曾祥，李巖，裴冬梅

（中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院1.社會服務部；2.消化內(nèi)科，沈陽110004）

DOG1、CD117和Ki67在胃腸道間質(zhì)瘤中的表達及其與臨床病理因素和危險度的相關(guān)性

曾祥1，李巖2，裴冬梅1

（中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院1.社會服務部；2.消化內(nèi)科，沈陽110004）

目的探討DOG1、CD117和Ki67在胃腸道間質(zhì)瘤中表達及其與臨床病理因素的相關(guān)性和危險度的關(guān)系。方法應用免疫組化方法檢測DOG1、CD117和Ki67在66例GIST中表達情況，并對病例進行危險度分級，分析上述免疫組化指標與臨床病理相關(guān)因素和危險度之間的關(guān)系。結(jié)果在66例GIST中，DOG1表達陽性率為93.94%，CD117表達陽性率為65.15%，其中CD117陰性的GIST中DOG1陽性表達率為82.61%。DOG1和CD117陽性表達率與性別、年齡、部位、腫瘤大小、核分裂數(shù)、危險度之間差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。但DOG1表達陽性率高于CD117，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。Ki67增殖指數(shù)＜1%，1%～5%和＞5%的例數(shù)分別為15例、20例、24例。Ki67增殖指數(shù)在GIST中陽性表達率為89.39%，Ki67的陽性表達與性別、年齡、部位之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而與腫瘤大小、核分裂數(shù)及危險度之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），并且Ki67增殖指數(shù)與腫瘤大小、核分裂數(shù)及危險度之間均呈正相關(guān)（r=0.488、r=0.425、r=0.550）。在CD117陽性的GIST中，Ki67陽性表達率高于DOG1陽性的GIST，兩者之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結(jié)論在GIST中，DOG1比CD117有更高的敏感性，Ki67增殖指數(shù)的表達可與腫瘤大小、核分裂數(shù)一起作為判斷危險度及預測預后的重要指標。

胃腸道間質(zhì)瘤；DOG1；CD117；Ki67增殖指數(shù)；危險度

胃腸道間質(zhì)瘤（gastrointestinal stromal tumors，GIST）是最常見的胃腸道間葉源性腫瘤［1］。由Mazur和Clark提出并命名。GIST發(fā)生的中心事件是C-kit和PDGFRa獲得功能性突變［2］。病理診斷主要依靠腫瘤組織中CD117的陽性表達，但近年來在越來越多的GIST中CD117表達陰性，誤診漏診率較高。DOG1基因是最新發(fā)現(xiàn)的GIST特異性標志物［3］，對于CD117陰性的GIST的診斷具有重要意義。而對于GIST的生物學行為評估，宜以危險程度代替良惡性。目前主要依據(jù)是腫瘤大小和核分裂象計數(shù)。本文通過對66例GIST標本進行光鏡觀察及免疫組化檢測，進一步探討GIST中DOG1、CD117和Ki67的表達特征及其危險度分級的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

收集中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院2010年11月至2012年8月間66例資料完整，診斷明確的GIST石蠟標本。其中來源于胃47例，腸道17例，腹腔2例；男性26例，女性40例，平均年齡58.18歲（24～78歲），中位年齡57歲。

1.2 方法

1.2.1 DOG1、CD117和Ki67的表達：所有標本均經(jīng)10%甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚切片，HE染色，光鏡觀察。采用SP法檢測DOG1、CD117和 Ki67的表達情況，用相同SP法檢測的陽性切片做陽性對照，PBS代替一抗為陰性對照，染色步驟和抗體稀釋度均按照說明書進行。

1.2.2 結(jié)果判定：DOG1、CD117染色定位于細胞質(zhì)或細胞膜，為棕色或棕黃色顆粒。每張切片觀測10個高倍鏡視野內(nèi)陽性腫瘤細胞數(shù)；DOG1著色腫瘤細胞數(shù)＞10%為陽性，CD117著色腫瘤細胞數(shù)＞5%為陽性表達，否則為陰性。Ki67表達定位于細胞核，呈棕黃色顆粒。每例切片隨即選擇10個HPF，記數(shù)其中1 000個細胞中的陽性細胞數(shù)，以陽性細胞數(shù)的百分數(shù)表示Ki67增殖指數(shù)。統(tǒng)計陽性細胞數(shù)，取平均值。Ki67染色結(jié)果按增殖指數(shù)＜1%，1%～5%（包括1%和5%），＞5%分為3個等級。

1.2.3 危險度分級：選擇細胞生長最活躍區(qū)，連續(xù)50個HPF（×400）觀察進行核分裂計數(shù)。采用2008年NIH專家組討論的原發(fā)GIST切除后風險分級標準［4］，分為極低度、低度、中度和高度4級（表1）。

表1 原發(fā)GIST切除后風險分級Tab.1 Proposed modification of consensus classification for selecting patients with GIST for adjuvant therapy

1.3 統(tǒng)計學處理

應用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件，采用Pearson χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 DOG1、CD117的表達與臨床病理因素的相關(guān)性

66例GIST中，DOG1陽性（圖1A）62例，陽性率93.94%（62/66）。CD117陽性（圖1B）43例，陽性率65.15%（43/66）。在CD117陰性的GIST中DOG1陽性19例，陽性率為82.61%（19/23）。DOG1比CD117有更高的敏感性，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。但DOG1、CD117的表達與性別、年齡、部位、腫瘤大小、核分裂數(shù)、危險度之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05，表2）。

2.2 Ki67的表達與GIST危險度的相關(guān)性

66例GIST中，Ki67增殖指數(shù)陰性（圖1C），＜1%（圖1D），1%～5%（圖1E）和＞5%（圖1F）的例數(shù)分別為7、15、20、24例。Ki67的陽性表達與性別、年齡、部位均差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。但Ki67的表達與腫瘤大小、核分裂數(shù)及危險度之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01，表1）。并且Ki67增殖指數(shù)與腫瘤大小、核分裂數(shù)及危險度之間均呈正相關(guān)（r=0.488、r=0.425、r=0.550）（圖2A、2B、2C）。

2.3 DOG1、CD117的表達與Ki67的相關(guān)性

DOG1陽性的62例GIST中，Ki67表達的陽性率為91.94%（57/62）。CD117陽性的43例GIST中，Ki67表達的陽性率93.02%（40/43）。CD117陽性的GIST，Ki67的陽性表達率高于DOG1陽性的GIST，兩者之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表2 DOG1、CD117和Ki67在GIST中的表達與臨床病理因素和危險度的相關(guān)性Tab.2 Expression of DOG1，CD117 and Ki67 in GIST and their correlation with clinicopathological features and risk rank

3 討論

GIST是一種胃腸道的間葉源性腫瘤。依據(jù)2008年《中國胃腸道間質(zhì)瘤診斷治療共識》，GIST定義為［5］：GIST是一類特殊的、通常CD117免疫表型陽性的胃腸道最常見的間葉源性腫瘤，組織學上由梭形細胞、上皮樣細胞、偶或多形性細胞排列成束狀或彌漫狀圖像，免疫表型上表達C-Kit基因蛋白產(chǎn)物Kit（CD117），由突變的C-Kit基因或血小板源性生長因子受體（PDGFRA）基因驅(qū)動?，F(xiàn)認為起源于胃腸道的Cajal細胞，占胃腸道腫瘤的1%～4%［6，7］。目前，病理診斷是GIST最主要的診斷方式，其診斷主要依靠病理組織學及免疫組織化學，以CD117陽性表達為診斷標準。

圖1 DOG1、CD117和Ki67在胃腸道間質(zhì)瘤中的免疫組化結(jié)果SP×200Fig.1 Immunohistochemical staining for DOG1，CD117 and Ki67 in GIST SP×200

圖2 Ki67增殖指數(shù)與腫瘤大小、核分裂數(shù)及危險度的相關(guān)性Fig.2 Relationship between Ki67 expression and tumor size，tumor mitotic count and risk rank

DOG1是由人類11q13上的CCND1-EMS1基因座所編碼的8次穿膜蛋白［8］，由West［9］提出的選擇性地高表達于GIST的基因，國外文獻報道在GIST中的表達率可達90%～95%［3～10］，其表達對于上皮樣胃間質(zhì)瘤、PDGFRA突變間質(zhì)瘤、胃腸道外間質(zhì)瘤、轉(zhuǎn)移性間質(zhì)瘤以及兒科間質(zhì)瘤都有較好的敏感性和特異性，且表達不依賴于KIT或PDGFRA基因的突變狀態(tài)［11］。Miettinen等［10］對1 168例不同部位、不同病理分型的GIST進行免疫組化研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DOG1陽性率高達94.4%，說明DOG1有較高的敏感性。本研究66例GIST中，DOG1陽性表達率93.94%，CD117陽性表達率65.15%。DOG1的陽性表達率明顯高于CD117，兩者之間差異有統(tǒng)計學意（P＜0.01）。可見DOG1與CD117聯(lián)合診斷可以提高GIST的診斷率，并減少誤診漏診率。

關(guān)于GIST的良惡性，目前比較公認的是所有GIST均應被視為具有惡性潛能的腫瘤，但其惡性程度分級尚沒有一個統(tǒng)一標準，大多認為與腫瘤大小及核分裂數(shù)有關(guān)，既往采用較公認的2002版美國國立衛(wèi)生署（NIH）的危險度分級［12］。2008年NIH專家組重新討論了GIST的分級標準，并在2008版的《中國胃腸道間質(zhì)瘤病理共識意見》中將原發(fā)腫瘤部位和腫瘤破裂也作為預后的評估標準。將GIST按照危險程度分為極低度、低度、中度、高度共4級。本研究分析了DOG1、CD117的表達情況與GIST危險度分級之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DOG1和CD117的陽性表達率在不同危險度之間均沒有顯著差異，故不能作為判斷GIST危險度的指標。

Ki67增殖指數(shù)是與增殖細胞相關(guān)的核抗原，僅分布于核內(nèi)，其功能被認為與細胞的有絲分裂密切相關(guān)，一種反映細胞分裂和增值活性的標志物，已在臨床廣泛使用。本研究顯示Ki67在極低危險度、低危險度、中危險度、高危險度的GIST中表達的陽性率分別為62.50%、90.91%、93.33%、95.24%，Ki67的表達在極低、低危險度與中、高危險度組組有顯著性差異（P＜0.01），并且Ki67增值指數(shù)陽性表達率越高，危險度也越高，兩者間呈正相關(guān)，提示Ki67增值指數(shù)可能是判斷危險度和預測預后的有效指標。

綜上，DOG1可作為診斷GIST或鑒別非GIST的一個敏感的重要標記物，對于CD117陰性的病例，建議聯(lián)合檢測DOG1，使病理學診斷更客觀和完整，因此DOG1的檢測更值得在GIST的診斷和鑒別診斷中推廣。對于Ki67增殖指數(shù)臨床病理中檢測方便、易行，有助于對GIST預后的判斷，可與腫瘤大小及核分裂數(shù)一起作為臨床判定GIST危險度及預后的重要指標。

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（編輯 裘孝琦）

Expression of DOG1，CD117 and Ki67 in GastrointestinalStromalTumorsand Their Correlation with ClinicopathologicalFeaturesand Risk Rank ofGISTs

ZENG Xiang1，LIYan2，PEIDong-mei1
（1.DepartmentofSocialService，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China；2.DepartmentofGastroenterology，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo investigate the expression of DOG1，CD117，and Ki-67 in gastrointestinal stromal tumors and explore their relationship with the clinicopathological factors and risk rank of GISTs.MethodsImmunohistochemical method was adopted to detected the expression of DOG1，CD117，and Ki67 in 66 cases of GIST.The risks in all cases were also ranked.The correlation between immunohistochemical indicators and clinicopathological factors and risk ranks of GISTs were analyzed.ResultsAmong the 66 GISTs，the positive rates of DOG1 and CD117 were 93.94%and 65.15%.The positive rate of DOG1 in CD117 negative GISTs was 82.61%.had There were no significant difference among groups in gender，age，position，tumor size，tumor mitotic count in the expression of DOG1 and CD117 and risk rank（P＞0.05）.However，DOG1 was more sensitive than CD117（P＜0.01）.The number of cases with Ki67 proliferation indices＜1%，1%-5%and＞5%were 15，20，and 24，respectively. The positive rate of Ki67 was 89.39%.No significant difference was found in the expression of Ki67 among groups in gender，age，and position（P＞0.05）.Nevertheless，e Ki67 protein expression waspositively correlated with the tumorsize，tumormitotic countand risk rank（P＜0.01）（r=0.488，r=0.425，r=0.550）.The positive rate of Ki67 was a little bit higher in CD117 positive GISTs than the these DOG1 positive cases，but there was no significant difference（P＞0.05）.ConclusionDOG1 has higher sensitivity than CD117 in GISTs.Ki67 protein，tumor size，and tumor mitotic countwere risk indicatorsfor GISTs and could be predictors forprognosis.

gastrointestinal stromal tumors；DOG1；CD117；Ki67；risk rank

R735

A

0258-4646（2014）05-0449-05

曾祥（1986-），男，住院醫(yī)師，碩士.

李巖，E-mail：yanli0227@126.com

2013-12-04

網(wǎng)絡出版時間：