吳海波 張亞文

交叉配血實(shí)驗(yàn)是輸血前必檢項(xiàng)目，檢查患者與輸入的血液是否相合，交叉配血方法必須能同時(shí)檢出不完全抗體(IgG)和完全抗體(IgM)以免發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)。在我國(guó)主要的配血方法有聚凝胺法、抗人球蛋白法，抗人球蛋白法準(zhǔn)確、可靠，但操作繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，雖然是金標(biāo)準(zhǔn)但不能常規(guī)應(yīng)用于臨床，近年來(lái)微柱凝膠法在國(guó)內(nèi)外輸血界已逐漸做為常規(guī)應(yīng)用［1，2］，聚凝胺法和微柱凝膠法各有優(yōu)缺點(diǎn)，二者在實(shí)際應(yīng)用中靈活地聯(lián)合應(yīng)用會(huì)有效地防止交叉配血出現(xiàn)假陰性、假陽(yáng)性結(jié)果。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集2011～2012年住院輸血患者標(biāo)本400例。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 微柱凝膠交叉配血卡(Liss/Coombs卡，IgG+C3)及低離子溶液、專用離心機(jī)和孵育器均由瑞士達(dá)亞美公司提供。

1.2.2 離心機(jī)由臺(tái)灣貝索公司提供，聚凝胺試劑由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供。

1.2.3 篩查紅細(xì)胞由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供

1.3 方法 經(jīng)室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)測(cè)所有檢測(cè)系統(tǒng)均在控后，嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書操作規(guī)程進(jìn)行操作，每例臨床標(biāo)本分別用微柱凝膠法和聚凝胺法做交叉配血實(shí)驗(yàn)，同時(shí)對(duì)每份患者標(biāo)本做抗體篩查實(shí)驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

400例標(biāo)本中篩查出42例交叉配血不合標(biāo)本，經(jīng)鑒定8例為真陽(yáng)性，8例真陽(yáng)性標(biāo)本中聚凝胺法陽(yáng)性例數(shù)為7例，微柱凝膠法陽(yáng)性例數(shù)為8例;34例假陽(yáng)性標(biāo)本中，聚凝胺法假陽(yáng)性例數(shù)為27例，假陽(yáng)性率64.29%，微柱凝膠法假陽(yáng)性例數(shù)為33例，假陽(yáng)性率78.57%，兩種方法假陽(yáng)性率經(jīng)χ2檢驗(yàn)P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 42份交叉配血不合標(biāo)本假陽(yáng)性結(jié)果分析(例，%)

3 討論

聚凝胺(polybrene)是一種高價(jià)陽(yáng)離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞之間距離減少，能引起正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝聚。如果是抗體致敏的紅細(xì)胞則被聚凝胺凝集。凝聚和凝集在外表上是不能區(qū)分的，如再加入含枸椽酸鈉的假凝集清除液，椽枸酸根負(fù)電荷與聚凝胺上的正電荷中和，重懸后凝聚消失，而特異性抗原抗體結(jié)合的凝集則不消失。我國(guó)適合應(yīng)用聚凝胺法，原因是聚凝胺雖對(duì)Kell系統(tǒng)不敏感，但對(duì)Rh系統(tǒng)特別敏感，我國(guó)以Rh系統(tǒng)引起的遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)最為常見，中國(guó)人幾乎100%為K抗原陰性，因此通常不會(huì)免疫產(chǎn)生抗K［4］。微柱凝膠法是基于生物化學(xué)凝膠過(guò)濾技術(shù)和離心技術(shù)及免疫化學(xué)抗原抗體特異反應(yīng)原理而設(shè)計(jì)的。紅細(xì)胞血型抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合后形成凝集，離心時(shí)凝集塊不能通過(guò)凝膠間隙而留在凝膠上層(根據(jù)凝集強(qiáng)弱亦可彌散于凝膠中)，未結(jié)合的紅細(xì)胞，則通過(guò)凝膠間隙沉在管尖底部，呈陰性反應(yīng)。

有文獻(xiàn)報(bào)道微柱凝膠法靈敏度高于聚凝胺法［5］，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道相符。就交叉配血實(shí)驗(yàn)而言靈敏度的要求很高，微柱凝膠法是首選的實(shí)驗(yàn)，有條件的醫(yī)院要開展，但不能取代聚凝胺法。由表1可以看出兩種方法假陽(yáng)性檢出率沒(méi)有顯著性差別，從檢驗(yàn)技術(shù)上來(lái)講聚凝胺法排除假凝集要比微柱凝膠法更快捷，如未完全除去纖維蛋白原的血清標(biāo)本，在凝膠中形成的纖維蛋白，阻礙紅細(xì)胞沉降而浮于膠中或表面，微柱凝膠法看到的只是凝集現(xiàn)象，必須通過(guò)重新離心血標(biāo)本重復(fù)做實(shí)驗(yàn)，而在聚凝胺法中我們可以將試管中反應(yīng)物直接放在玻片上鏡下觀察，根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定假凝集現(xiàn)象;血漿蛋白異常，如多發(fā)性骨髓瘤，兩種方法都會(huì)出現(xiàn)主側(cè)凝集，微柱凝膠法法結(jié)合自身對(duì)照只能懷疑是蛋白異常，而聚凝胺法可直接聯(lián)合顯微鏡觀察緡錢狀凝集;冷凝集素干擾，聚凝胺法可以在水浴箱內(nèi)操作排除干擾，微柱凝膠法法則需洗滌RBC后重新交叉配血。聚凝胺法進(jìn)行一次交叉配血的完整操作在10 min內(nèi)可以完成，而微柱凝膠法需要30 min，因此聚凝胺法仍然是醫(yī)院急診配血的首選方法，而且聚凝胺法試劑成本低，也是一些小型醫(yī)院的常規(guī)應(yīng)用方法。聚凝胺法的缺點(diǎn)是對(duì)操作人員的技術(shù)水平要求高，即使完全按操作規(guī)程規(guī)范化操作，但個(gè)人的振搖力度與操作技巧、終點(diǎn)判斷會(huì)有人為差別，可能將一些弱凝集結(jié)果誤報(bào)為陰性，人為流程多誤差幾率高、生物安全風(fēng)險(xiǎn)高于微柱凝膠法。

微柱凝膠法操作簡(jiǎn)單，不需洗滌，對(duì)陰性結(jié)果不需確證試驗(yàn)，適用于批量檢測(cè)，解決了Cooms試驗(yàn)因?yàn)槌绦驈?fù)雜費(fèi)時(shí)等原因未能在臨床常規(guī)應(yīng)用的問(wèn)題，使不完全抗體檢測(cè)由理論上的“金標(biāo)準(zhǔn)”成為實(shí)際應(yīng)用中的真正“金標(biāo)準(zhǔn)”;結(jié)果清晰明確，可重復(fù)性強(qiáng)，標(biāo)本用量少，特別有利于新生兒及某些特殊血液病標(biāo)本的檢測(cè);結(jié)果保存時(shí)間長(zhǎng)，易于規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化、信息化;操作程序簡(jiǎn)化及規(guī)范化，減少接觸血液標(biāo)本及病原微生物機(jī)會(huì)，減少醫(yī)源性傳染。

輸血安全是目前臨床面臨的重大挑戰(zhàn)，輸血科的實(shí)驗(yàn)技術(shù)是保證輸血安全的重要環(huán)節(jié)，既要保證交叉配血的準(zhǔn)確性，又要快速向臨床提供血液，就要充分了解各種實(shí)驗(yàn)方法的性能，將各種方法靈活地聯(lián)合運(yùn)用提高工作質(zhì)量，聚凝胺法和微柱凝膠法在輸血科的實(shí)際工作中不可互相替代，急診用血可用聚凝胺法快速向臨床輸送最低限量的安全血液，然后盡可能地應(yīng)用微柱凝膠法交叉配血，日常工作應(yīng)采用微柱凝膠法，當(dāng)有陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)時(shí)，聯(lián)合聚凝胺法及相關(guān)實(shí)驗(yàn)盡快排除干擾，向臨床提供安全血液。

［1］CATE J C，REILLY N，Evaluation and implementation of thegel test for indirect antiglobulin testing in a community hospital laboratory.Arch Pathol Lab Med，1999，123:693-694.

［2］LANGSTON M M，PROCTER J L，CIPOLONE K M，et al，Evaluation of the gelsystem for ABO grouping and Dtyping.Transfusion，1999，39:300-301.

［3］鄧永福，楊明清.臨床輸血實(shí)用新技術(shù).北京:人民軍醫(yī)出版社，2007，7.

［4］胡麗華，叢玉隆.檢驗(yàn)與臨床診斷輸血分冊(cè).人民軍醫(yī)出版社，2009，11.

［5］王梁平，彭道波，趙輝.微柱凝膠法與凝聚胺法抗體檢出比較分析.臨床檢驗(yàn)雜志，2001，19(6):355.