張鳳有 王麗娟

（內(nèi)蒙古錫盟藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000）

蒙成藥寒水石-21是由寒水石（涼制）、石榴、益智、蓽茇、土木香、芫荽果、香青蘭、藍(lán)盆花、酸梨干、沙棘、梔子、瞿麥、柯子、連翹、麥冬、木香、牛黃、地丁、降香、五靈脂、木鱉子（制）組成，疏肝和胃，制酸消脹。用于肝胃氣滯、痞悶不舒、噎膈反胃、惡心吐酸、消化不良等癥[1]。為有效控制其成品質(zhì)量，本文建立起對(duì)處方中蓽茇中成份胡椒堿作為定量分析的指標(biāo)成份[2]。高效液相色譜法具有靈敏、準(zhǔn)確、分離度好等優(yōu)點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)表明該方法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可作為寒水石-21中的胡椒堿的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:島津LC-2010A HT型高效液相色譜儀，BP121-S型電子天平（d=0.1mg），BP211-D型電子天平(d=0.01mg)，AS20500A型超聲振蕩器,島津 UV-1700型紫外分光光度計(jì)。

1.2 試劑與試藥:胡椒堿對(duì)照品 (批號(hào):0775-200203)中國(guó)藥品生物制品檢定所;甲醇為色譜純;水為高純水;其它試劑均為分析純。

2 色譜條件

色譜柱:色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠,本實(shí)驗(yàn)研究采用kromasiL-C18柱（250×4.6mm，5μm），柱號(hào)；流動(dòng)相:甲醇 -水(68:32)為流動(dòng)相 ；流速:1mL.min-1；柱溫:40℃,檢測(cè)波長(zhǎng)：343nm，進(jìn)樣量均為μL。

3 方法和結(jié)果

3.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取胡椒堿對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1mL含20μg的溶液,即得。

3.2 供試品溶液的制備：取本品20粒，精密稱定，研細(xì)，精密稱取本品細(xì)粉約1.8g,置50mL棕色量瓶中,加入無(wú)水乙醇mL,超聲處理(功率W,頻率KHz)30min,放冷,加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻,濾過(guò),精密量取續(xù)濾液10mL，置mL棕色量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，即得。

3.3 測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。。

3.4 專屬性考察：陰性對(duì)照試驗(yàn):按對(duì)照品、供試品制備方法制備供試品溶液和對(duì)照品溶液,另取按處方比例并以相同工藝制備的缺蓽茇的陰性對(duì)照,按供試品溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液,分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各10μL,分別注入液相色譜儀,測(cè)得結(jié)果為陰性對(duì)照色譜圖中,在與胡椒堿對(duì)照品以及供試品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)。表明處方中其它組份對(duì)胡椒堿測(cè)定無(wú)干擾。色譜圖見圖1、2、3。

圖1 對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對(duì)照品色譜圖

3.5 線性關(guān)系考察：精密稱取胡椒堿對(duì)照品11.42mg,置100mL量瓶中,加無(wú)水乙醇使溶解并稀釋至刻度,搖勻。精密量取上述對(duì)照品溶液各.5、1.0、2.0、2.5、3.0、5.0 mL分別置10mL量瓶中,用無(wú)水乙醇稀釋至刻度,搖勻,各取μL進(jìn)樣,按上述色譜條件測(cè)定,以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析,結(jié)果胡椒堿在0.0571～0.5710μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y=55692x-2042，r=0.9993。

3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取同一份供試品溶液,分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h、進(jìn)樣測(cè)定峰面積,結(jié)果 RSD=0.55%，表明胡椒堿在24h內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。

3.7 精密度試驗(yàn):取同一批號(hào)(批號(hào)120616022)供試品6份,各精密稱取約1.80g,分別按含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作制得供試品溶液；另精密稱取胡椒堿對(duì)照品11.42mg依法制成每1mL含胡椒堿22.84μg的溶液作為對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述溶液各10μL注入色譜儀測(cè)定每份供試品含量,結(jié)果平均含量=0.3285mg/丸，RSD=1.6%。

3.8 加樣回收試驗(yàn):取同一批供試品（批號(hào)120616022）9份,各約0.90g,精密稱定,按對(duì)照品、供試品制備方法操作,其中3份分別精密加入胡椒堿對(duì)照品溶液(0.6852mg·mL-1)1.0mL,另3份分別精密加入上述胡椒堿對(duì)照品溶液2.0mL,其余3份分別精密加入上述胡椒堿對(duì)照品溶液3.0mL,分別按含量測(cè)定法項(xiàng)下方法操作,測(cè)定每份含量,計(jì)算回收率,結(jié)果見表1。3.9 樣品測(cè)定：取樣品批(批號(hào),120526003,120802020)按對(duì)照品、供試品制備方法及測(cè)定法項(xiàng)下的方法處理并測(cè)定,3批樣品的測(cè)定結(jié)果見表2。

表1 胡椒堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品中兒茶素含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

4.1 本實(shí)驗(yàn)考察了不同比例的甲醇-水溶液做流動(dòng)相，最終確定在甲醇-水（68:32）做流動(dòng)相時(shí)，樣品色譜圖譜中，胡椒堿主峰于前面峰的分離度達(dá)3.0以上，于后一峰的分離度達(dá)2.0以上，均達(dá)到有效分離，且理論板數(shù)較高。

4.2 在樣品制備考察時(shí),對(duì)溶媒,提取時(shí)間等均進(jìn)行了比較實(shí)驗(yàn),最終確定以無(wú)水乙醇為提取溶媒,超聲處理30min效果較好。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)[S],1998,191.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.219.