新化合物氟氧蟲(chóng)酰胺懸浮劑高效液相色譜方法的分析

周紅霞，華 春，唐慧敏

（1.南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，江蘇 南京 211171；2.江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，江蘇 南京 210036）

新化合物氟氧蟲(chóng)酰胺懸浮劑高效液相色譜方法的分析

周紅霞1，華 春1，唐慧敏2

（1.南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，江蘇 南京 211171；2.江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，江蘇 南京 210036）

建立新化合物氟氧蟲(chóng)酰胺的高效液相色譜分析方法，使用紫外檢測(cè)器、C18液相色譜柱，以甲醇和水為流動(dòng)相，在紫外檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm條件下對(duì)其進(jìn)行定性定量分析。結(jié)果表明，方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.27%，回收率在97.1%～105.6%之間，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 8。

氟氧蟲(chóng)酰胺；高效液相色譜；外標(biāo)法

氟氧蟲(chóng)酰胺是浙江省化工研究院有限公司以氯蟲(chóng)苯甲酰胺為先導(dǎo)，通過(guò)新化合物的設(shè)計(jì)、合成及篩選，得到的1 個(gè)高殺蟲(chóng)活性的化合物ZJ3757，化學(xué)名稱為N-［2-（叔丁胺甲?；?4-氯-6-甲基苯基］-1-（3-氯吡啶-2-基）-3-氟甲氧基-1H-吡唑-5-甲酰胺[1-2]。研究表明，氟氧蟲(chóng)酰胺是一種新型殺蟲(chóng)劑，對(duì)小菜蛾、斜紋夜蛾、甜菜夜蛾和菜青蟲(chóng)等害蟲(chóng)具有較高的毒力和田間防效，具有良好的應(yīng)用開(kāi)發(fā)前景[3-5]。有關(guān)氟氧蟲(chóng)酰胺的色譜分析方法，目前尚未見(jiàn)公開(kāi)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法，對(duì)氟氧蟲(chóng)酰胺懸浮劑中的氟氧蟲(chóng)酰胺進(jìn)行分離測(cè)定[6-7]，該方法穩(wěn)定、快速、操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度和精密度都能達(dá)到定量分析的要求，是一種比較實(shí)用的分析方法，為此類殺蟲(chóng)劑的分析管理起到一定的借鑒作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

氟氧蟲(chóng)酰胺標(biāo)準(zhǔn)品（純度98%）、20%氟氧蟲(chóng)酰胺懸浮劑 連云港禾田化工；甲醇、乙腈（均為色譜純）美國(guó)J.T.Bakerg公司；0.1%磷酸水溶液 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Acquity液相色譜儀、二極管陣列檢測(cè)器 美國(guó)Waters公司；過(guò)濾器、超聲波振蕩器 上海滬西分析儀器廠有限公司。

1.3 方法

1.3.1 HPLC條件

圖1 氟氧蟲(chóng)酰胺標(biāo)樣的HPLC色譜圖Fig.1 Liquid chromatogram of ZJ3757 standard

色譜柱：BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）不銹鋼柱；檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm；流動(dòng)相：甲醇-水（7∶3，V/V），采用梯度洗脫方法；流動(dòng)相流量0.2 mL/min；柱溫：室溫（溫差變化不應(yīng)大于2 ℃）；進(jìn)樣體積1 μL；保留時(shí)間3.4 min，無(wú)升溫。如圖1、2所示。

圖2 質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%氟氧蟲(chóng)酰胺懸浮劑的HPLC色譜圖Fig.2 Liquid chromatogram of sample containing 20% ZJ3757

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取氟氧蟲(chóng)酰胺標(biāo)準(zhǔn)品10.6、20.5、29.9、40.1、50.2 mg（精確至0.2 mg）置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，放入超聲波振蕩器中超聲溶解5 min后取出，冷卻至室溫，用甲醇定容，搖勻。

1.3.3 試樣溶液的配制

稱取質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%氟氧蟲(chóng)酰胺懸浮劑，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，放入超聲波振蕩器中超聲溶解5 min。取出，冷卻至室溫后，用甲醇定容，搖勻。再用濾膜孔徑為0.25 μm的過(guò)濾器過(guò)濾（表1）。

表1 質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%氟氧蟲(chóng)酰胺懸浮劑樣品稱樣量Table1 Sampling of 20 ZJ3757

1.3.4 HPLC測(cè)定

在上述色譜操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針?lè)跸x(chóng)酰胺峰面積相對(duì)變化小于1.0%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液、試樣溶液的順序進(jìn)樣分析[6]。

1.4 計(jì)算

將測(cè)得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針的標(biāo)樣溶液中的氟氧蟲(chóng)酰胺的峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中氟氧蟲(chóng)酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)按公式（1）計(jì)算。

式中：ω為氟氧蟲(chóng)酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%；A1為標(biāo)樣溶液中氟氧蟲(chóng)酰胺峰面積的平均值；A2為試樣溶液中氟氧蟲(chóng)酰胺峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量/mg；m2為試樣的質(zhì)量/mg；C為標(biāo)樣中氟氧蟲(chóng)酰胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

將某一質(zhì)量濃度的氟氧蟲(chóng)酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行色譜分析，利用光電二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行掃描。由圖3可知，甲醇和乙腈在波長(zhǎng)210 nm以下均有吸收，會(huì)造成一定的干擾，因此選擇波長(zhǎng)210～400 nm處的吸收波長(zhǎng)進(jìn)行分析。在波長(zhǎng)210～240 nm處氟氧蟲(chóng)酰胺吸收波長(zhǎng)下降幅度劇烈，在這一波長(zhǎng)段選點(diǎn)會(huì)造成吸收不穩(wěn)定，影響實(shí)驗(yàn)效果[7]。波長(zhǎng)275 nm以后吸收太小，不適宜選擇。因而經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)，選擇波長(zhǎng)250 nm作為相對(duì)最大吸收波長(zhǎng)，各種雜質(zhì)成分不影響主成分測(cè)定，為本方法最佳吸收波長(zhǎng)。

圖3 氟氧蟲(chóng)酰胺紫外吸收光譜圖Fig.3 UV absorption spectrum of ZJ3757

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

氟氧蟲(chóng)酰胺為懸浮劑，除原藥成分外還含有較多的雜質(zhì)成分，為混配農(nóng)藥[8]。為確保分離的效果，分別用乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸水、甲醇-水按不同體積比做了多個(gè)流動(dòng)相配比實(shí)驗(yàn)。再根據(jù)峰形、保留時(shí)間等來(lái)確定合適的流動(dòng)相及流動(dòng)相配比。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)用甲醇作為流動(dòng)相時(shí)，拖尾現(xiàn)象得到一定的改善，各組分能得到較為理想的分離，且基線平穩(wěn)，峰形對(duì)稱，見(jiàn)圖4。

圖4 氟氧蟲(chóng)酰胺紫外吸收光譜圖（250 nm）Fig.4 Liquid chromatogram of ZJ3757 (250 nm) using a mobile phase consisting of methanol and water

甲醇雖然能得到較好的分離效果，但實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)壓力不穩(wěn)定，從而影響了數(shù)據(jù)的重復(fù)性。因而采取了梯度洗脫的方法。梯度洗脫是流動(dòng)相中含有2 種或者2 種以上的不同溶劑，在洗脫過(guò)程中連續(xù)或間斷改變流動(dòng)相的組成。HPLC有等梯度洗脫和梯度洗脫2 種方式[8-9]。本實(shí)驗(yàn)采取梯度洗脫、梯度淋洗技術(shù)，有效地改善了峰形、提高分離度、縮短了分析時(shí)間[8-9]，并且能夠較好地解決壓力不穩(wěn)的問(wèn)題（表2）。

表2 梯度洗脫表Table2 Gradient elution program

2.2 分析方法的精密度

將同一產(chǎn)品，按上述方法連續(xù)平行的測(cè)定5 次，測(cè)得結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)，氟氧蟲(chóng)酰胺的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）為0.27%（表3）。根據(jù)協(xié)同國(guó)際農(nóng)藥分析會(huì)（Collaborative International Pesticides Analytical Council，CIPAC）對(duì)方法的精密度建議，重復(fù)性數(shù)據(jù)結(jié)果確認(rèn)應(yīng)以修改的Horwitz公式（2）為依據(jù)：

式中：C為樣品中的分析質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%；RSDr為實(shí)驗(yàn)室間的變異系數(shù)（CV）。

從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)看，本方法滿足CIPAC對(duì)方法精密度要求[10-11]。

表3 分析方法精密度測(cè)量結(jié)果Table3 Precision of the developed method

2.3 線性相關(guān)性

圖5 氟氧蟲(chóng)酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 Standard curve of ZJ3757

稱取氟氧蟲(chóng)酰胺標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.1 mg）10.6、20.5、29.9、40.1、50.2 mg分別于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度線，搖勻，配制成5 個(gè)系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析。以峰面積Y對(duì)進(jìn)樣量X進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程。氟氧蟲(chóng)酰胺為Y=978.12X＋61.38，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8（圖5）。結(jié)果表明，該方法測(cè)定氟氧蟲(chóng)酰胺在測(cè)定范圍內(nèi)線性相關(guān)性很好。

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度

稱取標(biāo)樣9.5、9.7、10.8、10.0、10.2 mg置于50 mL容量瓶中，稱取樣品45.5、54.0、52.4、50.4、56.8 mg于上述標(biāo)樣容量瓶中，用甲醇定容至刻度線，用超聲波振蕩器振蕩5 min或搖勻，按上述方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得氟氧蟲(chóng)酰胺的平均回收率為99.62%。滿足CIPAC對(duì)方法的準(zhǔn)確度要求，即有效成分含量大于10%，平均回收率在97.1%～105.6%范圍內(nèi)[10-11]。

表4 氟氧蟲(chóng)酰胺回收率的測(cè)定結(jié)果Table4 Recoveries of ZJ3757

2.5 檢出限

圖6 氟氧蟲(chóng)酰胺信噪比Fig.6 Signal/noise ratio of ZJ3757

檢出限按公式（3）計(jì)算，檢出限為4.21×10－4mg/mL。

式中：C為標(biāo)樣溶液中氟氧蟲(chóng)酰胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%；RSN為儀器信噪比；D為氟氧蟲(chóng)酰胺檢出限。

3 結(jié) 論

綜上所述，通過(guò)對(duì)HPLC分析條件的選擇與優(yōu)化，用本方法測(cè)定20%氟氧蟲(chóng)酰胺懸浮劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，其有效成分與雜質(zhì)能有效分離，其準(zhǔn)確度和精密度也能滿足要求，線性關(guān)系良好，操作穩(wěn)定易行，同時(shí)最低檢出限也能滿足檢測(cè)要求，是此種懸浮制劑較為理想的分析方法。

參考文獻(xiàn)：

[1] 竇花妮, 陳杰, 鄭昀紅, 等. 一種含一氟甲氧基吡唑的鄰甲酰氨基苯類化合物其合成方法及應(yīng)用: 中國(guó), 101967139A[P]. 2011-02-09.

[2] 許勇華, 胡冬松, 袁靜, 等. 20%ZJ3757懸浮劑的研制[J]. 農(nóng)藥, 2012, 51(2): 100-101.

[3] 袁靜, 陳杰, 邢佳華, 等. 新化合物氟氧蟲(chóng)酰胺對(duì)蔬菜鱗翅目害蟲(chóng)的毒力及田間防治效果[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 14(5): 510-514.

[4] BASSI A, ALBER R. Chlorantraniliprole: a novel anthranilicdiamide insecticide[C]∥IAPPS. X V I International PlantProtection Congress. Glasgrow. UK: BCPC, 2007: 52-59.

[5] LAHM G P, SELBY T P, FREUDENBERGER J H, et al. Insecticidal anthranilic diamides: a new class of potentryanodinereceptor activators[J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2005, 15(22): 4898-4906.

[6] 武中平, 高巍, 顏春榮, 等. 氟蟲(chóng)腈高效液相色譜分析方法的研究[J].現(xiàn)代農(nóng)藥, 2006, 5(2): 21-23.

[7] 鄭楊, 戴海波, 劉運(yùn)鳳, 等. 吡嘧醚菌酯·烯酰嗎啉18.7%水分散粒劑高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)業(yè)科學(xué)與管理, 2008(12): 9-13.

[8] 農(nóng)業(yè)部. NY/T 1680—2009 蔬菜水果中多菌靈等4種苯并咪唑類農(nóng)藥殘留量的測(cè)定: 高效液相色譜法[S].

[9] 農(nóng)業(yè)部. GB 4285—1989 農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn)[S].

[10] 唐慧敏, 楊淑嫻, 徐成辰. 頂空氣相色譜法測(cè)定乙烯利原藥的含量[J].現(xiàn)代農(nóng)藥, 2013, 12(2): 32-34.

[11] 唐慧敏, 丁夏萍. 60%百·甲可濕性粉劑的液相色譜分析[J]. 現(xiàn)代農(nóng)藥, 2003, 2(3): 19-21.

Analysis of Novel Compound ZJ3757 Using High Performance Liquid Chromatography

ZHOU Hong-xia1, HUA Chun1, TANG Hui-min2
(1. School of Biochemical and Environmental Engineering, Nanjing Xiaozhuang University, Nanjing 211171, China; 2. Jiangsu Agro-product Quality Test Center, Nanjing 210036, China)

A high performance liquid chromatography (HPLC) method for the quantitative and qualitative analysis of ZJ3757, an insecticide suspension, was established using a C18column as the stationary phase, methanol and water as the mobile phase, and UV detection at 250 nm. Results showed that the recovery of spiked samples was 97.1%-105.6% with relative standard derivation (RSD) of 0.27%, and the linear correlation coefficient was 0.999 8.

ZJ3757; high performance liquid chromatography (HPLC); external standard method

TS255

A

1002-6630（2014）20-0139-04

10.7506/spkx1002-6630-201420028

2014-01-21

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃（863計(jì)劃）項(xiàng)目（2012AA021701）

周紅霞（1976—），女，副教授，博士，研究方向?yàn)槭称钒踩珯z測(cè)。E-mail：799935685@qq.com