銀杏達(dá)莫聯(lián)合脂必泰膠囊對(duì)小鼠心肌缺血模型的保護(hù)性研究

李 健

(山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，濟(jì)南 250011)

缺血性心臟病屬中醫(yī)學(xué)“胸痹”范疇，是目前引發(fā)突然死亡的主要原因之一，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。近年來(lái)，中藥在心肌缺血保護(hù)方面顯示出良好的前景。銀杏達(dá)莫是銀杏葉提取物，能有效地?cái)U(kuò)張腦血管、抑制血小板聚集、增加腦血流量、促進(jìn)腦血液循環(huán)，抗氧化、清除自由基、緩解缺血、缺氧和舒張血管平滑肌等藥理作用［1］。今年藥理研究發(fā)現(xiàn)［2］，其能升高大鼠超氧化物歧化酶、降低丙二醛含量。近年研究發(fā)現(xiàn)［3］，脂必泰能有效地調(diào)脂，還能改善血管內(nèi)皮功能，但目前未見(jiàn)關(guān)于銀杏達(dá)莫在心肌缺血保護(hù)作用的詳細(xì)研究。本研究擬在異丙腎上腺素誘發(fā)的小鼠心肌缺血模型上，探討銀杏達(dá)莫聯(lián)合脂必泰對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用及作用特點(diǎn)，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

鹽酸異丙腎上腺(ISO)(上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)6E2011);銀杏達(dá)莫注射液(山西普德藥業(yè)有限公司，批號(hào)20110120);脂必泰(成都地奧九泓制藥廠，批號(hào)101126);生理鹽水(四川科倫藥業(yè)股份有限公司)。磷酸肌酸激酶(CK)試劑盒、乳酸脫氫酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)試劑盒均購(gòu)于北京中生生物工程公司;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器

ECG-651型心電圖儀(上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司)、721分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)、CLSM共聚焦激光掃描顯微鏡(德國(guó)Zeiss公司)。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量18!23g，平均體質(zhì)量20.8±2.4g，購(gòu)于山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(許可證號(hào)SCXK(魯)20070004)。

1.4 模型建立及分組

入組小鼠均在實(shí)驗(yàn)前記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖，剔除ECG異常者，并將其隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、銀杏達(dá)莫組以及聯(lián)合組。對(duì)照組和模型組小鼠給予10mg·kg－1NS，銀杏達(dá)莫組給予1ml/d腹腔注射，聯(lián)合組在銀杏達(dá)莫組基礎(chǔ)上給予4.8mg·kg－1。5min給予20mg·kg－1鹽酸異丙腎上素，連續(xù)2d皮下注射ISO。第2天注射3%戊巴比妥鈉ip麻醉后，仰臥位固定，記錄ISO注射前及注射15min后記錄1次Ⅱ?qū)?lián)測(cè)定ST段J點(diǎn)上移值。2h后去眼球采血備用。將血樣3000r/min離心15min后取血清，血清CK、LHD含量按照比色法測(cè)定，血清SOD活性采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，血清MDA含量按照硫代巴比妥酸法測(cè)定，以上測(cè)定均按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。取血后立即處死小鼠取出心臟，剪去心室置于4%多聚甲醛中進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS17.0分析所得數(shù)據(jù)，一般資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用單因素方差分析進(jìn)行組間比較，各組間樣本采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)異丙腎上素誘發(fā)小鼠心肌缺血的影響

2.1.1 對(duì)心肌缺血小鼠心電圖ST段影響 表1顯示，與對(duì)照組相比，異丙腎上素皮下注射后，模型小鼠的心電圖ST段明顯抬高(P＜0.01)。銀杏達(dá)莫組及聯(lián)合組能明顯抑制異丙腎上素誘導(dǎo)的小鼠心電圖ST段的抬高(與模型組相比均P＜0.01)，且2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1各組小鼠心肌缺血ECG、血清CK、LDH、MDA、SOD及NOS的影響(±s)

表1各組小鼠心肌缺血ECG、血清CK、LDH、MDA、SOD及NOS的影響(±s)

注:與對(duì)照組比較:1)P＜0.001，2)P ＜0.01;與模型組比較:3)P ＜0.001，4)P ＜0.01，5)P ＜0.05

組 別 例數(shù) ST段抬高(mV) CK(U"L－1) LDH(U"L－1) MDA(μmol"L－1) SOD(U"mL－1) NOS(KU"g－1)對(duì) 照 10 0.04±0.01 234.56±101.18 361.34±131.35 5.83±1.38 323.95±20.36 0.87±0.09模 型 10 0.74±0.381) 572.49±113.241)623.19±127.121) 11.42±1.731) 226.91±19.271) 0.59±0.072)銀杏達(dá)莫 10 0.51±0.233) 375.31±108.133)519.28±121.474) 7.13±1.343) 334.27±23.284) 1.10±0.134)聯(lián) 合 10 0.38±0.164) 338.58±102.544)462.71±113.945) 6.06±1.255) 397.16±30.213) 1.65±0.113)

2.1.2 對(duì)心肌缺血小鼠血清LDH、CK、SOD、MDA及NOS的影響 表1顯示，與對(duì)照組相比，模型組血清LDH、CK及MDA均明顯升高(P＜0.01)，而血清SOD和NOS明顯降低(P＜0.01)。與模型組相比，銀杏達(dá)莫組及聯(lián)合組均可提高心肌缺血小鼠血清SOD活性及NOS活性，降低MDA含量，抑制血清LDH和CK的增加(P＜0.01)。

2.2 對(duì)異丙腎上素誘發(fā)心肌缺血小鼠心肌損傷程度的影響

圖1顯示，對(duì)照組小鼠心肌組織未見(jiàn)病理形態(tài)改變。模型組小鼠缺血心肌呈萎縮、斷裂狀，部分心肌纖維胞漿呈凝固性壞死，部分呈溶解性壞死，心肌間炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。與模型組相比，銀杏達(dá)莫組及聯(lián)合組小鼠心肌組織病理?yè)p傷程度均有所減輕，且聯(lián)合組小鼠心肌組織病理改變情況明顯優(yōu)于銀杏達(dá)莫組，僅見(jiàn)少量心肌纖維萎縮和少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

3 討論

心血管疾病是臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病，隨著社會(huì)人口的老年化，其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。心肌缺血為心血管常見(jiàn)疾病，長(zhǎng)期心肌缺血會(huì)導(dǎo)致心肌梗死以及心細(xì)胞壞死。異丙腎上腺素皮下注射可加快心率，使心肌收縮力增強(qiáng)，增加心肌耗氧量，造成心肌細(xì)胞缺血，是一種常用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性心肌缺血模型［4］。心電圖變化是心肌缺血模型成功與否的最直觀的指標(biāo)［5］。本研究結(jié)果顯示，在異丙腎上腺素皮下注射后，模型組小鼠心電圖ST段明顯抬高，給予銀杏達(dá)莫和銀杏達(dá)莫聯(lián)合脂必泰能明顯抑制小鼠心電圖ST段的抬高，且銀杏達(dá)莫組與聯(lián)合組明顯比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示銀杏達(dá)莫對(duì)小鼠心肌缺血損傷具有一定保護(hù)作用，脂必泰能提高銀杏達(dá)莫的心肌缺血保護(hù)作用。

圖1 各組用藥對(duì)異丙腎腺上素誘發(fā)心肌缺血小鼠心肌損傷程度情況比較

LDH、CK是心肌缺血時(shí)心肌細(xì)胞受損程度的重要標(biāo)志［6］。氧自由基形成過(guò)多可導(dǎo)致膜脂質(zhì)過(guò)氧化加強(qiáng)，改變膜通透性及流動(dòng)性，使心肌細(xì)胞的功能、結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，是心肌缺血發(fā)生的主要機(jī)制之一［7］。MDA含量可間接反映細(xì)胞受自由基損傷的程度。SOD活性高低可間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力［8］，NOS是一種分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等含鐵的單氧化酶［9］。本研究結(jié)果顯示，在異丙腎上素皮下注射后，模型組小鼠血清LDH、CK及MDA均明顯升高，而血清SOD和NOS明顯降低(P＜0.01)。銀杏達(dá)莫組及聯(lián)合組均可提高心肌缺血小鼠血清SOD活性及NOS活性，降低MDA含量，抑制血清LDH和CK的增加(P＜0.01)，進(jìn)一步提示銀杏達(dá)莫聯(lián)合脂必泰抗心肌缺血作用。

通過(guò)EN染色可顯示，心肌組織的病理變化可微觀地觀察心肌損傷程度［10］。本研究結(jié)果顯示，與模型組相比，銀杏達(dá)莫組及聯(lián)合組小鼠心肌組織病理?yè)p傷程度均有所減輕。聯(lián)合組僅見(jiàn)少量心肌纖維萎縮和少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，其小鼠心肌組織病理改變較銀杏達(dá)莫組明顯減輕，提示銀杏達(dá)莫聯(lián)合脂必泰可明顯減輕心肌組織病理?yè)p傷程度，其原因可能與脂必泰改變血管內(nèi)皮功能有關(guān)。

綜上所述，銀杏達(dá)莫聯(lián)合脂必泰對(duì)小鼠心肌損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與增加NOS、SOD活性，抑制MDA含量和血清LDH、CK活性增加有關(guān)。

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