慢性乙型肝炎HBV-DNA載量與炎性因子、肝臟 酶學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性研究

周燕飛，龔杰，張曉梅

論著·臨床

慢性乙型肝炎HBV-DNA載量與炎性因子、肝臟 酶學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性研究

周燕飛，龔杰，張曉梅

目的探討慢性乙型肝炎患者血清不同HBV-DNA載量與炎性因子、肝功能酶學(xué)指標(biāo)的關(guān)系。方法對(duì)78例慢性乙型肝炎患者分別用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)血清HBV-DNA載量,并以此分為陰性組(17例)、低載量組(30例)、中載量組(19例)、高載量組(12例)4組，比較各組高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、肝功能相關(guān)酶(ALT、AST、GGT)的水平，并探討其相關(guān)性。結(jié)果隨著HBV-DNA載量的增高，TNF-α、IL-6均明顯升高，表現(xiàn)為高載量組>中載量組>低載量組>陰性組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清hs-CRP中載量組、低載量組間水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其余2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組間血清ALT、AST、GGT水平比較，表現(xiàn)為高載量組>中載量組>低載量組>陰性組，組間比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。ALT與TNF-α、IL-6相關(guān)(r=0.68、0.56，P<0.05)；ALT與hs-CRP無相關(guān)性(r=0.23，P>0.05)。結(jié)論炎性因子在乙肝的發(fā)病過程中有重要作用，綜合檢測(cè)血清炎性因子和肝臟酶學(xué)對(duì)了解乙肝體內(nèi)免疫狀態(tài)、臨床診斷和預(yù)后有重要意義。

乙肝病毒DNA；超敏C反應(yīng)蛋白；腫瘤壞死因子α；白介素-6；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；谷氨酸轉(zhuǎn)移酶

乙型病毒性肝炎(HBV)是我國法定乙類傳染病，其發(fā)病率高，流行性廣，嚴(yán)重威脅人類健康。一部分慢性HBV感染可自慢性無癥狀的乙型肝炎攜帶者發(fā)展為慢性乙型肝炎、肝硬化，甚至肝癌[1]。在其發(fā)病過程中，由免疫反應(yīng)介導(dǎo)的炎性損傷始終貫穿其中，細(xì)胞因子的活化、增殖、凋亡發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、谷氨酸轉(zhuǎn)移酶(GGT)水平是反映肝功能損傷程度的主要酶學(xué)指標(biāo)，了解細(xì)胞因子與肝細(xì)胞損傷發(fā)生發(fā)展的關(guān)系有助于對(duì)乙肝的診斷及療效進(jìn)行評(píng)價(jià)。本研究通過檢測(cè)乙肝HBV-DNA載量和炎性因子、肝臟酶學(xué)指標(biāo)水平，探討HBV發(fā)病過程中三者的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2013年1—12月在我院住院治療的78例乙型肝炎患者，均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂“2000年病毒性肝炎防治方案”[2]的診斷標(biāo)準(zhǔn)，所有病例均經(jīng)臨床(病史、癥狀、體征)、實(shí)驗(yàn)室檢查及影像學(xué)檢查(B型超聲或CT)確診，并排除其他類型的病毒性肝炎、自身免疫性肝病、酒精性肝病、代謝性肝病、藥物性肝損害等其他慢性肝病。其中男44例，女34例，年齡20～55歲。按血清HBV-DNA載量分為4組:陰性組(HBV-DNA載量<103copies/ml)17例，其中男8例,女9例，年齡26～49(32±12)歲，病程6～17(12±3)個(gè)月；低載量組(HBV-DNA載量>103～105copies/ml)30例,其中男18例,女12例，年齡30～55(37±7)歲，病程3～55(32±18)個(gè)月；中載量組(HBV-DNA載量>105～107copies/ml)19例,其中男8例,女11例，年齡32～48(40±5)歲，病程15～75(48±36)個(gè)月；高載量組(HBV-DNA載量>107copies/ml)12例,其中男10例,女2例，年齡20～44(34±6)歲，病程1～38(15±9)個(gè)月。

1.2 檢測(cè)方法 所有患者空腹?fàn)顟B(tài)下，采集外周靜脈血10 ml，分離血清4℃保存，2 h內(nèi)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.1 血清HBV-DNA載量檢測(cè)：采用DA7600實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，檢測(cè)儀器及試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，HBV-DNA載量正常參考范圍<103copies/ml。

1.2.2 血清炎性因子檢測(cè)：hs-CRP采用日立7600全自動(dòng)生化儀免疫比濁法進(jìn)行檢測(cè)，試劑由上?？迫A公司提供；TNF-α采用ELISA法，試劑由深圳晶美生物有限公司提供；IL-6采用羅氏E601化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行檢測(cè)，試劑由羅氏公司原裝進(jìn)口提供。

1.2.3 血清肝臟酶學(xué)檢測(cè)：ALT、AST、GGT采用日立7600全自動(dòng)生化儀酶學(xué)法進(jìn)行檢測(cè)，試劑由上?？迫A公司提供，ALT正常參考范圍<40 U/L,AST正常參考范圍<37 U/L,GGT正常參考范圍<58 U/L。

2 結(jié) 果

2.1 不同HBV-DNA載量組血清炎性因子水平比較 隨著HBV-DNA載量的增高，炎性因子TNF-α、IL-6均明顯升高，表現(xiàn)為高載量組>中載量組>低載量組>陰性組，組間水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清hs-CRP在中、低載量組間水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

注：與陰性組比較，aP<0.05；與低載量組比較，bP<0.05；與中載量組比較，cP<0.05

2.2 不同HBV-DNA載量組血清肝臟酶學(xué)指標(biāo)濃度比較 隨著HBV-DNA載量的增高，血清酶含量均明顯升高，各組間血清ALT、AST、GGT水平比較，表現(xiàn)為高載量組>中載量組>低載量組>陰性組，組間水平比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

注：與陰性組比較，aP<0.05：與低載量組比較，bP<0.05；與中載量組比較，cP<0.05

2.3 血清炎性因子與肝臟酶學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性 統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，ALT與TNF-α、IL-6呈正相關(guān)(r=0.68、0.56，P<0.05)，隨著ALT水平的增高，TNF-α和IL-6水平也隨之升高。ALT與hs-CRP無相關(guān)性(r=0.23，P>0.05)。

3 討 論

慢性乙型病毒性肝炎的發(fā)生及發(fā)展機(jī)制尚未完全闡明，除與乙肝病毒變異、宿主性別、年齡和遺傳基因有關(guān)外，還與肝臟內(nèi)炎性活動(dòng)密切相關(guān)[3，4]。目前大量研究認(rèn)為，肝細(xì)胞病變主要取決于機(jī)體的免疫狀態(tài)，而細(xì)胞因子在免疫系統(tǒng)中起著重要的調(diào)控作用[5]。

肝臟作為體內(nèi)重要的消化代謝系統(tǒng)，含有大量肝巨噬細(xì)胞。當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，Kupffer細(xì)胞釋放大量的TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子會(huì)在體內(nèi)激發(fā)一系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng)[6]，TNF-α直接刺激肝星狀細(xì)胞增殖和膠原合成，從而促進(jìn)釋放更多的細(xì)胞因子如TGF-β、PDGF等，形成正反饋的放大作用[7，8]，IL-6在TNF-α刺激后產(chǎn)生，促進(jìn)中性粒細(xì)胞的活化、聚集，引起血小板活化、凝血功能障礙、腎小管壞死、骨骼肌溶解損傷、肝纖維化等，血清中細(xì)胞因子濃度的升高可反映組織損傷程度[9]。CRP是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，能促進(jìn)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的趨化吞噬，促進(jìn)炎性反應(yīng)。但在本研究中，CRP水平變化與乙肝HBV-DNA在中載量組與低載量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與患者均為慢性乙肝，非急性發(fā)展期監(jiān)測(cè)水平有關(guān)。但隨著HBV-DNA載量增高，炎性因子TNF-α、IL-6逐步升高，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明體內(nèi)病毒復(fù)制越嚴(yán)重，免疫炎性因子活動(dòng)程度越高，同時(shí)也會(huì)正反饋導(dǎo)致肝損傷。

肝功能指標(biāo)包括ALT、AST、GGT，當(dāng)肝細(xì)胞受損、肝細(xì)胞膜通透性升高，血清中酶含量增加，是衡量肝細(xì)胞受損程度的常用指標(biāo)[10，11]，綜合分析HBV-DNA水平及肝功能指標(biāo),才能更加客觀和準(zhǔn)確地評(píng)估病情的變化、嚴(yán)重程度[12]。隨著HBV-DNA載量增高，乙肝患者血清酶活性水平也隨之升高，表現(xiàn)為高載量組>中載量組>低載量組>陰性組，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

ALT、TNF-α、IL-6三者相關(guān)性良好，這可能因?yàn)橐腋尾《驹斐筛渭?xì)胞損傷，通透性增加，轉(zhuǎn)氨酶和炎性因子激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)[13]，其血清濃度越高，預(yù)后越嚴(yán)重。這說明炎性因子在乙肝的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中發(fā)揮重要作用, 因此, 在疾病診治中，應(yīng)聯(lián)合相關(guān)炎性因子和肝臟酶學(xué)等指標(biāo)綜合檢測(cè)，對(duì)評(píng)價(jià)預(yù)后及轉(zhuǎn)歸都有較大的實(shí)用價(jià)值，對(duì)這些問題的深入研究將有助于為乙肝治療開辟新的廣闊空間。

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RelationshipbetweendifferentHBV-DNAloadofchronichepatitisBandinflammatoryfactor,liverfunctionenzymes

ZHOUYanfei,GONGJie,ZHANGXiaomei.

DepartmentofInfection,theFifthHospitalofWuhanCity,Wuhan430050,China

ObjectiveTo investigate the relationship between serum in patients with chronic hepatitis B of different HBV-DNA load and inflammatory factor, liver function enzymes.MethodsSeventy-eight cases of chronic hepatitis B patients were

real-time fluorescence quantitative PCR detection of serum HBV-DNA load, and then they were divided into negative group (17 cases), low load group (30 cases), median load group (19 cases), high load group (12 cases). High sensitivity C reactive protein (Hs-CRP), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin 6 (IL-6), liver function enzymes (ALT, AST, GGT) level were compared among the four groups, and to explore the correlation among these factors.ResultsAlong with the increase of HBV-DNA load, TNF-α, IL-6 were significantly increased, revealed as high load group > median load group > low load group > positive group, there was statistically significant difference among these groups (P<0.05). No statistical significance were found within group (P>0.05). There were no significant differences between median and low load group of the levels of serum hs-CRP(P>0.05), the difference between the rest 2 groups was statistically significant(P<0.05). Comparison of serum ALT, AST, GGT levels among these groups, it showed as high load group>median load group>low load group > negative group, there was significant difference among these groups (P<0.05). ALT and TNF-α, IL-6 were positive correlated (r=0.68,r=0.56,P<0.05); there is no correlation between ALT and hs CRP (r=0.23,P>0.05).ConclusionInflammatory cytokines have an important role in the pathogenesis of hepatitis B, comprehensive detection of serum inflammatory cytokines and liver enzymes have significant for understanding the immune status of hepatitis B in vivo, clinical diagnosis and prognosis.

Hepatitis B virus DNA; High sensitivity C reactive protein; Tumor necrosis factor α; Interleukin 6; Alanine aminotransferase; Aspartate aminotransferase; Glutamate transferase

430050 武漢市第五醫(yī)院醫(yī)院感染管理科(周燕飛)，檢驗(yàn)科(龔杰)，感染科(張曉梅)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.08.012

2014-03-25)