郭 強

(河南省食品藥品檢驗所，河南鄭州450003)

老年咳喘片是《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑》第九冊中的品種［1］。本品處方中含有黃芪、白術(shù)、防風、甘草、黃精、淫羊藿、補骨脂等中藥材，其中黃芪為君藥，具有補氣升陽、固表止汗、利水消腫、生津養(yǎng)血等功效。原標準未建立含量測定檢測方法，為進一步提高和控制產(chǎn)品質(zhì)量、保證療效，本研究建立了測定黃芪中黃芪甲苷含量的高效液相色譜檢測方法。本研究參照《中國藥典》2010版一部黃芪藥材項下含測方法［2］，結(jié)合有關(guān)參考文獻［3－10］，采用高效液相色譜法－蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC-ELSD法)測定了老年咳喘片中有效成分黃芪中黃芪甲苷的含量。該方法簡便，快速，靈敏，重復(fù)性好，可用于該產(chǎn)品質(zhì)量控制。

1 藥品、試劑與儀器

老年咳喘片樣品由河南羚銳制藥股份有限公司提供，批號110104，110105，110106。黃芪甲苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，為含量測定用對照品，批號110781－2008613;乙腈，為色譜醇，供流動相配制用，Merck公司產(chǎn)品;水為超純水;甲醇、正丁醇、氨水均為分析純。Waters 2695高效液相色譜儀，配四元泵、自動進樣器、Alltech公司ELSD2000蒸發(fā)光散射檢測器;KQ－300型超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(實驗中用Agilent C18，4.6 mm × 250 mm，5 μm)，乙腈 － 水(32∶68)為流動相，體積流量 1.0 mL/min，柱溫40℃。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應(yīng)不低于4 000。

在此條件下對黃芪甲苷對照品溶液、老年咳喘片供試品溶液進行測定，HPLC色譜結(jié)果均較為理想，同法制備的老年咳喘片陰性樣品(即不含黃芪藥材的老年咳喘片)測定結(jié)果則為陰性，即未見與黃芪甲苷對照品保留時間相一致的峰，說明其他藥材對樣品測定無干擾。色譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

對照品溶液:精密稱取黃芪甲苷對照品10.59 mg，置10 mL量瓶中，加入甲醇溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻;精密量取2 mL，置5 mL量瓶中，加入甲醇溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1毫升中含黃芪甲苷0.423 6 mg)。

圖1 老年咳喘片HPLC色譜圖

供試品溶液:取本品80片，除去包衣，精密稱定，研細;取細粉8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中;精密加入甲醇100 mL，密塞，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min;濾過;精密量取續(xù)濾液50 mL，回收甲醇并濃縮至干;殘渣加水30 mL微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次40 mL;合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次50 mL，棄去氨試液，正丁醇液蒸干;用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察

分別精密吸取0.423 6 g/L黃芪甲苷對照品溶液 2，4，8，12，16，20 μL，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值與進樣量取對數(shù)后進行回歸處理，黃芪甲苷在 0.847 2 ～8.472 0 μg 范圍內(nèi)，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系?；貧w方程為:Y=1.445 0X+5.575 0，r=0.999 4。

2.3.2 精密度試驗

取同一黃芪甲苷對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)測定6次(進樣量10 μL)，測得峰面積積分值分別為 10 979 711，10 860 851，10 950 254，10 906 841，10 993 894，10 932 655。結(jié)果平均峰面積積分值為10 937 368，RSD=0.4%(n=6)。結(jié)果表明:該方法精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，按上述色譜條件分別在第0，1，3，6，9 h 各進樣 1 次，每次進樣 10 μL，測得峰面積積分值分別為3 914 875，3 885 792，3 965 229，3 934 280，4 051 114，結(jié)果平均峰面積積分值為32 36 518，RSD=0.50%(n=5)。結(jié)果表明:供試品溶液在9 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4 重現(xiàn)性試驗

取同一批號的樣品(批號為110104)6份，按上述測定方法試驗，結(jié)果測得每片樣品中含黃芪甲苷分別為0.091，0.093，0.095，0.089，0.090，0.088 mg/片，結(jié)果平均含量為 0.091 mg/片，RSD=2.86%(n=6)。結(jié)果表明:該法重現(xiàn)性較好。

2.3.5 回收率試驗

精密稱取已知含量的本品(批號110104，黃芪甲苷含量0.092 mg/片)5份，每份約4 g，精密稱定，精密加入1.059 g/L黃芪甲苷對照品溶液1 mL，按供試品溶液的制備項下方法制備加樣供試品溶液。按上述色譜條件測定，結(jié)果見表1。計算回收率，平均回收率為 98.49%，RSD=3.36%(n=5)。

表1 黃芪甲苷回收率測定結(jié)果

2.4 樣品含量測定

按含量測定方法測定3批樣品中黃芪甲苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品黃芪甲苷含量測定結(jié)果

3 討論

本文建立了高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測法測定老年咳喘片中黃芪甲苷含量的方法。該方法簡便準確，快速靈敏，重現(xiàn)性好，可用于該產(chǎn)品定量控制。

3.1 含量測定方法的建立依據(jù)

黃芪為本方中的君藥，黃芪中黃芪甲苷為其主要特征性有效成分，故選擇黃芪甲苷作為控制本品質(zhì)量的指標成分。關(guān)于黃芪甲苷的含量測定方法已有薄層掃描法、HPLC-UV法、HPLC-ELSD法。這幾種方法中，薄層掃描法靈敏度、重現(xiàn)性都較差，前處理步驟多，干擾因素排除較困難;用HPLC-UV法黃芪甲苷僅在201 nm有較弱的末端吸收，操作條件十分嚴格，噪音對結(jié)果影響較大;而HPLC-ELSD法簡便快速靈敏，克服了前兩法的缺陷，靈敏度高，可作為檢測黃芪甲苷含量的較為理想的測定方法。

3.2 提取條件的選擇

取供試品8 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇的量比較了50，100，125 mL，超聲處理時間比較了20，30，40 min，用水飽和的正丁醇振搖提取3次、6次，結(jié)果表明:在加入100 mL甲醇、超聲處理30 min、用水飽和的正丁醇振搖提取3次的情況下，能夠?qū)ⅫS芪甲苷提取完全。若增加甲醇的加入量、增加超聲處理的時間、增加水飽和的正丁醇振搖提取的次數(shù)，黃芪甲苷的含量不再增加;若減少甲醇的加入量、減少超聲處理的時間、減少提取的次數(shù)，均不能將黃芪甲苷充分提取。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑:第九冊［M］.北京，1994:70.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:283.

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