李小軍，閆文朝，錢偉鋒，王天奇，韓利方，袁 林，黃騰飛

肉孢子蟲病(Sarcocystosis)是一種食源性人獸共患寄生蟲病，能感染人和豬、牛等多種動物，呈世界性分布[1-2]。目前能感染豬的至少有2種肉孢子蟲，為米氏肉孢子蟲(Sarcocystismiescheriana)和豬人肉孢子蟲(S.suihominis)，其中米氏肉孢子蟲對豬具有明顯的致病性[3-7]，豬人肉孢子蟲對人表現(xiàn)一定的致病性[4]。有文獻報道[1,8]，志愿者食入生豬肉后，除了表現(xiàn)嘔吐、腹瀉等腸型肉孢子蟲感染癥狀外，還出現(xiàn)肌肉疼痛和心肌炎等肌肉型肉孢子蟲感染癥狀。豬肉中是否含有能感染人肌肉的肉孢子蟲呢？需要進一步證實。因此，弄清豬源肉孢子蟲病原種類、感染性和致病性等病原學特性，具有重要的獸醫(yī)公共衛(wèi)生意義。

豬肉是國人最主要的肉食品之一。據(jù)河南省畜牧局統(tǒng)計，截至2011年全省生豬存欄量已達3 500萬頭左右,生豬已成為我省畜牧業(yè)的支柱畜種[9]。為了摸清近年來豬肉孢子蟲病的流行情況，評估豬源肉孢子蟲的公共衛(wèi)生風險，課題組從2011年1-12月，對豫北某大型屠宰場屠宰生豬肉孢子蟲感染情況進行了調查和分析。

1 材料與方法

1.1采樣 豫北某大型屠宰場屠宰的生豬，宰前2 h，嚴格按照生豬屠宰檢疫規(guī)程的要求，對生豬實施臨床檢查，經(jīng)臨床檢查健康的，準予屠宰。宰后在屠宰生產(chǎn)線上，每頭豬胴體劈半前，采取兩橫膈肌腳的新鮮肉樣，每塊不少于30 g，與胴體編號對應放于帶編號的托盤內，每盤10頭豬的肉樣，及時送寄生蟲檢疫室進行檢查。

1.2肉眼篩查 先剝離每份新鮮肉樣上附著的脂肪組織、結締組織，撕去肌膜，在日光燈下肉眼仔細觀察，是否有肉孢子蟲包囊存在，然后用顯微鏡觀察給予確認[10]，注意與囊蟲、旋毛蟲包囊相區(qū)別。成熟的豬囊蟲：大小約為(6～10) mm×5 mm，肉眼可見如黃豆粒大小的包囊，位于肌纖維之間，呈橢圓形半透明，囊內充滿液體，壁上有一個圓形米粒大的乳白色內翻頭節(jié)；旋毛蟲包囊：肉眼下，在肌肉表面可看到稍凸出的針尖大小、黃白色或灰白色小點。顯微鏡下，旋毛蟲包囊位于肌纖維之間的棱形腔內，包囊內的幼蟲呈螺旋狀卷曲；肉孢子蟲包囊：肉眼可見在肉樣中呈白色毛根狀，壓片鏡檢呈灰白色柳葉形，有時呈橢圓形、梭形、半月形或不規(guī)則形[10-13]。

1.3肉樣壓片鏡檢 在每塊膈肌腳上，順肌纖維方向隨機剪米粒大小的肉樣12粒，每頭豬24粒，置于載玻片上，滴加適量20%甘油水溶液透明，蓋上一張載玻片壓片，將兩片玻片用力擠壓，至肉樣半透明狀，以透過肉樣可見報紙上的字為準，用自制橡皮圈固定。在4×10倍光學顯微鏡下進行檢查。

在任何一塊被檢肉樣上發(fā)現(xiàn)肉孢子蟲包囊，即判為陽性；對未發(fā)現(xiàn)蟲體包囊的則判為陰性。 觀察標本上的肉孢子蟲包囊形態(tài)、顯微測量其大小，并統(tǒng)計檢出率和感染強度。參考豬肉旋毛蟲檢疫標準[12]，以24粒肉樣為單位，計算肉孢子蟲感染強度。檢出包囊3個以下的，定為輕度感染；4個到7個的定為中度感染；8個以上的定為重度感染。

1.4病理組織學觀察 為了進一步確定豬源肉孢子蟲包囊的結構、寄生部位及其引起肌肉的病理變化，對壓片鏡檢肉孢子蟲陽性的豬，采集其腰肌、肋間肌、頸背側肌、股內側肌和膈肌等肌肉樣品，固定于10%的福爾馬林溶液內。然后通過水洗、逐級脫水、透明、浸蠟、組織包埋、切片和HE染色等組織切片技術對樣品進行處理，最后在顯微鏡下觀察包囊在豬肉中寄生情況和引起的病理組織學變化[7]。

2 結 果

2.1屠宰生豬肉孢子蟲感染情況 本次共調查屠宰生豬1 016 220頭，生豬主要來源于豫北地區(qū)，少量來自豫西、與河南交界的山西部分縣區(qū)。通過對膈肌的肉眼檢查和壓片鏡檢，肉孢子蟲平均陽性檢出率為2.38 ‰，其中3-7月份肉孢子蟲檢出率為3.07‰～5.29‰,明顯高于2011年其它月份；9-12月份檢出率為0.17‰～0.46‰，遠低于其他月份(表1)。

24粒肉樣壓片鏡檢發(fā)現(xiàn)，69.61%的陽性豬屬于輕度感染，28.16%的陽性豬屬于中度感染，僅有2.23%陽性豬為重度感染。說明來自豫北、豫西地區(qū)及與河南交界的山西部分地區(qū)的生豬肉孢子蟲輕度和中度感染非常普遍。

表1不同月份屠宰生豬肉孢子蟲感染情況統(tǒng)計表

Tab.1PositiverateofSarcocystiscystsintheslaughteredpigsduringJanuaryandDecemberof2011

MonthNo. slaughtered pigsNo. positivepigs Positive rate /‰186 6661411.62266 9501131.693103 4995485.294103 0833163.07597 7743163.23686 0653794.40779 9123684.60871 0741291.81984 259320.381089 084410.461165 008250.381282 846140.17Total1 016 2202 4222.38

2.2豬源肉孢子蟲包囊的形態(tài)學觀察 肉眼可以觀察到新鮮肉樣中肉孢子蟲包囊呈白色毛根狀，與肌纖維平行分布，但是于4 ℃或-20 ℃保存后就不易辨認。有包囊寄生的部位，肌肉組織色澤、硬度、氣味一般無明顯變化；嚴重感染蟲體密集部位，肌肉色澤變淡。

壓片鏡檢結果顯示，在膈肌、頸背側肌、腰肌、肋間肌和股內側肌中均發(fā)現(xiàn)肉孢子蟲包囊，與肌纖維平行，其中膈肌和頸背側肌包囊寄生密度較大。包囊形態(tài)主要有梭形、柳葉狀和棒狀(如圖1-A和1-B)。

組織切片結果顯示，肉孢子蟲包囊寄生于肌纖維內，與肌纖維縱軸平行。在豬肌肉中存在有厚壁型和薄壁型包囊，其中前者的囊壁呈柵欄狀(如圖2-A)，后者為一薄層光滑的壁(如圖2-B)，包囊內含有大量呈香蕉狀的慢殖子(如圖2-A和2-B)。參考相關文獻，在包囊形態(tài)上，來自豫北、豫西地區(qū)以及與河南交界的山西部分地區(qū)的生豬肌肉中的部分包囊與米氏肉孢子蟲相似[3,14]，另外一部分包囊即薄壁型包囊是否是其他蟲種需要進一步驗證。

圖1肌肉壓片鏡檢下的豬源肉孢子蟲包囊，呈柳葉狀(A和B)。

Fig.1Willowleaf-likecystsofSracocystis(AandB)frompigsdetectedusingmusclesquashingmicroscopicobservation

圖2豬肉中肉孢子蟲包囊病理組織學觀察

A：寄生于膈肌纖維內的包囊，其內部含有大量慢殖子，包囊壁較??；B：頸背側肌纖維內的包囊，其壁呈柵欄狀厚壁型；C和D：寄生于膈肌纖維內的包囊引起肌纖維變性、萎縮和橫紋消失等病理損傷。

Fig.2HistopathologicalobservationofSarcocystiscystsinpork

Two types of cysts, smoothly thin wall of cysts (A) in diaphragmatic muscles of pigs and palisade-like thick wall of cysts (B), in nape of neck side muscle and numerous bradyzoites were present in both cysts (×640). Obvious atrophy of muscles, and disappearance of striation of myofibril is the result of degeneration and necrosis of muscle cells caused by cysts (×400).

2.3包囊引起的組織病變 病理組織觀察結果顯示，肉孢子蟲包囊引起豬膈肌、頸背側肌等不同部位肌纖維紅染變性、壞死、橫紋消失，大量寄生有包囊的肌纖維和肌膜之間間隙變寬，引起肌纖維萎縮等病理損傷(如圖2-C和D)。說明豬源肉孢子蟲包囊對豬也表現(xiàn)明顯致病性。

3 討 論

3.1豫北地區(qū)屠宰生豬肉孢子蟲感染情況與分析 豬肉孢子蟲病于1865年首次在豬的舌肌和心肌中發(fā)現(xiàn)，隨后世界各地均有報道。國外豬的感染率為0.2%～96%，國內豬感染率為7.76%～80%，不同地區(qū)豬感染率差異較大[3-5]。本次調查豫北地區(qū)屠宰生豬肉孢子蟲包囊檢出率為2.38‰,相對國內其他省區(qū)的報道[15-16]，結果偏低；與1992年報道[17]豫南地區(qū)豬群感染結果相比也較低。其原因可能有以下4點：一是近幾年河南省加快標準化養(yǎng)殖建設，形成一大批標準化規(guī)模豬場和養(yǎng)殖小區(qū)，優(yōu)化了養(yǎng)殖環(huán)境，豬場和養(yǎng)殖戶的防疫意識增強，有效的切斷了中間宿主與終末宿主(犬、貓和人等)的接觸。相對于傳統(tǒng)落后的散養(yǎng)，標準化養(yǎng)殖飼養(yǎng)周期短，減少了感染機會；二是本屠宰場為大型屠宰場，嚴格按生豬屠宰檢疫規(guī)程的要求實施宰前檢疫，宰前檢查剔除了部分亞健康生豬，減少了亞健康生豬進入屠宰線,其中可能有部分陽性豬，降低了宰后陽性檢出率；三是本次調查是在屠宰流水線上操作，對每頭豬的判定有嚴格的時間限制，可能導致漏檢現(xiàn)象；四是豬源肉孢子蟲包囊長度僅有0.5～3 mm，形狀纖細[7,11,14]，在肉樣中容易與肌間脂肪和結締組織混淆，再加上感染強度較低時，更容易導致漏檢問題。因此作者推測豫北地區(qū)實際豬肉孢子蟲感染率應該高于本實驗壓片鏡檢結果。要想弄清豬群中肉孢子蟲的真實感染情況，需要建立敏感、特異和快速的免疫學方法如ELISA、免疫檢測試紙條，實施宰前的檢測和流行病學調查[18-19]。

本實驗參考旋毛蟲檢疫標準[12]，結合豬源肉孢子蟲的自身特點，建立了豬肉中肉孢子蟲包囊感染強度的統(tǒng)計方法，該方法對實驗條件要求較低，結果可靠，利用該方法不僅可以檢測新鮮肉樣中的包囊，而且還可以檢測4 ℃或-20 ℃保存后的樣品，但其缺點是敏感性低，操縱繁瑣，費時費力。本次研究發(fā)現(xiàn)，豫北地區(qū)絕大多數(shù)陽性豬為輕度至中度感染，這可能與宰前嚴格剔除亞健康生豬有關。

3.2肉孢子蟲包囊的致病性分析 本次研究發(fā)現(xiàn)，豬源肉孢子蟲包囊能引起豬肌纖維變性、壞死和萎縮等病理變化，進而影響豬機體運動、呼吸和心臟等功能。這與文獻報道的豬源肉孢子蟲感染能引起豬出現(xiàn)跛行、運動困難和肌炎等癥狀相一致[3,5]。說明豬源肉孢子蟲不僅在肝臟血管內皮細胞內的裂殖生殖階段對豬有較強致病性，而且在橫紋肌和心肌內的包囊對豬也有明顯的致病性。因此，在養(yǎng)豬生產(chǎn)和屠宰檢疫中應充分認識到豬肉孢子蟲病的危害性，并予以重視。

3.3豬源肉孢子蟲的公共衛(wèi)生風險性分析 豬肉孢子蟲病其病原目前報道的有3種：米氏肉孢子蟲、豬人肉孢子蟲和豬貓肉孢子蟲，前2種有效性得到公認，而豬貓肉孢子蟲其作為獨立種的有效性尚有爭議。目前已知豬人肉孢子蟲的能感染人[1,3,20]。本次調查發(fā)現(xiàn)，豫北地區(qū)屠宰生豬感染的肉孢子蟲包囊分為兩類：厚壁型和薄壁型，其中厚壁型包囊的大小和囊壁特征與米氏肉孢子蟲相似，該結果也得到分子鑒定結果的證實[7]；另外一種薄壁型包囊是前一種的未成熟包囊還是其他蟲種，有待通過分子標記技術等手段進一步驗證。

據(jù)文獻記載[1,21]，近100例病人表現(xiàn)肌肉型肉孢子蟲感染，說明人可以作為某些未知肉孢子蟲的中間宿主。有文獻報道，志愿者食入生豬肉后，除了表現(xiàn)腸型肉孢子蟲感染癥狀外，還出現(xiàn)肌肉疼痛和心肌炎等肌肉型肉孢子蟲感染癥狀[4,21]。推測豬肉中可能含有能感染人肌肉的未知肉孢子蟲。本次調查數(shù)據(jù)顯示，豫北地區(qū)屠宰生豬肉孢子蟲陽性檢出率遠高于豬囊尾蚴和旋毛蟲。據(jù)悉，河南省豬囊尾蚴和旋毛蟲目前檢出率低于萬分之一，這與標準化養(yǎng)殖和嚴格的檢疫制度有密切關系[11]。說明目前豬肉孢子蟲感染率較高與獸醫(yī)界和屠宰檢疫過程中重視不夠有關。豬肉是人們最主要的肉食品之一，而且豬群數(shù)量龐大，與人類接觸機會較多，豬群中肉孢子蟲高陽性率對人類健康構成潛在的威脅。因此，通過分子標記技術對豬源肉孢子蟲進行分子流行病學規(guī)律研究[22-24]，尤其是揭示對人類具有感染性和致病性的豬源肉孢子蟲，具有重要的公共衛(wèi)生意義。

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