趙 斌 羅長江 焦作義 石代秀

1.蘭州大學第二醫(yī)院普外科，甘肅蘭州 730000；2.蘭州大學第二醫(yī)院泌尿外科，甘肅蘭州 730000

原發(fā)性肝細胞肝癌（Primary Hepatocellular Carcinoma，PHC）是世界上常見的惡性腫瘤，它具有生長速度快，惡性程度高等特點，發(fā)病率在惡性腫瘤中位居世界第5位,死亡率位居第3位[1]。據(jù)研究[2]表明，近15年來甘肅地區(qū)肝癌死亡率明顯上升。ki-67蛋白，它是一種抗核增殖細胞核蛋白單克隆抗體，也是測定細胞群增長分數(shù)的極好指標[3]。國內(nèi)有報道ki-67蛋白在漢族人群PHC患者中的表達陽性率58.8%[4]，因此，該研究2002—2012年間檢測了ki-67蛋白在甘肅回族PHC患者的表達情況及特點，探討回族與漢族PHC患者之間的ki-67蛋白表達的差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析在蘭州大學第二醫(yī)院手術(shù)切除的回族、漢族PHC患者的石蠟標本各100例，復習其HE 切片，證實其可用。分別選取癌組織及癌旁組織的石蠟標本，石蠟標本由病理科提供，所有患者臨床資料完整。

1.2 臨床資料

回族100例患者，其中男62例，女38例，平均年齡（50.13±8.32）歲。腫瘤病理分化程度，高分化32例，中分化37例，低分化31例；發(fā)病因素：乙型肝炎68例，丙型肝炎21例，其他11例。漢族100例患者，其中男性59例，女性41例，平均年齡（50.33±8.41）歲。腫瘤病理分化程度，高分化31例，中分化36例，低分化33例；發(fā)病因素：乙型肝炎65例，丙型肝炎23例，其他12例。

1.3 實驗試劑

鼠抗人ki-67 單克隆抗體濃縮型，SP 試劑盒及DAB 顯色試劑盒。

1.4 實驗方法

采用免疫組化SP 法，將石蠟標本作4 μm 厚連續(xù)切片，放于經(jīng)APES 試劑防脫片處理的載玻片上。對染色切片在高壓鍋中進行抗原熱修復，持續(xù)2 min，PBS 沖洗5 min×3次。滴加一抗鼠抗人ki-67 單克隆抗體（1∶50 稀釋），PBS 再次沖洗5 min×3次。滴加二抗及辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，PBS 沖洗5 min×3次。用DAB 工作液充分顯色,蘇木素溶液復染，醫(yī)用酒精脫水，二甲苯透明后封片。已知陽性片作陽性對照,PBS 替代一抗作陰性對照。

1.5 結(jié)果判定

ki-67蛋白表達位于細胞核，陽性細胞的細胞核染色為棕黃色。在高倍鏡（×400）下隨機選取5個視野，每個視野最少計數(shù)200個腫瘤細胞，共計最少1 000個腫瘤細胞，計算其陽性細胞總數(shù)數(shù)即為ki-67 標記指數(shù)，ki-67 指數(shù)>10 記為陽性表達，<10記為陰性表達。

1.6 統(tǒng)計方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0 統(tǒng)計軟件分析，計量資料以（±s）表示，采用t 檢驗，率的比較應用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 ki-67 免疫組化結(jié)果

ki-67蛋白表達于回族、漢族PHC患者肝癌細胞的細胞核（見圖1、圖2、圖3）。

圖1 ki-67蛋白在回族肝癌組織中的陽性表達(Sp×200)

圖2 ki-67蛋白在漢族肝癌組織中的陽性表達(Sp×200)

2.2 ki-67表達在回族PHC患者肝癌組織、癌旁組織之間的差異

回族患者肝癌組織ki-67 指數(shù)為（246.9±101.3），癌旁組織ki-67 指數(shù)為（17.3±10.8）,t值22.21,ki-67蛋白在回族PHC患者肝癌組織表達明顯高于癌旁組織（P<0.05）。

圖3 ki-67蛋白在回族患者肝癌癌旁組織中的陰性表達(Sp×200)

2.3 ki-67表達在回族、漢族PHC患者之間的差異

回族患者ki-67 指數(shù)為（246.9±101.3），漢族患者ki-67 指數(shù)為 （198.3±103.7），t值31.07,ki-67蛋白在回族PHC患者表達明顯高于漢族患者（P<0.05）。

3 討論

ki-67蛋白，又稱細胞增殖相關(guān)蛋白，它存在于細胞周期中的G1、G2、S期及M期，G0期不表達，是評價腫瘤增殖的指標之一。目前，國內(nèi)研究[5-6]發(fā)現(xiàn)，ki-67 作為一種腫瘤增殖因子，它的表達與多種惡性腫瘤有關(guān)，如胃癌、直腸癌、乳癌等，國外研究[7]表明ki-67表達能可靠而迅速地反映惡性腫瘤增殖率，與多種惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預后有關(guān)。

回族人群在我國分布較廣，主要在甘肅、寧夏、青海、陜西等幾個省市，甘肅省是回族人群聚居區(qū)之一，研究回族患者原發(fā)性肝細胞癌的發(fā)病因素，有著重要的臨床意義。該組資料顯示，漢族患者ki67 指數(shù)（198.3±103.7），ki67 在正常肝組織、癌旁組織中均＜10，在漢族人群中呈現(xiàn)出高表達狀態(tài)，這與國內(nèi)報道一致。該組資料中回族患者ki67 指數(shù)（246.9±101.3），明顯高于癌旁組織（P<0.05）,說明ki67蛋白在回族患者肝細胞性肝癌中也呈現(xiàn)出高表達狀態(tài)。同時，ki67表達在回族、漢族患者之間存在差異，回族患者ki67 指數(shù)明顯高于漢族患者（P<0.05）。ki67 在回族患者中的高表達，可能與回族特殊的生活、飲食習慣有關(guān)，甘肅處于西北內(nèi)陸省份，獨特的地理環(huán)境及干旱的氣候，也可能是ki67 在回族患者高表達的因素之一，值得更進一步分子生物學方面的研究。

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[3]Shcolzne T,Gerdes J.The ki-67 Protein:from the known and the unknwon[J].CellPhysiol，2000，182(3):311-312.

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