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（1 廣州醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510000；2 暨南大學附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 510000）

門脈癌栓兔模型的超聲及CT影像表現(xiàn)

周明強1劉長珠2劉斯?jié)?羅超元2王俊芳2寧映霞1

（1 廣州醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510000；2 暨南大學附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 510000）

目的分析兔門脈VX2細胞株腫瘤模型的影像學表現(xiàn)，探討超聲及CT檢查在監(jiān)測門靜脈癌栓中的價值。方法VX2腫瘤細胞株接種于兔大腿形成穩(wěn)定的種植瘤，將瘤塊接種于20只新西蘭大白兔肝臟門靜脈內，采用剖腹門脈穿刺及門脈切開兩種方法建立門靜脈癌栓模型，用超聲及CT觀察腫瘤的形成情況。結果超聲顯示腫瘤成活率90%（18/20），瘤株接種后12～15d可探及門脈癌栓，接種21～23d可顯示瘤體血流情況。CT平掃瘤體呈低密度或等密度灶，增強掃描動脈期呈不均勻強化。結論超聲可及時顯示門脈癌栓形成情況，CT掃描能準確判斷癌栓形成情況，綜合影像學檢測手段能夠及時準確評價門脈癌栓動物模型的瘤灶生長情況，可為進一步的門脈癌栓治療試驗研究提供有用信息。

門靜脈癌栓；兔模型；超聲；CT

近幾十年來肝癌的發(fā)病人數(shù)呈明顯增加趨勢，全世界每年約100萬新發(fā)肝癌患者，但只有不到30%新發(fā)肝癌患者可行手術切除[1]，約16%～59%患者確診肝癌時已伴門脈癌栓（portal vein tumor thrombus，PVTT）[2]，顯微鏡檢門脈微小癌栓更是高達90.2%[3]，這是肝癌切除及肝移植術后復發(fā)的主要原因，也是影響肝癌預后的主要因素[4]。目前PVTT臨床上尚無有效的治療方法，建立的理想的PVTT動物模型可為早期診斷、探索治療方法以及療效觀察提供實驗學基礎。本文在摸索不同方法建立兔PVTT實驗模型的基礎上，進一步探討兔PVTT實驗模型彩超及CT檢查的影像特點以及評價各自影像學監(jiān)測價值。

1 資料與方法

1.1 模型的建立

①實驗動物：純種新西蘭大白兔21只（廣東省醫(yī)學實驗動物中心購得），雌雄不限，體質量2.5～3.2kg，3～4個月大小。②腫瘤細胞株：本實驗采用VX2鱗狀細胞癌，荷瘤兔由華西醫(yī)科大學提供。③瘤株的傳代：將從荷瘤兔上取下的VX2瘤塊用眼科剪剪碎成瘤粒懸液，用注射器取1mL懸液注射于一只兔大腿內側做好傳代。④接種用瘤塊的制備：將接種兔飼養(yǎng)2周左右采用速眠新肌內注射（0.2mL/kg）麻醉，無菌操作下剪取腫瘤中層魚肉樣組織，用眼科剪切成0.5mm3的瘤粒及1～2 mm3稍大瘤塊，將組織置于生理鹽水（50mL含慶大霉素2萬U）中備用。⑤兔門脈接種：20只新西蘭大白兔術前12h禁食不禁水，稱重，選用氯胺酮為動物麻醉劑，按1mL/kg劑量計算，等量生理鹽水稀釋后，以總量的1/2從兔耳緣靜脈推注，觀察兔的反應及呼吸情況，余下部分可分次肌內注射或側腹部做皮丘，控制好麻醉的深度和時間。將兔仰臥在手術臺上固定，采取兩種方法門脈接種，第一種方法門脈注射接種法：在上腹部備皮、消毒，在上腹正中劍突下作一長約3cm左右的切口打開腹腔暴露肝，找到門靜脈主干將備好的腫瘤液注入門靜脈。拔針后即用消毒干紗布按壓穿刺處待血止住，逐層縫合關閉腹腔。第二種方法門脈切開接種法，由外科醫(yī)師操作，將門脈主干兩端用血管夾夾住，阻斷門脈血流后，用注射器抽盡阻斷部分血液，往內注射等量鹽水，術野干凈后切開門脈，迅速將2～3粒稍大的瘤塊放入門脈內，用羊腸線縫合血管，松開血管夾，逐層縫合關閉腹腔。術后肌注青霉素20萬U/d，連續(xù)3d。

1.2 超聲觀察方法

本次研究采用GE Logic-9彩超檢查儀，探頭頻率6～9MHz，每天監(jiān)測兔肝臟、門靜脈內有無異?；芈晥F及其數(shù)目、大小，同時觀察腫瘤血供情況及肝外轉移灶以及腹水情況。

1.3 CT觀察方法

采用GE Highspeed FX/i螺旋CT機，對比劑為3mL歐乃派克+2mL生理鹽水，0.3mL/s，在超聲檢查到門脈低回聲團后行CT掃描，如若未掃到確定的癌栓，一周后行第2次CT掃描，觀察VX2瘤細胞在兔門靜脈內的生長情況，以、可能的肝內轉移情況及腹水情況。

1.4 病理性檢查

接種5周后處死實驗兔，取兔門脈癌栓標本進行病理檢查。

2 結 果

2.1 兩種方法接種的成功率

門脈注射接種法：接種10只，成功9只，一只實驗兔未出現(xiàn)門脈癌栓，成功率90%，癌栓出現(xiàn)時間18天左右。

門脈切開接種法：接種10只，成功9只，一只實驗兔手術后第二天即出現(xiàn)腹水死亡，成功率90%，癌栓出現(xiàn)時間12d左右。

2.2 影像表現(xiàn)

超聲表現(xiàn)：第一種方法瘤株接種18d左右，彩超在9只兔門靜脈內可探查到低回聲團塊，瘤株局限于門靜脈管腔分支內，數(shù)目1～2個，直徑2～3mm，CDFI顯示為門靜脈管腔內血流充盈缺損。接種21～23d，團塊數(shù)量增加到3～4個，直徑增大為5～7mm，CDFI顯示為門靜脈增寬，管腔內充盈缺損、血流消失、血流束變細（如圖1、圖2）。接種4周后，門脈內腫瘤組織增大，直徑為6～10mm，團塊多為充滿型，門靜脈近端及主干內有明顯癌栓形成，肝內可見轉移灶，未見肝外轉移，腹腔可探及游離液性暗區(qū)。第二種方法瘤株接種12d左右，彩超在9只兔門靜脈主干內可探查到低回聲團塊，直徑3～5mm，CDFI顯示為門靜脈管腔內血流充盈缺損。接種21～23d，團塊直徑增大為7～11mm，CDFI顯示為門靜脈增寬，管腔內充盈缺損、血流消失、血流束變細，門脈團塊可顯示動脈血流信息。接種4周后，門脈內腫瘤組織增大，直徑為8～15mm，團塊多為充滿型，肝內可見轉移灶，未見肝外轉移，腹腔可探及游離液性暗區(qū)。

CT表現(xiàn)：超聲檢查發(fā)現(xiàn)門脈團塊后行CT平掃，門脈內可見結節(jié)樣低密度灶或等密度灶，直徑3～16mm，動態(tài)增強掃描顯示門脈期瘤灶呈低密度灶，動脈期瘤灶不均勻強化。

2.3 病理

鏡下：癌細胞核大異型，核仁大，分裂相多（如圖3）。

圖1 超聲顯示門脈內低回聲團

圖2 彩超顯示 門脈內血流充盈缺損

圖3 兔門脈癌栓（HE染色×40）

3 討 論

3.1 門脈癌栓動物模型的選擇及兔模型的建立

移植性肝癌動物模型的制作多采用開腹后直接將VX2腫瘤塊或VX2懸浮液移植于實驗動物的肝實質內[5]。而要形成轉移性門靜脈癌栓其成瘤率很低，即使發(fā)生門靜脈癌栓，由于肝內外多發(fā)轉移，動物存活率低，不利于開展針對癌栓治療的進一步研究。本實驗選擇門脈內直接種植，由于有門脈壁的阻擋，在成癌栓之前肝內轉移機率小，其癌栓形成穩(wěn)定可靠，伴隨病理生理表現(xiàn)與人門脈癌栓相似，可作為肝腫瘤影像診斷、抗癌藥物藥代學、腫瘤治療學的研究模型[6]。

作者在本實驗中采用了門脈注射法及門脈切開法兩種接種方法，其成功率均為90%，兩者沒顯著差異性。但門脈注射法癌栓多形成于小的門脈分支內，主干內形成少，且形成時間較晚，分析原因可能是由于小的瘤粒門脈注射時，瘤粒在主干停留少，易停留在下一級分支或分叉附近，所以主干內形成少，主干內癌栓主要靠逆行擴散才能形成，周期也要長，故形成時間較晚。第二種方法采用門脈切開直接將稍大瘤塊放置于門脈主干內，瘤塊位于主干原位生長，瘤塊較大，不易被門脈內血流帶走到遠處，生長速度較快，位置固定，故易在主干內形成癌栓。有關門脈內癌栓接種方法有多種，國內萬智勇曾報道可采用B超引導下經皮門靜脈穿刺種植法制備兔門靜脈癌栓模型[7]，作者采用彩超引導經皮門靜脈穿刺實踐了兩例，未能取得滿意效果，本人認為B超引導不如彩超好，且成功率不易控制，可能與兔門脈太細（正常兔門脈主干內徑約3mm）、所用穿刺針及術者的穿刺技術水平有關。采用剖腹門脈雖然創(chuàng)傷要大，但是受影響因素少，易于掌握，只要術后控制好并發(fā)癥即可取得滿意的成功率。

3.2 門脈癌栓兔模型的超聲和CT影像學觀察

在處死模型兔做病理檢查前，影像學檢查是發(fā)現(xiàn)癌栓的唯一且有效的方法，在隨后的癌栓治療試驗中，影像學檢查也擔任著療效評估的角色。

超聲，彩超可以顯示門脈血流信息。本試驗中由于兔門脈內癌栓為實性組織，聲阻抗與兔肝組織相似，故超聲表現(xiàn)為門脈無回聲管腔內的低回聲團塊，彩超下由于癌栓的占位效應，相應部位門脈管腔狹小，對血流形成阻擋，故表現(xiàn)為血流的充盈缺損，血流束變細。由于試驗兔種植后門脈出現(xiàn)癌栓的時間長短不一，生長的快慢也不一，需要反復觀察監(jiān)測，而超聲具有實時、便利、快捷，且檢查時兔無須做麻醉的優(yōu)點，正好可用來反復觀察，是監(jiān)測試驗癌栓模型兔的首選檢查手段。

CT可在門脈橫斷面上顯示出癌栓為低密度灶，增強掃描由于癌栓由動脈供血，故顯示為動脈期強化，憑此刻準確判斷門脈內癌栓的有無，對癌栓具有確診的作用，另外CT分辨力較超聲高，可以顯示超聲不能發(fā)現(xiàn)的較小的門脈癌栓，CT檢查的缺點是但檢查前須對兔實行麻醉，不易重復檢查。

總之，兔門脈癌栓模型穩(wěn)定、種植成活率高、與人肝癌合并門脈癌栓相似，超聲及CT檢查能夠及時準確評價門脈癌栓模型的瘤灶生長情況，可為進一步的門脈癌栓治療試驗研究提供有用信息。

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1671-8194（2013）16-0110-03

廣東省衛(wèi)生廳基金（編號：2008359）