孫文閃，田富饒，楊 委，葉旭炎

(義烏出入境檢驗檢疫局 綜合技術(shù)服務(wù)中心，浙江 義烏 322000)

鄰苯二甲酸酯(PAEs)是國際上重點監(jiān)控的內(nèi)分泌干擾激素. 這類物質(zhì)損害人類的生殖系統(tǒng)，影響生物體內(nèi)激素的正常分泌，導(dǎo)致細胞突變，致畸和致癌[1-2]. 歐盟、美國等已將PAEs列為優(yōu)先控制的污染物，并不斷增加監(jiān)控種類[3]. 我國也將一些鄰苯二甲酸酯列入“中國環(huán)境優(yōu)先污染物黑名單”[4]. 鄰苯二甲酸酯在指甲油、頭發(fā)噴霧劑、香波、洗滌用品、香水等化妝品中廣泛使用，而人類與化妝品接觸的親密程度僅次于食品，過多使用含有鄰苯二甲酸酯的化妝品，會增加女性患乳腺癌的概率，而且容易引起孕婦流產(chǎn)及胎兒畸形. 因此，化妝品中鄰苯二甲酸酯含量的測定對于保護人體健康具有重要作用. 目前，鄰苯二甲酸酯的檢測方法有氣相色譜法[5]、液相色譜法[6]、氣質(zhì)聯(lián)用法[7]、液質(zhì)聯(lián)用法[8]. 作者通過梯度洗脫將6種鄰苯二甲酸酯有效的分離，結(jié)合DAD光譜進行定性分析，提高了定性分析的準確性，建立了一種快速、靈敏度高、成本較低、準確可靠的檢測方法.

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent1200型，附帶二極管陣列檢測器(美國安捷倫公司)；氣相色譜-質(zhì)譜儀：Agilent 6890N-5973GC/MSD(美國安捷倫公司)；超聲波清洗器：D-78224型(德國Elma公司)；高速離心機：3-30K型(德國Sigma公司)；分析天平：AL204型，(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；超純水儀：Milli-Q型(美國密理博公司)；樣品濾膜：0.45 μm；甲醇：色譜純；乙腈：色譜純；鄰苯二甲酸二甲酯(DMP),鄰苯二甲酸二乙酯(DEP),鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP),鄰苯二甲酸二丁酯(DBP) ,鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP) ,鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)標準品：純度為99.8%(上海安普公司)；實驗用水為超純水.

1.2 標準儲備液的配制

準確稱取鄰苯二甲酸二甲酯(DMP),鄰苯二甲酸二乙酯(DEP),鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)，鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)，鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP) ,鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)各100 mg用甲醇溶解后定容至100 mL棕色容量瓶中，配成標準儲備液，濃度為1.0 g/L，在4 ℃保存，臨用時將標準儲備液用甲醇稀釋成所需濃度的混合標準工作溶液.

1.3 樣品處理

由于鄰苯二甲酸類物質(zhì)無處不在，在實驗過程中盡量避免使用塑料材料制成的器皿，所有的玻璃器皿經(jīng)丙酮清洗后再用色譜甲醇潤洗自然風(fēng)干后使用. 稱取化妝品0.500 g，精確到1 mg，用甲醇定容至25 mL，用旋渦振蕩器振蕩混勻，于超聲波清洗儀中超聲20 min，對于固體、半固體、黏稠樣品，先以10 000 r/min高速離心15 min，上清液經(jīng)注射器過濾(0.45 μm有機型濾膜)，上機測定，水狀的樣品直接過濾，然后上機測定.

1.4 色譜條件

液相色譜條件：色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；進樣量20 μL，柱溫40 ℃；流動相為乙腈-水混合液，流速1.000 mL/min,梯度洗脫程序見表1，后運行時間5 min；檢測波長為224 nm. 光譜存儲范圍190～400 nm.

表1 梯度洗脫程序 Table 1 The process of gradient elution

氣相色譜-質(zhì)譜條件：色譜柱為HP-5MS柱[30 m(長度)×0.25 mm(內(nèi)徑)，0.25 μm(填料顆粒的尺寸)，5% phenyl methyl-siloxane] ；柱溫程序：初始溫度為50 ℃,保持2 min后以40 ℃/min的速率升至210 ℃，然后以30 ℃/min的速率升至280 ℃，保持10 min；進樣口溫度280 ℃；色譜-質(zhì)譜接口溫度280 ℃；載氣：氦氣1 mL/min;電離方式：EI，70 eV;掃描方式：全掃描；進樣方式：分流，分流比5∶1,溶劑延遲4.5 min；進樣量1 μL.

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相的選擇

本實驗采用甲醇-水和乙腈-水進行等度洗脫、梯度洗脫對6種鄰苯二甲酸酯進行分離研究，結(jié)果表明：等度洗脫條件下，6種鄰苯二甲酸酯不能達到基線分離，梯度洗脫條件下，甲醇-水，乙腈-水都可以將它們進行基線分離，但是與乙腈-水相比，甲醇-水的分離效果較差，并且分離時間長，因此選擇乙腈-水作為本實驗的流動相進行梯度洗脫.

2.2 檢測器的選擇

化妝品的成分比較復(fù)雜，很多雜質(zhì)在紫外區(qū)都有吸收，會產(chǎn)生很多干擾的色譜峰，如果只從色譜峰的保留時間來定性，可能產(chǎn)生錯誤的判斷，而鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)的紫外吸收光譜的特征比較明顯，選擇二極管陣列檢測器，結(jié)合保留時間和光譜來進行定性判斷，可提高定性分析的準確度. 為了進一步確認光譜定性的可靠性，用GC-MS進行確認. 結(jié)果表明，當(dāng)樣品在190～400 nm范圍內(nèi)的光譜與標準物質(zhì)吻合時，樣品的特征離子及其豐度比與標準物質(zhì)是符合的；相反，當(dāng)樣品的光譜與標準物質(zhì)的光譜不匹配時，在GC-MS上相應(yīng)的保留時間沒有該物質(zhì)的色譜峰，或者與標準物質(zhì)的特征離子不符合. 因此本實驗選擇二極管陣列檢測器進行測定.

2.3 檢測波長的選擇

6種鄰苯二甲酸酯在224 nm和280 nm處都有紫外吸收的峰值，但224 nm條件下的檢出限要明顯低于280 nm檢出限，因此本實驗選擇224 nm作為檢測波長.

2.4 色譜柱的選擇

色譜柱是液相色譜進行分離的關(guān)鍵部分，它直接關(guān)系到樣品分離效果和測定結(jié)果的準確性. 為了使6種鄰苯二甲酸酯得到很好的分離，本實驗用Agilent的Eclipse XDB-C18，Eclipse XDB-C8，300SB-C18，ZORBAX-C8等色譜柱進行試驗，結(jié)果只有Eclipse XDB-C18在乙腈-水梯度洗脫下，可以將6種目標物質(zhì)完全分離，并且能夠得到較好的色譜峰，在1.4的洗脫條件下，6種目標物與其他的干擾物質(zhì)也得到了有效的分離，圖1、圖2、圖3分別為標準物質(zhì)、樣品和樣品加標的色譜圖.

圖1 DMP,DEP,BBP,DBP,DEHP和DOP標準物質(zhì)的色譜圖Fig.1 The chromatograms of DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP and DOP

圖2 樣品的色譜圖Fig.2 The chromatograms of a sample

圖3 加入DMP,DEP,BBP,DBP,DEHP 和 DOP標準物質(zhì)的色譜圖Fig.3 The chromatograms of a sample with addition of DMP, DEP, BBP, DBP,DEHP and DOP

2.5 線性方程和精密度

利用DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP的標準儲備液配制成的混合標準工作溶液，濃度依次為20,10，5，2，1 mg/L，按照1.4的洗脫條件進行測定，分別以DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP的濃度(x)對相應(yīng)的峰面積(y)進行線性回歸，線性方程依次為：y=45.8x+0.489,y=40.6x+0.758,y=34.7x+0.182,y=34.1x+6.70，y=24.8x+2.72,y=24.3x+0.305. 相關(guān)系數(shù)依次為1.000 0，1.000 0，0.999 99，0.999 88，0.999 96，0.999 91. 對DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP濃度為5 mg/L的混合標準溶液連續(xù)進樣6次，測定結(jié)果見表2.

經(jīng)計算DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP的RSD分別為0.97%，0.64%, 0.11%,0.82%, 1.13%, 0.81%.

表2精密度試驗結(jié)果

Table 2 Precision experimen mg/L

2.6 回收率和檢出限

對6個化妝品樣品在2.0 mg/L，5.0 mg/L水平進行加標回收試驗，按1.3的洗脫方法進行樣品處理，在1.4的洗脫條件下測定，經(jīng)計算DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP的回收率在90%～98%. 在1.3,1.4的洗脫條件下，以3倍信噪比計算DMP, DEP, BBP, DBP, DEHP, DOP的檢出限分別為10.0,4.0,10.0,10.0, 5.0,7.5 mg/kg.

2.7 實際樣品測定

在市場隨機購買洗手液、身體香露、香水、甲油、指甲油、護發(fā)素、洗發(fā)水、潤膚乳、發(fā)用香水等化妝品，用該方法進行測定，結(jié)果見表3.

表3化妝品中6種鄰苯二甲酸酯測定結(jié)果

Table 3 The analytical result of six phthalates in cosmetics μg/g

3 結(jié)論

鄰苯二甲酸酯作為一類內(nèi)分泌干擾物，由于其較高的毒性，致畸和致癌作用，在國際上引起了廣泛的關(guān)注，而化妝品與人類的接觸非常密切，建立一種高效、快速、準確、廉價的測定方法對保護消費者免受鄰苯二甲酸酯的毒害有重要的作用，本文的研究為化妝品中鄰苯二甲酸酯的測定提供了重要的參考依據(jù).

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