EDTA抗凝導致血小板假性減少的原因探討

南京醫(yī)科大學附屬江寧醫(yī)院（211100）徐勇

血小板具有維持血管內皮完整性的功能與黏附、聚集、釋放、促凝和血塊收縮的功能。血小板計數(shù)是測定全血中血小板的濃度，是止血凝血檢查最常用的試驗之一[1]。

正常狀態(tài)下，血小板在血管內以單個形式循環(huán)，并不與其他細胞類型和其他血小板相互作用。當血小板數(shù)量、質量異常時可引起出血性疾病。數(shù)量減少常見于血小板減少性紫癜、脾功能亢進、再生障礙性貧血和白血病等。數(shù)量增多常見于原發(fā)性血小板增多、真性紅細胞增多癥、慢性粒細胞白血病等。

隨著現(xiàn)代科學技術的發(fā)展，醫(yī)院檢驗人員的主要工作是運用各種先進的儀器設備和熟練的檢驗技術，對各類標本進行正確的處理分析，為臨床診斷和治療提供準確有效的實驗數(shù)據(jù)。對于血小板計數(shù)通常是利用各種先進的全自動血細胞分析儀快速高效提供實驗數(shù)據(jù)為臨床診治服務。但在某些病理因素下，出現(xiàn)了儀器數(shù)據(jù)與臨床病情不相符的情況。我科結合儀器分析、推片、染色、鏡檢，同時做末梢血人工血小板計數(shù)發(fā)現(xiàn)，其中的EDTA抗凝血可導致儀器血小板計數(shù)的假性減少的現(xiàn)象。

1 資料與方法

1.1 資料 病歷摘要1：某女性患者，28歲，孕34周，入院待產。查體：T 37.0℃，P 80次/min，BP 110/65mmHg。彩超顯示：BPD 9.5cm，F(xiàn)L 6.4cm，胎盤前壁0～2級，單胎頭位。實驗室檢查：肝腎功能、凝血功能均正常。血常規(guī)：SYSMEX XT-2000i血球儀測得RBC 3.97×1012/L，Hb 118g/L，WBC 9.6×109/L，PLT 17×109/L。用邁瑞B(yǎng)C5300血球儀復查結果為RBC 3.88×1012/L，Hb 116g/L，WBC 9.9×109/L，PLT 20×109/L。檢驗結果報告發(fā)出后，臨床醫(yī)生認為與產婦癥狀不符，要求復查。

病歷摘要2 ：某女性患者，68歲，白內障入院待手術。查體：T 37.2℃，P 70次/min，BP 135/85mmHg。實驗室檢查：肝腎功能、凝血功能均正常，但血糖15.2mmol/L；血常規(guī)：SYSMEX XT-2000i血球儀測得RBC 3.42×1012/L，Hb 108g/L，WBC 7.6×109/L，PLT 27×109/L。用邁瑞B(yǎng)C5300血球儀復查結果為RBC 3.48×1012/L，Hb 106g/L，WBC 7.9×109/L，PLT 32×109/L。檢驗結果報告發(fā)出后，臨床醫(yī)生認為與患者癥狀不符，要求復查。

鑒于上述情況的出現(xiàn)，我科檢驗人員遂自帶EDTA-K2抗凝管、枸櫞酸鈉抗凝管和肝素鋰抗凝管各一支，親自到病房給這2例患者同時抽了三管加了不同抗凝劑的血，分別用兩臺血細胞分析儀作血細胞分析，同時推片、染色、鏡檢，同時采集患者末梢血進行人工血小板計數(shù)，以進一步確定產生上述情況的原因。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 邁瑞B(yǎng)C 5300五分類血細胞分析儀，SYSMEX-XT 2000i五分類血細胞分析儀及相關配套試劑。

1.2.2 顯微鏡、計數(shù)板、草酸銨稀釋液（自配）、瑞氏染液（購買）。

1.3 方法 分析前各儀器的常規(guī)保養(yǎng)，質控在控，嚴格按操作規(guī)程測定。

2 結果

嚴格按照操作步驟，將EDTA-K2、枸櫞酸鈉和肝素鋰抗凝血分別用SYSMEX XT-2000i和邁瑞B(yǎng)C5300全自動血細胞分析儀檢測，檢驗測得其血小板結果見附表。由此可見，該病例是由EDTA抗凝劑導致血液中血小板發(fā)生聚集，所引起的EDTA依賴性血小板假性減少 （PTCP）。

在這2例患者中的推片、染色、鏡檢均可見血小板有成團聚集分布的情況，同時在這2例患者的血細胞分析儀的白細胞直方圖上見不到小細胞的前半個峰，而只有后半個峰及大細胞群峰。筆者應用另一個血細胞分析儀復查結果顯示與此無差異。但用枸櫞酸鈉和肝素鋰抗凝的血液標本檢測和末梢血血小板計數(shù)則未見減少，而臨床病因也未提示有出血傾向。由此可見，這2例患者的血小板計數(shù)減少并不是真正的減少，而是由EDTA抗凝導致的血小板假性減少。兩血細胞分析儀對各例檢測對象的血小板計數(shù)無顯著差異。但與用枸櫞酸鈉和肝素鋰抗凝的血液用血細胞分析儀分析，以及末梢血人工血小板計數(shù)的方法對EDTA依賴性血小板聚集進行比較，則血小板計數(shù)測定結果有顯著差異。

3 討論

目前，國際血液學標準化委員會（ICSH）推薦EDTA-K2作為血細胞計數(shù)的抗凝劑正是由于其具有紅細胞、白細胞、血小板體積和形態(tài)不發(fā)生改變的優(yōu)點，與此同時不再使用枸櫞酸鈉等抗凝劑。但某些患者體外的EDTA抗凝血在室溫條件下，其血小板會發(fā)生EDTA依賴性凝集。血細胞自動分析儀對凝集體的結構、血小板數(shù)目不能確認，從而使儀器法血小板計數(shù)假性減少[2]。但它偶爾可導致血小板聚集，發(fā)生血小板假性減少。據(jù)報道PTCP的發(fā)生率約為0.05%[3]。附表中EDTA抗凝檢驗結果顯著低于其他兩種抗凝結果，而枸櫞酸鈉抗凝結果略低于肝素鋰抗凝結果，可能與枸櫞酸鈉是1∶9抗凝，血液有所稀釋有關。對于在這2例患者中，血小板計數(shù)減少這可能與血小板表面存在某些隱匿性抗原有關，由于EDTA的抗凝使血小板活化，形態(tài)發(fā)生改變，隱匿性抗原的表位構象也隨之改變。這些活化的血小板與存在于血漿中的自身抗體結合后激活了細胞膜中的某些能活化血小板纖維蛋白原受體的活性物質，促使血小板與纖維蛋白原聚集成團，影響了血小板計數(shù)。而使用枸櫞酸鈉抗凝劑和肝素鋰抗凝劑未能引起活化，因此未發(fā)生血小板聚集，計數(shù)也沒有減少。

雖然EDTA依賴性血小板假性減少的現(xiàn)象并不多見，發(fā)生率很低，但是一旦發(fā)生，就會給患者增加一些臨床不必要的檢查，甚至出現(xiàn)誤診、誤治現(xiàn)象。因此對于血小板計數(shù)低的樣品，儀器計數(shù)可信度較差，應以改用枸櫞酸鈉和肝素鋰抗凝血在血細胞分析儀上復查血小板，同時鏡檢片中血小板分布情況或末梢血手工法復查[4]。

同時值得注意的是采集血標本后應在放置10min內再測定，可有效防止血小板產生的可逆性聚集。待檢血液不宜低溫度貯存，并且時間也不宜超過4h。否則會因為血小板易粘附、聚集、破壞發(fā)生自溶變形，體積縮小，影響PLT和MPV值。因此采血后應在4h以內完成工作[5]。

研究資料表明，EDTA依賴性假性血小板減少癥是由EDTA鹽抗凝時可誘導血小板互相聚集，堆積發(fā)生衛(wèi)星現(xiàn)象（血小板圍繞在單核細胞或淋巴細胞周圍呈現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象）[6]，致使全自動血細胞分析儀不能確認血小板而計數(shù)偏低[7]。EDTA抗凝血引起的假性血小板減少可見于正常人，但多數(shù)情況下伴發(fā)某些疾病如癌癥、自身免疫性疾病、傳染性單核細胞增多癥、肺心病、肝病及一些原因不明的病癥[8]。

附表 同一份標本加不同抗凝劑在兩種血細胞分析儀上檢測的PLT結果（×109/L）

EDTA依賴性假性血小板減少現(xiàn)象應該受到重視，特別是住院患者的抗凝血樣本。在臨床工作中，對于出現(xiàn)的單純血小板減少應結合患者的病情、體征、血凝分析等實驗室檢查綜合分析，首先排除EDTA PTCT的可能，力求為臨床提供最準確的信息。遇到類似現(xiàn)象，可采取相應的措施予以糾正，以獲取準確的實驗數(shù)據(jù)。如采用抽血后立即檢測、手工計數(shù)血小板及血涂片鏡檢或采用其他種類抗凝劑來鑒別。有文獻報道，當EDTA依賴性血小板減少時，可用其他抗凝劑作血小板計數(shù)，可避免血小板假性減少，如枸椽酸鈉或NaF。