(xù)攪拌5min。然后加入同溫度下50ml蒸餾水，繼續(xù)攪拌10min，迅速將混懸液于2500rpm離心10min，然后冷凍干燥，即得微囊。通過此工藝所制得的微囊外觀圓整，平均粒徑為（460±120）μm，微囊的光學顯微鏡照片如圖1。

2.3 微囊中白芍提取物含量的測定

2.3.1 最大吸收波長的選擇 分別稱取芍藥苷對照品和按處方投藥比制備的空白微囊，用pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液與無水乙醇液（1∶1）溶解，配成濃度約為10μg／ml的2份試液，在190～310nm波長范圍內(nèi)進行掃描。掃描圖見圖2。由圖可知，芍藥苷于230nm處有最大吸收，輔料在此波長范圍內(nèi)對檢測無影響，所以選擇波長λ＝230nm處測定芍藥苷。

圖2 檢測波長的確定

2.3.2 色譜條件 色譜柱：ODS C18柱（250×4.6mm，5μm迪馬公司）；流動相：乙腈－水－甲醇（60∶25∶15）；檢測波長：230nm；流速：1.0ml／min；柱溫：30℃；進樣量：20μl。

2.3.3 標準曲線的繪制 精密稱取芍藥苷對照品4.2mg，置于100ml量瓶中，用pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液與無水乙醇液（1∶1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。分別精密吸取貯備液2.0、4.0、6.0、8.0和10.0ml于10ml量瓶中，用pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液與無水乙醇液（1∶1）稀釋至刻度，搖勻，作為標準供試液。精密取各供試液20μl，進樣，按上述色譜條件測定，重復操作3次，測定結果見表1。以峰面積（A）對濃度（C）進行線性回歸，得標 準 曲 線 方 程A＝121619C－102160，R2＝0.9992，標準曲線見圖3。芍藥苷在8.4～42.0 μg／ml范圍內(nèi)，線性關系良好（r＝0.9996）。

圖3 芍藥苷含量測定標準曲線

表1 芍藥苷濃度的測定

2.3.4 儀器精密度考察 取中間濃度的標準供試液，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，計算RSD為1.42%；連續(xù)6d求得日間含量的RSD為1.83%。

2.3.5 溶液穩(wěn)定性考察 取中間濃度的標準供試液，分別于0、4、8、12、24h進樣，測定芍藥苷的峰面積。結果表明，24h內(nèi)峰面積的RSD為1.67%，說明樣品穩(wěn)定性良好。

2.3.6 加樣回收率 稱取空白微囊適量，用pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液與無水乙醇液（1∶1）溶解制備空白樣品溶液。精密量取芍藥苷標準貯備液（52μg／ml）2.0、4.0、8.0ml各3份于10ml容量瓶中，用空白樣品溶液定容10ml，進樣，測定其峰面積，根據(jù)標準曲線計算濃度，求得平均加樣回收率為100.24%，相對標準偏差為1.64%。結果見表2。

表2 芍藥苷回收率的測定（n＝3）

2.3.7 載藥量、包封率的確定 精密稱取制得的微囊10mg于100ml容量瓶中，加入50ml pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液與無水乙醇液（1∶1）振搖溶解，然后定容100ml。進樣，測定峰面積，根據(jù)標準曲線計算濃度，依據(jù)下式計算微囊載藥量與包封率：

載藥量＝微囊中所含芍藥苷的量／（0.33×微囊的總量）×100%

包封率＝微囊中所含芍藥苷的量／（0.33×白芍提取物投藥量）×100%

2.4 釋放度的測定

精密稱取制得的微囊100mg，3份，按《中國藥典》2010版二部釋放度測定方法［4］，首先將微囊投放至0.1mol／L的鹽酸溶液500ml中，在（37±0.5）℃，100rpm條件下，分別于10、20、40、60、90、120 min取樣5ml（同時補充同體積同溫新鮮溶出介質(zhì)），用0.22μm微孔濾膜過濾，依法測定其峰面積，計算樣品濃度，并計算累積釋放百分率。2h后，于上述酸溶液中加入的0.2mol／L的磷酸鹽緩沖液250ml，同時以2mol／L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8，在（37±0.5）℃，100rpm條件下，同時開始計時，分別于30、45、60、90、120min后取樣5ml，用0.22μm微孔濾膜過濾，依法測定其峰面積，計算樣品濃度，并計算累積釋放百分率。結果見圖4。

圖4 白芍提取物腸溶微囊在人工胃液、腸液中釋放結果

3 結果與討論

經(jīng)過本法提取純化的白芍提取物，水溶性差，在50%以上的乙醇溶液中溶解良好，亦可溶于丙酮中，因此本文選擇將白芍提取物加入到EudragitL100的丙酮溶液中作為油相。同時在測定載藥量和包封率時，選用pH6.8的磷酸鹽緩沖溶液與無水乙醇液按1∶1的比例作為微囊的良溶劑。

在篩選微囊的最佳處方工藝時，通常以載藥量和包封率為指標。本文所制備的微囊載藥量為92.3%，而包封率僅為43.04%，主要考慮的是為防止劑量過大，為今后制備口腔崩解片打下基礎。

［1］ 崔亞男，王東凱，邱志斌.2種溶血性試驗方法在復方參芍注射劑研究中的應用［J］.中國藥房，2007，18（3）：182－183.

［2］ 崔亞男，王東凱，邱志斌，等.復方參芍注射劑制備工藝的研究［J］.中成藥，2007，29（3）：447－450.

［3］ Dong W，Bodmeier R.Encapsulation of lipophilic drugs within enteric microparticles by a novel coacervation method［J］.Int J Pharm，2006，326：128－138.

［4］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.