長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸在心臟發(fā)育及心血管疾病中的作用研究進(jìn)展*

劉崗綜述，黃曉紅審校

長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸在心臟發(fā)育及心血管疾病中的作用研究進(jìn)展*

劉崗綜述，黃曉紅審校

長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸（long noncoding RNA, lncRNA）是一類(lèi)長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的非編碼RNA。研究表明lncRNA能以RNA的形式在多種層面上（表觀(guān)遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平）調(diào)控基因的表達(dá)，參與了細(xì)胞凋亡、增殖，發(fā)育等重要生物學(xué)過(guò)程。近年來(lái)，lncRNA在心血管疾病中的作用獲得關(guān)注?，F(xiàn)將lncRNA在心臟發(fā)育及心血管疾病中的作用作一綜述。

長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸；心臟發(fā)育；心血管疾病

長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸（long nocoding RNA, lncRNA）是一類(lèi)轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)核苷酸的RNA分子， 并不具有編碼蛋白的能力，起初被認(rèn)為是基因轉(zhuǎn)錄的“噪音”[1]。然而，近年的研究表明，lncRNA能以RNA的形式在多種層面上（表觀(guān)遺傳、轉(zhuǎn)錄以及轉(zhuǎn)錄后水平）調(diào)控基因的表達(dá)，參與了劑量補(bǔ)償效應(yīng)、基因組印記、細(xì)胞發(fā)育分化等重要生物學(xué)過(guò)程。目前越來(lái)越多的研究揭示了lncRNA在心臟發(fā)育和心血管疾病中發(fā)揮了重要作用，本文就對(duì)lncRNA的功能以及在心臟發(fā)育和心血管疾病中的作用作一綜述。

1 長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸的功能

1. 1長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸與表觀(guān)遺傳調(diào)控

基因組印記以及劑量補(bǔ)償效應(yīng)是表觀(guān)遺傳學(xué)的兩個(gè)重要內(nèi)容。哺乳動(dòng)物為二倍體生物，每個(gè)基因都是雙拷貝，一些基因的表達(dá)取決于來(lái)自父本還是母本，這種現(xiàn)象稱(chēng)為基因組印記，而劑量補(bǔ)償效應(yīng)表現(xiàn)為雌性個(gè)體細(xì)胞同型配子(XX) 中1 條染色體失活，其上等位基因完全沉默。研究證明lncRNA可與染色質(zhì)修飾復(fù)合物結(jié)合引起特異性的組蛋白修飾模式，激活或抑制轉(zhuǎn)錄，在基因組印記和劑量補(bǔ)償效應(yīng)中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。例如在胰島素樣生長(zhǎng)因子-2受體印記區(qū)，由父方印記控制區(qū)轉(zhuǎn)錄而來(lái)的lncRNA Airn可與組蛋白修飾酶G9a結(jié)合，通過(guò)順式作用關(guān)閉2個(gè)父源性印記基因—Slc22a2和Slc22a3的表達(dá)[2]。X 染色體失活特異轉(zhuǎn)錄因子（Xist）是另一種被人們所熟知的lncRNA，它在X染色體失活中具有重要作用。在雌性哺乳動(dòng)物中，X失活中心是控制其中一條X染色體沉默的重要區(qū)域。Xist基因編碼一種稱(chēng)為重復(fù)A的lncRNA，它可與多梳抑制復(fù)合體2（PRC2）結(jié)合形成復(fù)合體，并移動(dòng)至X失活中心區(qū)，然后大量激活Xist的轉(zhuǎn)錄[3]。隨著Xist與轉(zhuǎn)錄因子YY1結(jié)合并定位覆蓋在X染色體上，引起廣泛的組蛋白被甲基化，最終導(dǎo)致X染色體失活[4]。

1. 2長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸與轉(zhuǎn)錄調(diào)控

lncRNA能夠通過(guò)多種機(jī)制在轉(zhuǎn)錄水平實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控，表現(xiàn)如下：① lncRNA的轉(zhuǎn)錄能夠干擾臨近基因的表達(dá)。例如，酵母的SER3基因會(huì)受到其上游lncRNA SRG1的轉(zhuǎn)錄的干擾[5]； ② lncRNA能夠通過(guò)封阻啟動(dòng)子區(qū)域來(lái)干擾基因的表達(dá)。例如，二氫葉酸還原酶基因上游的一個(gè)lncRNA能夠和其啟動(dòng)子區(qū)域形成RNADNA3螺旋結(jié)構(gòu)，阻止轉(zhuǎn)錄因子TFIID的結(jié)合，從而抑制二氫葉酸還原酶的表達(dá)[6]；③lncRNA能夠與RNA結(jié)合蛋白作用，并將其定位到基因啟動(dòng)子區(qū)從而調(diào)控基因的表達(dá)。例如，細(xì)胞周期蛋白D1啟動(dòng)子上游一個(gè)lncRNA能夠調(diào)節(jié)RNA結(jié)合蛋白TLs的活性，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)[7]；④ lncRNA還能夠調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性，例如lncRNA Evf2能夠與轉(zhuǎn)錄因子Dlx2形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合體從而激活Dlx6的表達(dá)[8]。

1. 3長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控

lncRNA通過(guò)與mRNA形成雙鏈復(fù)合物，以掩蓋mRNA的主要順式作用元件，從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)。例如，轉(zhuǎn)錄因子Zeb2的表達(dá)依賴(lài)于內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)的剪切[9]，后者包含有一個(gè)內(nèi)含子的5’端剪切位點(diǎn)，lncRNA Zeb2能夠和該內(nèi)含子剪切位點(diǎn)形成雙鏈，從而抑制該內(nèi)含子的剪切，提高Zeb2 蛋白產(chǎn)量。

2 長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸與心臟發(fā)育及心血管疾病

2. 1長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸與心臟發(fā)育

非編碼RNA Bvht是長(zhǎng)度為590個(gè)核苷酸的lncRNA，其基因含3個(gè)外顯子，保守性較差。研究發(fā)現(xiàn)[10]Bvht在胚胎干細(xì)胞中就已開(kāi)始表達(dá)，而在成年小鼠心臟中也觀(guān)察到Bvht的大量存在，提示Bvht可能參與了心肌細(xì)胞分化

過(guò)程。隨后證實(shí)在胚胎干細(xì)胞中敲除Bvht后, 其分化為具有搏動(dòng)能力的心肌細(xì)胞數(shù)量明顯減少，并且心肌細(xì)胞標(biāo)記物—肌鈣蛋白T水平亦明顯降低，而B(niǎo)vht的缺失并不影響向其它組織分化的能力，表明Bvht能特異性地調(diào)控胚胎干細(xì)胞定向分化為心肌細(xì)胞。其機(jī)制是Bvht可以上調(diào)一些在心肌分化中起關(guān)鍵作用的轉(zhuǎn)錄因子包括MesP1及其下游調(diào)控因子（Gata4, Gata6, Hand1, Hand2, Tbx2, Nkx2. 5）的表達(dá)水平，從而使胚胎干細(xì)胞具有向心肌細(xì)胞分化的能力。和多數(shù)lncRNA一樣[11]，Bvht可能通過(guò)與染色質(zhì)修飾復(fù)合物結(jié)合發(fā)揮調(diào)控作用。眾多的轉(zhuǎn)錄因子如MesP1都是PRC2的作用靶點(diǎn)[12]，而B(niǎo)vht與PRC2的核心組分—SUZ12蛋白結(jié)合通過(guò)分子誘捕作用消除PRC2對(duì)這些靶基因的組蛋白修飾作用而保持激活狀態(tài)[10]。然而，我們?nèi)孕鑿慕M織水平上進(jìn)一步闡明Bvht在心臟發(fā)育中的調(diào)控作用。

非編碼RNA Fendrr是小鼠側(cè)板中胚層特異表達(dá)的一種lncRNA[13]，其基因含有7個(gè)外顯子。體內(nèi)研究表明敲出小鼠胚胎Fendrr后可引起心臟組織中的心肌細(xì)胞數(shù)量明顯減少，表現(xiàn)為心室壁變薄，心室收縮功能?chē)?yán)重下降，最終導(dǎo)致胚胎死亡。值得注意的是，在Fendrr缺失時(shí)，細(xì)胞凋亡并未增加，提示心肌細(xì)胞數(shù)目的減少可能是由于側(cè)板中胚層向心肌細(xì)胞分化受阻所致。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Fendrr可直接與一些心肌細(xì)胞分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子(Foxf1, Irx3, Pitx2)的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合并招募PRC2蛋白引起組蛋白H3賴(lài)氨酸27三甲基化水平增高而抑制這些基因的表達(dá)。與之相反，F(xiàn)endrr還能通過(guò)其它機(jī)制增加一些轉(zhuǎn)錄因子（Nkx2. 5, Gata6）的啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3賴(lài)氨酸4三甲基化水平增加而激活轉(zhuǎn)錄。因此，我們相信Fendrr在心臟發(fā)育的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中可能起著正負(fù)調(diào)控作用，協(xié)調(diào)（激活或抑制）相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從而使心肌細(xì)胞分化有序進(jìn)行。

2. 2長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸與冠心病

染色體9p21區(qū)域是與冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)的一個(gè)易感位點(diǎn)，在該區(qū)域上，其唯一的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是lncRNA ANRIL。ANRIL 是一個(gè)可變剪接的RNA分子，可產(chǎn)生多個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄本。研究表明[14]9p21區(qū)域上的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms, SNPs）與ANRIL尤其是短的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（EU741058, DQ485454）表達(dá)水平密切相關(guān)。在冠心病患者中[15]，短轉(zhuǎn)錄本還與動(dòng)脈粥樣斑塊負(fù)荷的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。干擾血管平滑肌細(xì)胞中不同的ANRIL轉(zhuǎn)錄本后發(fā)現(xiàn)[16]與調(diào)節(jié)細(xì)胞增生、凋亡、外基質(zhì)重塑以及炎癥反應(yīng)有關(guān)的基因表達(dá)水平是不同的，提示不同的轉(zhuǎn)錄本可能在血管重塑中起著不同的調(diào)控作用。此外，在9p21變異人群還檢測(cè)到一些具有非線(xiàn)性（環(huán)形）結(jié)構(gòu)的ANRIL轉(zhuǎn)錄本[17]。

腫瘤抑制因子P15INK4b和P15INK4a通過(guò)抑制細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶4阻礙血管平滑肌細(xì)胞由G期進(jìn)入S期，從而抑制血管重塑，延遲動(dòng)脈粥樣硬化的形成。攜帶9p21易感位點(diǎn)的人群中，其血管平滑肌細(xì)胞中P15INK4b和P15INK4a的表達(dá)水平明顯下降，且血管重塑明顯[18]，而干擾ANRIL后[19]，兩者表達(dá)水平明顯增加。研究表明ANRIL可通過(guò)表觀(guān)遺傳作用抑制P15INK4b和P15INK4a基因的表達(dá) 。 ANRIL與PRC2蛋白復(fù)合體成分SUZ12蛋白結(jié)合[20]，將其招募至P15INK4b基因區(qū)，抑制P15INK4b的表達(dá)。此外，ANRIL還能與多梳抑制復(fù)合體1中的重要成員-CBX7蛋白結(jié)合[21]，誘導(dǎo)P15INK4a基因沉默。因此，我們推測(cè)在9p21區(qū)域的SNPs可能通過(guò)影響ANRIL的剪接，引起不同轉(zhuǎn)錄本表達(dá)水平及結(jié)構(gòu)的變化，通過(guò)表觀(guān)遺傳作用降低具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的P15INK4b和P15INK4a的表達(dá)，增加對(duì)冠心病的易感性。將來(lái)ANRIL可能成為冠心病的新的基因標(biāo)記物，其不同轉(zhuǎn)錄本在全血中表達(dá)水平的改變，可能有助于疾病嚴(yán)重程度的監(jiān)測(cè)以及預(yù)后評(píng)估。

此外，通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)[22]lncRNA MIAT轉(zhuǎn)錄區(qū)多個(gè)SNPs與心肌梗死易感性相關(guān)。MIAT主要存在于特殊的核小體中，與剪接因子 SF1有高度的親和力，可能在轉(zhuǎn)錄后水平（剪接）調(diào)節(jié)基因表達(dá)[23]，但MIAT在心梗的作用機(jī)制仍不明確。

2. 3長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸與心肌病

擴(kuò)張型心肌病以左心室或雙心室擴(kuò)張并伴收縮功能受損為特征，是致死性心力衰竭的常見(jiàn)病因。在三個(gè)獨(dú)立人群中，通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)研究證實(shí)[24]在轉(zhuǎn)錄非編碼RNA SRA1的基因區(qū)的變異是擴(kuò)張型心肌病的一個(gè)易感位點(diǎn)；在斑馬魚(yú)中，敲除lncRNA SRA1可明顯降低心室的收縮功能，但其在心肌收縮功能的調(diào)節(jié)作用機(jī)制仍需進(jìn)一步闡明。

肥厚性心肌病以室間隔不勻稱(chēng)肥厚為特征，是誘發(fā)惡性心律失常引起心源性猝死的常見(jiàn)病因?；疾★L(fēng)險(xiǎn)與α-和β 肌球蛋白重鏈（MYH6, MYH7）基因變異密切相關(guān)[25]。許多l(xiāng)ncRNA能以天然反義RNA 的形式通過(guò)順式作用調(diào)控基因的表達(dá)，MYH7的表達(dá)即受其反義RNA的調(diào)控[26]。MYH7反義RNA與MYH7基因部分重合并延伸至MYH7啟動(dòng)子區(qū)，通過(guò)轉(zhuǎn)錄干擾這一機(jī)制阻止轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物（RNA聚合酶Ⅱ）的延伸，抑制轉(zhuǎn)錄，而MYH6的表達(dá)不受影響。因此，在病理因素或基因突變下，反義RNA的異常表達(dá)可能導(dǎo)致MYH6和MYH7兩者的表達(dá)水平比例失衡，從而影響心肌的收縮性能，最終導(dǎo)致病理性心肌肥厚。

2. 4長(zhǎng)鏈非編碼核糖核酸與肥胖

肥胖是心血管疾病的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素，了解脂肪細(xì)胞的形成機(jī)制是我們控制肥胖發(fā)生的關(guān)鍵，而lncRNA可能在脂肪細(xì)胞的形成過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。運(yùn)用高通量測(cè)序技術(shù)發(fā)現(xiàn)[27]在前脂肪細(xì)胞與成熟的脂肪細(xì)胞中相比有將近上百個(gè)lncRNA的差異表達(dá)，并且在前脂肪細(xì)胞中高度表達(dá)的一些lncRNA基因啟動(dòng)子區(qū)具有脂肪細(xì)胞形成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子PPARγ的結(jié)合位點(diǎn)。在對(duì)這些lncRNA進(jìn)行干擾后，發(fā)現(xiàn)前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化過(guò)程明顯受阻，表現(xiàn)為脂肪的聚集明顯降低以及成熟標(biāo)記物表達(dá)水平下降。此外，成熟脂肪細(xì)胞與前脂肪細(xì)胞的蛋白表達(dá)譜差異也消失了。以上研究有力地證明了lncRNA可能是脂肪細(xì)胞形成及成熟的關(guān)鍵調(diào)控因子。

3 展望

目前已越來(lái)越清楚的知道lncRNA的許多分子功能，如調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄模式、調(diào)控蛋白活性，作為小RNA的前

體和改變RNA的穩(wěn)定性、維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)和保持其有序性等。但目前面臨的主要問(wèn)題是，lncRNA的分子功能是如何影響有機(jī)體即影響疾病發(fā)生與發(fā)展的，這就涉及到對(duì)lncRNA立體的、多層次的調(diào)控模式的研究，為研究者提出了一個(gè)從未涉足的調(diào)控領(lǐng)域。lncRNA在心血管領(lǐng)域的研究也剛剛開(kāi)始，但其意義的挖掘潛力巨大，隨著其在心臟發(fā)育及心血管疾病中作用機(jī)制的闡明，相信不久將來(lái)會(huì)成為新的靶標(biāo)和治療策略。

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2014-01-07）

(助理編輯：曹洪紅)

國(guó)家自然科學(xué)基金（基金編號(hào)：81241007）

100037 北京市，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 心血管病研究所 阜外心血管病醫(yī)院 特需醫(yī)療診治中心

劉崗 博士研究生 主要從事心血管病研究 Email：liugang327@126. com 通訊作者：黃曉紅 Email：huangxhong12@gmail. com

R541

A

1000-3614（2014）04-0312-03

10. 3969/j. issn. 1000-3614. 2014. 04. 020