袁學(xué)謙 朱太卿 張莉峰 王慧貞 王煥榮 王愛麗 肖悠美

鄭州人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 鄭州 450003

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Guillain-Barre綜合征患者B淋巴細(xì)胞輔助受體CD21表達(dá)研究

袁學(xué)謙 朱太卿 張莉峰 王慧貞 王煥榮 王愛麗 肖悠美

鄭州人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 鄭州 450003

目的 本研究通過檢測Guillain-Barre綜合征(GBS)患者外周血B淋巴細(xì)胞輔助受體CD21的表達(dá)，探討CD21與GBS及其嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。方法 利用流式細(xì)胞術(shù)檢測GBS組(36例)和正常對照組(20例)CD21表達(dá)，按病程將GBS組分為急性期亞組與恢復(fù)期亞組，按病情輕重將GBS組分為輕癥組和重癥組，并分析CD21與疾病病程和嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。結(jié)果 與正常對照組(45.32±8.92)%比較，GBS組(73.48±7.63)%B淋巴細(xì)胞CD21表達(dá)顯著升高, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與恢復(fù)期GBS組(70.15±10.00)%比較，急性期GBS組(77.58±7.39)%B淋巴細(xì)胞CD21表達(dá)無明顯差異 (P>0.05)。與輕癥GBS組(68.40±4.81%)比較，重癥GBS組(75.98±7.90)% B淋巴細(xì)胞CD21無明顯差異 (P>0.05)。結(jié)論 CD21在GBS患者中表達(dá)顯著升高，但與病程和病情嚴(yán)重程度無關(guān)。

CD21；Guillain-Barre綜合征；流式細(xì)細(xì)胞術(shù)

Guillian-Barre綜合征(GBS)是由細(xì)菌感染等因素誘發(fā)，細(xì)胞免疫及體液免疫共同作用的以周圍神經(jīng)損害為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病。研究表明異常活化的B淋巴細(xì)胞可能在GBS發(fā)病中起關(guān)鍵作用，最直接的證據(jù)就是在患者或者動物模型的血清內(nèi)均可檢測到多種自身抗體。關(guān)于B淋巴細(xì)胞異?；罨臋C(jī)制研究較少，其中B淋巴細(xì)胞表面輔助受體CD21異常表達(dá)可能與之有關(guān)。研究[1-2]發(fā)現(xiàn)，系統(tǒng)性硬化癥患者外周血B淋巴細(xì)CD21表達(dá)顯著增高，但系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血B淋巴細(xì)胞和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者滑膜B細(xì)胞CD21表達(dá)卻顯著降低。本研究通過檢測GBS患者外周血B淋巴細(xì)胞輔助受體CD21表達(dá)水平，來探討B(tài)淋巴細(xì)胞輔助受體CD21在GBS的發(fā)病中所起的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入組患者36例，均符合GBS的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。年齡16～58歲，平均(32.19±11.24)歲，男∶女=1.4∶1，病程1個月～3 a，平均(1±0.2)a。急性期組(發(fā)病至癥狀和體征達(dá)到高峰,2～4周)21例，年齡26～58歲，平均(27.42±12.39)歲，病程10 d～4周，平均(2±0.4)周；恢復(fù)期組(約發(fā)病4周后癥狀和體征未再加重,即為恢復(fù)期) 15例，年齡16～55歲，平均(35.24±10.31)歲，病程4周～1.5 a，平均(1±0.6)a；男∶女=1.2∶1。病情嚴(yán)重程度評分按1978年Hughs標(biāo)準(zhǔn)評估,輕型組(Hughs評分1～3分)23例, 重型(Hughs評分4～5分)13例。Hughes評分標(biāo)準(zhǔn)：6級：死亡；5級：需呼吸機(jī)輔助呼吸；4級：臥床不能不行；3級：需幫助能行5 m以上；2級：不需幫助能行5 m以上；1級：癥狀與體征很輕；0級正常。(2)正常對照組：同期我院健康體檢者20例，男12例，女8例，年齡22～59歲，平均(30.31±10.23)歲。各項體檢指標(biāo)正常，無自身免疫性疾病。

1.2 方法 CD21的檢測：利用淋巴細(xì)胞分離液將肘靜脈血分離出單個核細(xì)胞。顯微鏡下計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為105～106個/mL。將細(xì)胞液分成4份，1份為空白對照，1份加入FITC 標(biāo)記抗人CD20抗體，1份加入PE標(biāo)記抗人CD21抗體，用于調(diào)整流式細(xì)胞儀參數(shù)，1份加入FITC標(biāo)記抗人CD20抗體(作為B淋巴細(xì)胞標(biāo)記)，PE標(biāo)記抗人CD21抗體作為檢測標(biāo)本。4℃冰箱避光孵育30 min后上機(jī)。用CelQuestPlot軟件程序(美國BD公司)分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 GBS組與正常對照組外周血B淋巴細(xì)胞CD21表達(dá)比較 GBS組(73.48±7.63)%，NC組(45.32±8.92)%， 與正常對照組比較， CD21表達(dá)顯著升高(P<0.01)。

2.2 急性期組與恢復(fù)期組患者外周血B淋巴細(xì)胞CD21表達(dá)比較 急性期(77.58±7.39)%，恢復(fù)期(70.15±10.00)%；與恢復(fù)期組比較，急性期組CD21表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P>0.05)。

2.3 重癥與輕癥患者外周血B淋巴細(xì)胞CD21表達(dá)比較 輕癥(68.40±4.81)% ，重癥(75.98±7.90)%；與輕癥組比較，重癥組患者CD21表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P>0.05)。

3 討論

許多自身免疫性疾病均可檢測到異?；罨腂淋巴細(xì)胞及其分泌的自身抗體[4-5]。目前利用抗CD20單克隆抗體(利妥昔單抗)清除特異性B淋巴細(xì)胞的方法有效治療許多自身免疫性疾病。B淋巴細(xì)胞的作用再次凸現(xiàn)，但關(guān)于B淋巴細(xì)胞異?；罨瘷C(jī)制的研究較少。

B淋巴細(xì)胞異?；罨cB細(xì)胞抗原受體(BCR)傳導(dǎo)的信號密切相關(guān)，而BCR傳導(dǎo)信號的強(qiáng)弱受到B淋巴細(xì)胞表面許多輔助受體的調(diào)控。BCR與Igα、Igβ均表達(dá)于成熟B淋巴細(xì)胞表面，抗原與BCR結(jié)合后，抗原刺激信號通過Igα、Igβ向下游傳遞。該信號受到B淋巴細(xì)胞表面許多輔助受體的調(diào)控，特別是CD19、CD21的調(diào)控。當(dāng)抗原濃度較低時，CD19通過CD21-C3d復(fù)合體連接于BCR上，抗原一方面可以與BCR結(jié)合，另一方面與CD21-C3d復(fù)合體相連，形成B淋巴細(xì)胞的雙重抗原識別。這種雙重抗原識別模式為B淋巴細(xì)胞的活化提供了最大程度的刺激。CD21的主要作用是通過交聯(lián)抗原特異的BCR到CD21/CD19信號復(fù)合物，降低抗原激活B淋巴細(xì)胞的閾值。因此，若CD21表達(dá)異?？赡軙?dǎo)致B淋巴細(xì)胞異?；罨?。

GBS是由細(xì)胞免疫及體液免疫共同作用的周圍神經(jīng)脫髓鞘性自身免疫性疾病。B淋巴細(xì)胞異?；罨徽J(rèn)為是該病的主要發(fā)病機(jī)制,最直接的證據(jù)就是在GBS患者血清中檢測到多重特異性的自身抗體[6]。

研究發(fā)現(xiàn)CD21缺陷小鼠導(dǎo)致CD5+B1細(xì)胞亞群顯著降低，IgM依賴的抗體明顯缺乏，這表明CD21在B淋巴細(xì)胞活化中起重要作用[8]。 研究發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血B淋巴細(xì)胞和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者滑膜B細(xì)胞CD21表達(dá)卻顯著降低。Anna Erdeia認(rèn)為在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中，CD21表達(dá)降低可能與疾病發(fā)展過程中的下調(diào)機(jī)制發(fā)揮作用有關(guān)，而不是CD21表達(dá)缺陷導(dǎo)致疾病發(fā)生、發(fā)展[9]。系統(tǒng)性硬化癥患者外周血B淋巴細(xì)CD21表達(dá)顯著增高。與此類似，本研究也發(fā)現(xiàn)GBS患者CD21表達(dá)顯著高于正常對照組，但與病程及病情輕重?zé)o關(guān)，提示CD21表達(dá)的增加可能降低了B淋巴細(xì)胞的活化閾值，導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞異?；罨?，從而促進(jìn)GBS的發(fā)生、發(fā)展。不同的自身免疫性疾病CD21表達(dá)的不同，提示CD21在不同自身免疫性疾病所起的作用不同。關(guān)于CD21在自身免疫性疾病中的作用有待進(jìn)一步研究。

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(收稿2013-08-27)

Expression of co-receptor CD21 on peripheral B lymphocytes in patients with Guillian-Barre syndrome

YuanXueqian，ZhuTaiqing，ZhangLifeng，WangHuizhen，WangHuanrong,WangAili,XiaoYoumei

DepartmentofNeurology,thePeople'sHospitalofZhengzhou,Zhengzhou450003,China

Objective To explore the corelation between the expression of CD21 and the severity of GBS by detection of CD21 of B lymphocyte co-receptor in peripheral blood mononuclear cells(PBMNCs) of patients with GBS.Methods GBS group(36 cases)and healthy controls (HC) group(20 cases) were investigated. The expression of CD21 on peirpheral B lymphocytes were examined by flow cytometry. According to course of disease,GBS group was divided into acute subgroup and recovery subgroup. According to the severity of disease，GBS group was divided into mild group and severe group, Furthermore, the corelation between the expression of CD21 and the course and severity of the disease were analyzed.Results Compared with HC group(45.32+8.92) %, the CD21 increased significantly in GBS group (73.48+7.63%)(P<0.01).Compared with recovery subgroup(70.15+10.00)%, the CD21 in the acute subgroup(77.58+7.39)% has no significant differences(P>0.05). Compared with mild group)(68.40+4.81)%, the CD21 in severe group(75.98+7.90)% had no significant differences(P>0.05).Conclusion CD21 expression in GBS significantly increases, but has no correlaiton with the the course and severity of the disease.

CD21;Guillain-Barre syndrome;Flow cytometry

R745

A

1673-5110(2014)01-0037-02