杜 麗

哈爾濱市阿城區(qū)人民醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150300

副溶血性弧菌臨床檢驗分析

杜 麗

哈爾濱市阿城區(qū)人民醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150300

目的探討副溶血性弧菌的致病形態(tài)及臨床檢驗方法。方法2010年5月～2012年9月，我院門診收治由副溶血性弧菌引起的食物中毒及急性腹瀉患者20例，經(jīng)過對副溶血性弧菌提取培養(yǎng)后在不同環(huán)境生存時間進行檢驗對比。結(jié)果經(jīng)反復(fù)試驗對比分析副溶血性弧菌對不同水域環(huán)境適應(yīng)性及對酸的耐受性時間，副溶血性弧菌淡水存活時間不到48小時，海水中存活時間超過47天，99%副溶血性弧菌在濃度2%的冰酸酸中將被殺死。結(jié)論通過對副溶血性弧菌的培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)、抵抗力、致病性等方面的檢驗分析能準(zhǔn)確辨別其生存特性。

副溶血性弧菌；培養(yǎng)；檢驗

副溶血性弧菌屬弧菌科、弧菌屬，是一種嗜鹽性細(xì)菌，存在于近海岸的海水、海底沉積物和魚、蝦、貝類等海產(chǎn)品中，通常分2個生物型：副溶血生物型，可污染食品，特別是海產(chǎn)品可引起食物中毒和急性腹瀉；溶藻生物型，不能引起食物中毒，是弧菌屬中最耐鹽的致病菌，2個生物型都可引起局限性感染。

1 臨床資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年5月～2012年9月，我院門診收治的由副溶血性弧菌引起的食物中毒及急性腹瀉患者20例，其中男性患者13例，女性患者7例，年齡8～55歲，平均年齡35歲，臨床主要癥狀為上腹絞痛、腹瀉、大便呈水樣，類似霍亂。經(jīng)臨床微生物檢驗顯示均由食用大量海產(chǎn)品食物中毒所致。

1.2 采集方法與送檢

采集患者大便標(biāo)本l0 g左右，應(yīng)盛于廣口有塞的小瓶中，并注意防止溢出。肛門棉拭采樣時，先將肛門棉拭蘸生理鹽水濕潤后，再徐徐插入肛門3～5 cm，肛拭共采3支，以供檢驗。采集的食品應(yīng)盛于滅菌的廣口瓶中[1]。采集后的標(biāo)本送檢時間為8小時以內(nèi)，將標(biāo)本置入堿性蛋白胨水中直接送檢；超過8小時，則將糞便標(biāo)本或直腸拭子置入Cary-Blais保存培養(yǎng)基中盡快送檢。

1.3 檢驗方法

副溶血性弧菌的檢驗方法主要包括增菌培養(yǎng)和分離培養(yǎng)。（1）增菌培養(yǎng)：取食品5 g左右，加生理鹽水10 ml，在無菌缽中研細(xì)成懸液或取糞便標(biāo)本0.5～1.0 ml，以無菌操作接種到氯化鈉甲紫增菌液中，37℃培養(yǎng)。如有副溶血性弧菌，一般數(shù)小時即出現(xiàn)明顯渾濁，此時即可接種。（2）分離培養(yǎng)包括以下培養(yǎng)方式：①直接分離培養(yǎng)：取檢材或40 g／L的氯化鈉甲紫增菌液，分別接種到SS瓊脂平板和嗜鹽菌選擇性瓊脂平板各一個，37℃18～24小時培養(yǎng)后取出觀察。②增菌后分離培養(yǎng)：取10 ml磨碎的食品樣品，或糞便標(biāo)本，加入100 ml增菌液中，放37℃ 8～16小時增菌后，涂上述平板進仃分離，37℃18～24小時培養(yǎng)后取出觀察[2]。

1.4 統(tǒng)計分析

利用SPSS19.0軟件建立數(shù)據(jù)統(tǒng)計庫，分析采集的臨床數(shù)據(jù)，計量數(shù)據(jù)采用χ2檢驗處理，結(jié)果顯示P＜0.05，統(tǒng)計有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

經(jīng)反復(fù)試驗對比分析副溶血性弧菌的不同菌落（直徑）在不同的培養(yǎng)基中呈現(xiàn)的顏色、形態(tài)，鑒定溶血反應(yīng)出現(xiàn)后的致病株的形態(tài)結(jié)構(gòu)，以及副溶血性弧菌對不同水域環(huán)境適應(yīng)性及對酸的耐受性時間。發(fā)現(xiàn)副溶血性弧菌淡水存活時間不到48小時，海水中存活時間超過47天，99%副溶血性弧菌在濃度2%的冰酸酸中將被殺死。

3 討論

副溶血性弧菌必須在普通營養(yǎng)瓊脂或蛋白胨水中加入適量的食鹽才能生長，最適食鹽濃度為3.5%；副溶血性弧菌在無鹽的培養(yǎng)基中則停止繁殖，而氯化鈉含量超過8%亦不能生長。副溶血性弧菌生長所需的pH范圍為7.0～9.5，最適pH為7.7。最適生長溫度為37℃。副溶血性弧菌需氧性很強，副溶血性弧菌為革蘭陰性，大小為0.7～1 μm的弧狀、桿狀、絲狀等多形態(tài)的細(xì)菌，副溶血性弧菌無莢膜，無芽孢，在不同培養(yǎng)基中生長的細(xì)菌，菌體的形態(tài)可有不同，差異很大，排列一般不規(guī)則，多數(shù)是散在，偶或有成對的排列。副溶血性弧菌在不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成分析如下：（1）副溶血性弧菌選擇性培養(yǎng)基：形成直徑1～2.5 mm大小，略隆起、渾濁、無黏性、菌落中心綠色較深。（2）SS瓊脂平板：部分菌株不生長，能生長的菌落直徑1～2 mm，扁平、無色、半透明，有時菌落中央呈一點突起，宛如蠟滴，菌落往往不易挑起，能被挑起的呈黏絲狀，有辛辣味，培養(yǎng)48小時后菌落牢固的黏著于培養(yǎng)基。（3）營養(yǎng)瓊脂：直徑1.5 mm，菌落無色、圓整、隆起、渾濁、無黏性。（4）血瓊脂平板：菌落直徑約2 mm，圓形凸起、濕潤，略帶黃色或無色，某些菌株可形成甲型溶血。經(jīng)血瓊脂培養(yǎng)顯示副溶血性弧菌主要呈卵圓形，一部分兩端濃染并呈環(huán)形，少數(shù)呈球桿狀或桿狀，也有些呈絲狀。副溶血性弧菌在28℃或37%的CO環(huán)境中培養(yǎng)時，菌體中央不染色者較多，副溶血性弧菌抗酸性較弱[3]。將副溶血弧菌接種于兔血瓊脂平板中央成直徑為l cm的涂面，置37℃環(huán)境下培養(yǎng)26～28小時后觀察，如若周圍有完全透明的溶血環(huán)出現(xiàn)，則為陽性。溶血反應(yīng)是鑒定致病株與非致病株的一項重要指標(biāo)。

副溶血性弧菌對酸敏感，在2%冰酸酸或普通食醋中5分鐘死亡。人若食入其污染的食物，可引起食物中毒或急性腸炎，副溶血性弧菌的潛伏期3～24小時，多為l0～l4小時，副溶血性弧菌染病的主要癥狀為上腹絞痛、腹瀉、大便呈水樣，類似霍亂。對患者血清（從1∶5或1∶10開始做連續(xù)倍數(shù)稀釋）做凝集試驗，放置37℃環(huán)境中過夜，次日觀察結(jié)果，陽性者可見有l(wèi)∶20以上的效價，如在1∶40者可疑為陽性結(jié)果；一般陽性結(jié)果的效價為l∶80～1∶160。

綜上所述，通過對副溶血性弧菌培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)、抵抗力、致病性等方面的檢驗分析，能準(zhǔn)確辨別其生存特性。

［1］ 周春景，王?。?1起副溶血性弧菌食物中毒的實驗室檢測與分析[J]． 中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2014 , 8（9）: 250．

［2］ 張倩華． 副溶血性弧菌實驗室檢測研究進展[J]． 吉林醫(yī)學(xué)，2014（25）: 5720-5722．

［3］ 王均華，高海英，王亞平． 1起由副溶血性弧菌引起食物中毒的實驗室檢測報告[J]． 醫(yī)學(xué)信息，2013，26(5): 360．

The Analysis on Clinical Testing of Vibrio Parahaemolyticus

DU Li, Acheng People’s Hospital, Haerbin Heilongjiang 150300, China

ObjectiveThe clinical test and morphology of vibrio parahaemolyticus is to be investigated.MethodsAnalyzed the treatment data selected from 20 cases of patients with food poisoning and acute diarrhea caused by vibrio parahaemolyticus who were treated in hospital from May 2010 to September 2012, tested and compared survival time of vibrio parahaemolyticus in different environments after extraction and nurture.ResultsBy testing consistently the adoption of vibrio parahaemolyticus to different aquatic environments and its tolerance to acid matters, it showed that the alive time of vibrio parahaemolyticus in freshwater was less than 48 hours, while, the alive time in seawater was more than 47 days, and 99 percent of vibrio parahaemolyticus could be killed if blended with 2 percent acid.ConclusionBy testing and analyzing the nurture characteristics, biochemical reactions, resistence, and pathogenicity and other aspects of vibrio parahaemolyticus, it can accurately distinguish its survival features of vibrio parahaemolyticus.

Vibrio parahaemolyticus, Nurture, Test

R440

B

1674-9316（2014）10-0050-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.10.025