陳剛，帕麗達(dá)，朱軍，樊叢照，吳明玉，李曉瑾*

(1.新疆中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)醫(yī)院， 新疆 烏魯木齊 830052；3.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052)

立地條件對昆侖雪菊品質(zhì)的影響△

陳剛1，帕麗達(dá)2，朱軍1，樊叢照1，吳明玉3，李曉瑾1*

(1.新疆中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)醫(yī)院， 新疆 烏魯木齊 830052；3.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052)

目的：探索栽培環(huán)境對昆侖雪菊品質(zhì)的影響，以確定昆侖雪菊的道地性。方法：采用薄層色譜法對不同產(chǎn)地的昆侖雪菊總提物成分比對；采用分光光度法測定新疆不同產(chǎn)地昆侖雪菊中總黃酮的含量；采用浸泡法比對不同產(chǎn)地昆侖雪菊浸出液的色度。結(jié)果：在GF254預(yù)制硅膠板上，以乙酸乙酯∶甲醇∶水(8∶1∶1)為展開劑，證實(shí)不同產(chǎn)地昆侖雪菊成分構(gòu)成基本相似，與金雞菊有明顯差異；不同產(chǎn)地昆侖雪菊總黃酮含量有明顯的差異，含量分別為18.33%、27.05%、32.93%、24.57%、26.94%、17.33%、26.17%、20.47%、23.68%、17.49%、24.25%；不同產(chǎn)地昆侖雪菊浸泡6次后色澤變化有顯著差異。結(jié)論：不同海拔及不同采收期與昆侖雪菊的品質(zhì)具有相關(guān)性，提示昆侖雪菊具有產(chǎn)品道地性。

昆侖雪菊；兩色金雞菊；薄層色譜；總黃酮；色度

昆侖雪菊又名血菊，維吾爾名“古麗恰爾”，原植物系菊科Asteraceae/Compositae金雞菊屬CoreopsisLinn.兩色金雞菊CoreopsistinctoriaNutt.，一年生草本植物，分布于新疆和田地區(qū)海拔3000 m左右的昆侖山系[1]。具有清熱解毒﹑活血化瘀﹑和胃健脾等功效，花亦可當(dāng)茶飲用，用于治療燥熱煩渴、高血壓、心慌、胃腸不適、食欲不振、痢疾及瘡癤腫毒等疾病，是維吾爾醫(yī)習(xí)用藥材之一[2-4]。

昆侖雪菊中富含揮發(fā)油、總皂苷、氨基酸、多糖、黃酮類物質(zhì)[5-9]，可抗病原體，增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力。目前，已從昆侖雪菊揮發(fā)油中鑒定出20余類天然成分，其中包括芳香類、醇類、酚類、萜類、黃酮類、烯類和烷烴化合物，這些均是與降血壓、降血脂、調(diào)節(jié)血糖、抗腫瘤及抗衰老相關(guān)藥物的重要成分。市場近年對昆侖雪菊需求量劇增，其野生產(chǎn)量稀少，價(jià)格逐年上升(每公斤約2000元)。為滿足市場需要，擴(kuò)大藥源，目前全疆各地紛紛引種栽培，由于產(chǎn)地、野生、栽培方法等均會影響藥材的質(zhì)量，研究產(chǎn)地對昆侖雪菊品質(zhì)的影響，具有十分重要的意義。本文通過收集新疆12個(gè)產(chǎn)地的昆侖雪菊，進(jìn)行薄層分析、總黃酮含量測定、浸出液色度的平行測試，探討立地條件與昆侖雪菊品質(zhì)的關(guān)系，為建立昆侖雪菊質(zhì)量評價(jià)體系提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 樣品

昆侖雪菊樣品(見表1)由新疆中藥民族藥研究所提供，經(jīng)王果平副研究員鑒定為菊科Asteraceae/Compositae金雞菊屬CoreopsisLinn.草本植物兩色金雞菊CoreopsistinctoriaNutt.的頭狀花序。

表1 昆侖雪菊的樣品

1.2 試劑

蘆丁對照品(批號：100080-200707，中國藥品生物制品檢定所)，GF254預(yù)制硅膠板，95%乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、三氯化鋁等均為分析純。

1.3 儀器

紫外光譜儀，電子分析天平(AB265-S，METTLER TOLEDO)，電子天平(SL602，上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)，數(shù)控超聲波清洗器((KQ5200DA型，昆山市超聲儀器有限公司)，電熱恒溫水浴鍋(DZKW，北京市永光明醫(yī)療儀器廠)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(TC-N-1100D-W(WD)，北京同德創(chuàng)業(yè)技術(shù)有限公司)，臺式干燥箱(DGB/20-002，重慶試驗(yàn)設(shè)備廠)；冷凝管；圓底燒瓶；橡膠管；鐵架臺；定量毛細(xì)管等。

2 方法

2.1 樣品處理

樣品置于60 ℃烘箱中干燥，用粉碎機(jī)粉碎至40目后備用。分別稱取樣品5.0 g，加70%乙醇50 mL浸泡2 h，水浴回流提取，加熱至微沸，提取3次，每次1.5 h。醇提過濾后的濾渣加50 mL蒸餾水，水浴回流提取，加熱至微沸，提取3次，每次1.5 h。合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，搖勻，靜置，取上清液作為供試品溶液。

2.2 薄層鑒別

吸取各樣品試液1.0 μL，分別點(diǎn)樣于同一GF254預(yù)制硅膠板，以乙酸乙酯∶甲醇∶水(8∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴5%三氯化鋁乙醇溶液，顯色，熱風(fēng)吹干，置紫外燈光(254 nm 和365 nm)下檢視。

2.3 浸出液色度對比

分別稱取樣品1 g，加50 mL開水浸泡5 min，重復(fù)浸泡6次，觀察浸出液的顏色變化。

2.4 總黃酮含量的測定

2.4.1 供試樣品制備 分別取樣品5 g，加95%乙醇50 mL，用水浴回流提取，溫度為80 ℃，分別提取3次，每次1.5 h，轉(zhuǎn)移提取液至250 mL容量瓶，定容，從中取10 mL溶液置50 mL容量瓶，定容，即為樣品溶液。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 蘆丁對照品120℃干燥至恒重，精密稱取106.7 mg，置100 mL容量瓶，加適量甲醇，加熱溶解，冷卻，加甲醇定容，搖勻，即得濃度為1.067 mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。取標(biāo)準(zhǔn)液0.0、0.5、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL分別加入到25 mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉溶液10 mL，水定容，搖勻，靜置15 min，在波長510 nm處測定吸光度值，以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，建立回歸方程。

2.4.3 黃酮定性反應(yīng) 分別取供試樣品少量，經(jīng)鹽酸-鎂粉反應(yīng)、濃氨水反應(yīng)、枸櫞酸丙酮、氫氧化鈉、三氯化鐵、磷鉬酸等試驗(yàn)檢驗(yàn)。

2.3.4 樣品總黃酮含量的測定 精密吸取不同產(chǎn)地干燥的昆侖雪菊樣品溶液1.0 mL，加蒸餾水至6 mL，以不加樣品溶液為空白，在波長510 nm處測定吸光度，平行測定3次，計(jì)算出不同產(chǎn)地雪菊中總黃酮的含量平均值。

3 結(jié)果

3.1 薄層鑒別

以皮山縣的昆侖雪菊作為對照，結(jié)果表明同產(chǎn)地昆侖雪菊成分構(gòu)成基本相似，與金雞菊有明顯差異(見圖1，圖中樣品編號對應(yīng)表1編號，下同)。

A.為紫外燈365 nm下檢視圖 B.為紫外燈254 nm下檢視圖圖1 不同產(chǎn)地昆侖雪菊的TLC鑒別圖

3.2 浸出液色度

觀察不同產(chǎn)地昆侖雪菊浸泡6次后色澤變化(見圖2)，結(jié)果顯示傳統(tǒng)民豐高海拔產(chǎn)地的雪菊色度與特有的清新甜香味明顯與其他產(chǎn)地的雪菊有區(qū)別，表明立地因子對昆侖雪菊的茶飲品質(zhì)有的影響(見表2)。

圖2 不同產(chǎn)地昆侖雪菊浸泡6次后色澤變化比較

編號產(chǎn)地名稱昆侖雪菊浸泡后溶液色度比較第1次第2次第3次第4次第5次第6次1皮山+++++++++++++++2策勒平原+++++++++++-3民豐平原++++++++++++-4民豐山區(qū)+++++++++++++++7于田+++++++++-8阜康++++++++++++++10喀什++++++++++++++++11伊犁那拉提+++++++++++++-

注：表中+++++ 表示溶液顏色較深，++++ 表示溶液顏色深，+++ 表示溶液顏色淺，++ 表示溶液顏色較淺，+表示溶液顏色非常淺，-表示溶液無顏色

3.3 總黃酮含量的測定

3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制結(jié)果 回歸方程Y=0.011 1X+0.010 3，r=0.999 4。確定濃度21.340～59.752 μg·mL-1范圍與吸光度呈線性關(guān)系(見圖3)。

圖3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.3.2 黃酮定性反應(yīng)結(jié)果 經(jīng)鹽酸-鎂粉反應(yīng)、濃氨水反應(yīng)、枸櫞酸丙酮、氫氧化鈉、三氯化鐵、磷鉬酸等試驗(yàn)檢驗(yàn)，反應(yīng)呈陽性，證明了提取液中含有黃酮類物質(zhì)。

3.3.3 樣品總黃酮含量測定結(jié)果 不同產(chǎn)地雪菊中總黃酮的含量如圖4所示，不同產(chǎn)地的雪菊中黃酮含量具有顯著的差異，其中編號為4號的民豐縣地產(chǎn)雪菊中總黃酮含量最高，其海拔為2 450 m，年平均氣溫10.5 ℃，年平均降水量30 mm。根據(jù)民豐縣4份雪菊樣品的總黃酮含量測定結(jié)果，高海拔雪菊黃酮含量較高；同一海拔高度，采收期亦對雪菊的總黃酮含量有一定的影響。

圖4 不同產(chǎn)地雪菊中總黃酮的含量的比較

4 討論

薄層色譜鑒別過程中試用2010版《中國藥典》所載展開系統(tǒng)展開，在展開劑的選擇中，本實(shí)驗(yàn)分別對比了不同極性的展開劑及不同的展開劑比例，結(jié)果表明以乙酸乙酯∶甲醇∶水(8∶1∶1)為展開劑的展開效果最佳，于可見光下檢視，能清晰的看到斑點(diǎn)。文獻(xiàn)一般采用三氯甲烷、丙酮石油醚等作為展開劑，本實(shí)驗(yàn)也嘗試了上述展開劑，結(jié)果表明斑點(diǎn)不清晰，分離效果不明顯。因此，本研究最終采用上述展開劑，斑點(diǎn)清晰，分離效果好。通過圖1可見，1號～11號樣品斑點(diǎn)對應(yīng)較整齊，12號樣品的斑點(diǎn)與其他樣品斑點(diǎn)不同。以1號樣品作為對照，1號～11樣品所含化學(xué)成分差異不大；而12號樣品的化學(xué)成分與1號～11樣品所含化學(xué)成分有明顯的差異，其原因可能是1號～11樣品與12號不屬于同種藥材，其化學(xué)成分不同。實(shí)驗(yàn)表明，薄層分析方法適宜于做昆侖雪菊的鑒別。

昆侖雪菊為當(dāng)?shù)鼐S吾爾族有保健作用的茶飲，不同產(chǎn)地雪菊浸出液色度試驗(yàn)表明：不同產(chǎn)地雪菊的色度與氣味有顯著不同，提示昆侖雪菊的品質(zhì)與產(chǎn)地有直接的相關(guān)性，具有道地性特質(zhì)。試驗(yàn)表明雪菊的色度與氣味變化具有明顯的一致性，基于此，雖氣味亦是評價(jià)茶飲品質(zhì)的重要指標(biāo)之一，但表述標(biāo)準(zhǔn)化困難，因此，本文僅選擇了色度變化為評價(jià)雪菊品質(zhì)的指標(biāo)之一。

在黃酮含量試驗(yàn)中曾選用60%、85%、95%乙醇和甲醇等4種溶劑提取總黃酮，結(jié)果表明95%乙醇提取液澄明度好，吸收值較高，故實(shí)驗(yàn)中采用95%乙醇為溶劑進(jìn)行提取。此外，黃酮含量測定結(jié)果顯示編號為4號的民豐山區(qū)地產(chǎn)雪菊總黃酮含量最高，與其水浸液色度實(shí)驗(yàn)結(jié)果高度一致，提示其他化學(xué)成分亦有別于其他產(chǎn)地的雪菊。

本次試驗(yàn)選擇海拔、年平均降水量、年平均氣溫、采收期等4個(gè)立地因子，研究其對昆侖雪菊總黃酮含量的影響。不同海拔和不同采收期對總黃酮含量有一定的影響，年平均氣溫和年平均降水量對總黃酮含量的影響不明顯。是否還存在其他立地因子影響雪菊內(nèi)在品質(zhì)，需進(jìn)一步探究。

[1] 新疆植物志編輯委員會.新疆植物志(第5卷)[M].烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999：93.

[2] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志.七十五卷[M].科學(xué)技術(shù)出版社，1979.365.

[3] 木合不力·阿不力孜，張?zhí)m，張敏，等.昆侖雪菊中氨基酸含量的分析[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，30(4)：431-432.

[4] 梁淑紅，龐市賓，等.金雞菊提取物降血脂作用的動物試驗(yàn)研究[J].農(nóng)墾醫(yī)學(xué)，2009，31(6)：234-235.

[5] 張彥麗，韓艷春，阿依吐倫·斯馬義，等.GC-MS對昆侖雪菊揮發(fā)油成分的研究[J].新疆醫(yī)科大大學(xué)學(xué)報(bào)，2010：33(11)：1299-1300.

[6] 張彥麗，韓艷春，阿依吐倫·斯馬義，等.分光光度法測定維吾爾藥昆侖雪菊中總皂苷的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2011，26(2)：87-88.

[7] 木合布力·阿布力孜，張?zhí)m，張敏，等.昆侖雪菊中氨基酸的含量分析[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，30(4)：431-432.

[8] 張彥麗，阿布都熱合曼·合力力，阿依吐倫·斯馬義，等.苯酚-硫酸法測定維吾爾藥昆侖雪菊多糖含量的研究[J].藥物分析雜志，2010，30(11)：2205-2207.

[9] 木合不力·阿不力孜，張燕，毛新民，等.新疆昆侖雪菊化學(xué)成分的初步定性研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，33(6)：628-630.

EffectofSiteConditiononQualityofKunlunSnowChrysanthemum

CHEN Gang1，Palida2，HU Jun1，F(xiàn)AN Cong-zhao1，WU Ming-yu3，LI Xiao-jin1*

(1.XinjiangInstituteofChinesematerialmedicalEthicalmaterialmedical，Urumqi830002，China; 2.HospitalofXinjiangagriculturaluniversity，Urumqi830000，China; 3.CouegeofScienleandTechnologyXinjiangagriculturaluniversity，Urumqi830000，China)

Objective：To explore the effects of cultivation environment on Kunlun snow chrysanthemum quality and ensure the genuineness of Kunlun snow chrysanthemum.Methods：Thin layer chromatography method was used to campare total extract component in different areas of Kunlun snow chrysanthemum.The total flavonoids in Kunlun snow chrysanthemum from different areas of Xinjiang were determined by spectrophotometry.Soaking chroma of Kunlun snow chrysanthemum was compared by the water immersion method.Results：In GF254 preformed silica gel plate，by using ethyl acetate∶methanol∶water(8∶1∶1)as developing agent，we confirmed the components of Kunlun snow chrysanthemum from different areas are similar，which were obvious different withCoreopsisdrummondii.Total flavonoids were obvious different in different areas，their contents：18.33%，27.05%，32.93%，24.57%，26.94%，17.33%，26.17%，20.47%，23.68%，17.49%，24.25%.The color is significant different in different areas after 6 times water immersion.Conclusion：Different altitudes and harvest times are related with quality of Kunlun snow chrysanthemum，shows the geoherbalism of Kunlun snow chrysanthemum.

Kunlun snow chrysanthemum;CoreopsistinctoriaNutt.; Thin layer chromatography; Total flavonoids; Chroma

2013-05-24)

新疆維吾爾自治區(qū)科技重大專項(xiàng)(201130105-1)

*

李曉瑾，研究員，研究方向：中藥資源，E-mail：xjlxj@126.com