王愛萍，徐今寧

（河北北方學院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口075000）

金銀花和蒲公英均為常用中藥，前者具有清熱解毒、疏散風熱之功效，后者具清熱解毒、消腫散結、利尿通淋之功效[1]。綠原酸（chlorogenic acid）是二者的主要活性成分，具有顯著的清熱解毒和抗菌消炎作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸還具有利膽、抗菌、降壓、抗氧化、抗突變及抗腫瘤等多種藥理作用[2－3]。綠原酸在醇中具有可溶性，因此，在金銀花和蒲公英的提取工藝過程中，采取醇提法。為保證綠原酸的提取完全，本實驗對醇的濃度、加醇量、回流時間及回流次數通過正交設計進行優(yōu)化，為金銀花和蒲公英中綠原酸的提取制備工藝提供科學依據。

1 儀器與試劑

TU－1901紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；BS210S電子天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753－200413）；金銀花、蒲公英等（購自河北省張家口市張垣飲片有限公司）；實驗用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 正交試驗設計

以綠原酸為指標，因綠原酸在醇中具有可溶性，故確定考察因素為乙醇的濃度、加醇量、回流時間、回流次數，按4因素3水平進行L9（34）正交設計。因素及水平見表1。

表1 因素水平表

2.2 綠原酸的提取

精密稱取金銀花和蒲公英（1∶1）樣品9份，每份10g，按正交試驗設計進行綠原酸的提?。ū?），合并提取液并過濾、回收乙醇、濃縮得濃縮液50mL。取濃縮液10mL于50mL量瓶中，加75%乙醇稀釋至刻度，作為供試液，備用。

2.3 綠原酸的含量測定

2.3.1 溶液的制備與測定波長的選擇 取綠原酸對照品10.0mg于50mL量瓶中，75%乙醇至刻度，作為對照品溶液。以75%乙醇為空白，將對照品溶液在紫外可見分光光度計上進行光譜掃描[4]，測得的最大吸收在327nm處，故選擇檢測波長為327nm。

2.3.2 標準曲線制備 精密吸取綠原酸對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0mL分別置50mL量瓶中，加75%乙醇至刻度，混勻。按分光光度法，在327nm處測定吸光度。以吸光度A為縱坐標，質量濃度C（mg·mL－1）為橫坐標，進行線性回歸，其回歸方程為A＝0.106C＋13.3，r＝0.9991（n＝6）。結果表明，在8～48μg濃度范圍內，濃度與吸收值線性關系良好，見圖1。

2.3.3 樣品測定 取供試品溶液依法在327nm處測定吸光度，代入回歸方程，計算綠原酸含量，結果見表2。

圖1 綠原酸測定的標準曲線

表2 L9（34）正交試驗表及結果

由表2可知，以綠原酸為考察指標時，金銀花和蒲公英中綠原酸提取工藝的影響規(guī)律為A＞D＞C＞B，A因素對提取工藝的影響非常顯著，即乙醇濃度是影響提取工藝最大的因素。

3 討 論

3.1 金銀花、蒲公英常同時用于中草藥及中藥復方制劑，用于抗菌、抗病毒、清熱解毒。其主要活性成分均為綠原酸，目前綠原酸已成為中藥制劑質量控制的主要指標之一。

3.2 正交試驗證實乙醇濃度是影響提取工藝最大的因素。不同濃度的乙醇溶液透過細胞壁和解吸有效物質的能力是不同的，通常75%乙醇溶液解吸效果最好，解吸效果越好，得率越高。故選75%乙醇作為提取溶劑。

3.3 通過正交試驗法對金銀花和蒲公英中綠原酸的提取工藝進行優(yōu)化，正交結果分析后得到最佳因素水平為A1B1C3D2，即75%醇濃度、加醇量為藥材10倍量、回流時間為1.5h、回流次數為2次。

[1]李紅梅，張榕，常東勝.高效液相色譜法測定蒲公英提取物中綠原酸含量[J].藥物分析雜志，2009，29（7）：1230－1232.

[2]沈奇，趙厚民，張衛(wèi)明，等.蒲公英綠原酸提取分離工藝的研究[J].食品科學，2006，27（7）：140－144.

[3]李喜鳳，郝哲，邱天寶.蒲公英中有機酸類成分的提取工藝研究[J].中成藥，2011，33（2）：262－265.

[4]李娜，高曉燕，范強，等.金銀花提取液中綠原酸的快速定量[J].中國中藥雜志，2007，32（4）：312－314.