正交試驗法優(yōu)選溫胃寧口服液水提工藝

李春峰，魯 靜，唐進法

(1.鄭州市第六人民醫(yī)院，河南 鄭州450015;2.河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，河南鄭州450000)

溫胃寧口服液為我院院內(nèi)制劑，由延胡索、砂仁、白芍、陳皮、雞內(nèi)金、干姜6味中藥飲片組成，具有理氣和胃、活血化瘀、緩急止痛功效，主要用于治療氣滯血瘀型慢性胃炎、功能性消化不良、十二指腸球部潰瘍、返流性食管炎等。為方便臨床用藥，本研究對組方成分進行了分析，選擇水提取，對其提取工藝采用正交試驗法進行研究，以提取液中芍藥苷含量為指標，優(yōu)選最佳提取工藝，使制劑工藝更加合理。

1 藥品、試劑與儀器

溫胃寧口服液處方:延胡索、砂仁、白芍、陳皮、雞內(nèi)金、干姜。以上藥物由河南醫(yī)藥藥材有限公司提供，經(jīng)河南中醫(yī)學院陳隨清教授鑒定，符合《中國藥典》2010版一部各藥材項下有關(guān)規(guī)定。芍藥苷對照品，中國食品藥品檢定研究院提供，批號110736－201136;乙腈，色譜純，天津市四友精細化學品有限公司產(chǎn)品;磷酸，色譜純，美國迪馬公司產(chǎn)品;水為超純水;其他試劑均為分析純。島津10ATvp高效液相色譜儀，島津SPD－M10Avp型檢測器，CLASS－vp色譜工作站，均為日本島津公司產(chǎn)品;CP－225D分析天平，德國賽多利斯公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 水煎組正交試驗設計

參考彭俊付等［1］的研究，采用正交試驗法以加水量(A)、煎煮次數(shù)(B)、煎煮時間(C)為試驗因素，每個因素3個水平(因素水平見表1)，每組單劑處方量藥材按照要求煎煮，得到9組樣品，以芍藥苷含量為指標優(yōu)選提取工藝。

表1 水提取工藝因素水平表

稱取延胡索10 g、砂仁 6 g、白芍 15 g、陳皮12 g、雞內(nèi)金10 g、干姜6 g，按正交表設計的方案進行正交試驗。將提取液濃縮，轉(zhuǎn)移至200 mL容量瓶中，加水定容至刻度，得到1～9號樣品溶液。

2.2 芍藥苷含量的測定

參照文獻方法［2］進行。

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent ZORBAX SB-C18分析柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相為乙腈 － 0.1% 磷酸溶液(14∶86)，進樣量 10 μL，體積流量 1.0 mL/min，檢測波長230 nm，柱溫為室溫，理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應不低于2 000。

2.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對照品3.27 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，作為儲備液;再揩密吸取芍藥苷對照品儲備液1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得濃度為32.7 mg/L的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備

精密吸取樣品溶液1 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.4 標準曲線的繪制

精密吸取芍藥苷對照品溶液 4，7，10，13，16 μL，分別注入液相色譜儀，按照樣品測定項下的色譜條件測定，記錄峰面積，以芍藥苷對照品溶液的進樣量為橫坐標(X)，峰面積積分值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，得芍藥苷的回歸方程為Y=4 345X－14 345，r=0.999 6。結(jié)果表明:芍藥苷線性范圍0.130 8 ～0.52 3 2 μg。

2.2.5 精密度試驗

精密吸取芍藥苷對照品溶液10 μL，重復進樣6次，分別測定峰面積，結(jié)果:芍藥苷的RSD為1.2%(n=6)。結(jié)果表明:本方法精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗

取正交試驗1號樣品溶液的供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h 按上述色譜條件進樣測定 5 次，結(jié)果:芍藥苷色譜圖面積的RSD為1.6%(n=5)。結(jié)果表明:供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.2.7 芍藥苷含量測定

取正交試驗1～9號樣品溶液，按2.2.3項下方法，制備供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，按 2.2.1 項下色譜條件進行測定。

2.3 測定結(jié)果

測定正交試驗9組樣品，計算得到白芍藥材中芍藥苷的含量，見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表2 L9(34)正交試驗設計與結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

由表2、表3可知，3個因素的級差大小順序為B＞C＞A。因素B提取次數(shù)對提取工藝的影響較大，具有顯著性;因素A加水量、因素C提取時間影響較小，不呈顯著性。溫胃寧口服液的最佳水提工藝為A1B3C1，即加6倍量水，提取3次，每次1.5 h。

2.4 工藝驗證試驗

按優(yōu)選的最佳工藝制備3批樣品進行驗證試驗，并計算得到白芍藥材中芍藥苷的含量。計算出芍藥苷含量分別為 13.92，13.89，13.91 mg/g，RSD為1.53%。結(jié)果表明:此工藝穩(wěn)定可行。

3 小結(jié)

溫胃寧口服液為復方制劑，成分復雜。實驗選擇以芍藥苷含量為測定指標，可評價工藝的合理性。采用正交試驗設計法對溫胃寧口服液提取工藝進行優(yōu)化篩選，確定加6倍量水、提取3次、每次1.5 h的提取工藝簡便，科學，符合生產(chǎn)要求。

［1］彭俊付，劉勇，劉永剛.正交試驗法優(yōu)選廣痛消中芍藥苷的提取工藝［J］.北京中醫(yī)藥大學學報，2011，34(4):271－273，285.

［2］帥銀花，王瓊，趙斌.婦科養(yǎng)榮片水提取工藝的研究［J］.河南中醫(yī)學院學報，2009，24(1):46－47.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:二部［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:96.

［4］張海龍，崔永霞，王淑美.高效液相色譜法測定腦心通膠囊中芍藥苷的含量［J］.中醫(yī)學報，2010，25(1):118－119.