北京市醫(yī)療器械檢驗(yàn)所（0）李正

北京市藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心（100061）趙陽(yáng)2 孫嶸3

高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑（盒）產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)規(guī)范是北京市藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心2013年制定的一項(xiàng)技術(shù)審評(píng)規(guī)范，其作用在于指導(dǎo)北京地區(qū)體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)人的申報(bào)工作，同時(shí)規(guī)范技術(shù)審評(píng)工作。目前，該規(guī)范已在北京市食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站上公開(kāi)征求意見(jiàn)，并將于年內(nèi)正式發(fā)布。

高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑（盒）產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)規(guī)范是心腦血管相關(guān)生物指標(biāo)系列技術(shù)審評(píng)規(guī)范制定工作的組成之一，該系列技術(shù)審評(píng)規(guī)范是我中心參與的國(guó)家863課題項(xiàng)目——心腦血管慢性損傷及急救指標(biāo)等體外診斷試劑研制課題的子課題，主要目的是建立心腦血管損傷相關(guān)診斷試劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，用以指導(dǎo)該類(lèi)試劑的研制和評(píng)價(jià)工作。

心腦血管疾病是全球性的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題，每年約有1700萬(wàn)人死于心腦血管疾病。在我國(guó)，隨著人民生活水平的逐年提高，心腦血管疾病的發(fā)病率也明顯升高，嚴(yán)重威脅人們的生命健康。高密度脂蛋白膽固醇（HDL）由載脂蛋白、磷脂、膽固醇和少量脂肪酸組成，亦稱(chēng)為a1脂蛋白。它是冠心病的保護(hù)因子，俗稱(chēng)“血管清道夫”，有抵御斑塊形成的作用，是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，其含量與動(dòng)脈管腔狹窄程度呈負(fù)相關(guān)。對(duì)高密度脂蛋白膽固醇的檢測(cè)，有助于判別高脂蛋白血癥，異常增高可見(jiàn)于原發(fā)性高HDL血癥，降低多見(jiàn)于心、腦血管病，肝炎，肝硬化等[1]。截止2013年11月，全國(guó)共有有效注冊(cè)證約170個(gè)（含國(guó)產(chǎn)、進(jìn)口）。根據(jù)前期調(diào)研發(fā)現(xiàn)，該產(chǎn)品名稱(chēng)多樣、性能及技術(shù)指標(biāo)不統(tǒng)一，缺乏統(tǒng)一的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，為了規(guī)范該產(chǎn)品的注冊(cè)申報(bào)及技術(shù)審評(píng)工作，特制定本規(guī)范。下面就規(guī)范中的重點(diǎn)問(wèn)題進(jìn)行簡(jiǎn)要概述。

1 適用范圍

該規(guī)范適用于采用分光光度法原理，利用全自動(dòng)、半自動(dòng)儀器或分光光度計(jì)，在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行高密度脂蛋白膽固醇定量檢驗(yàn)所使用的臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）。干式高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑（盒）產(chǎn)品不在本文討論范圍之內(nèi)。

2 試劑盒命名、組成及用途

2.1 試劑盒命名 試劑（盒）名稱(chēng)由三部分組成：第一部分 被測(cè)物名稱(chēng)：高密度脂蛋白膽固醇；第二部分 用途：測(cè)定試劑（盒）；第三部分 方法或原理：如直接法-選擇抑制法。

規(guī)范制定之前產(chǎn)品申報(bào)名稱(chēng)方法學(xué)不統(tǒng)一，如有高密度脂蛋白膽固醇試劑盒（一步法）、高密度脂蛋白膽固醇試劑盒（兩步法），現(xiàn)根據(jù)《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）命名》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)報(bào)批稿對(duì)產(chǎn)品名稱(chēng)進(jìn)行了統(tǒng)一規(guī)范。

2.2 反應(yīng)原理 使用直接法對(duì)人血清或血漿中的高密度脂蛋白膽固醇進(jìn)行定量檢測(cè)的試劑（盒）。如直接法-選擇抑制法：血清中乳糜微粒（CM）、低密度脂蛋白（LDL）及極低密度脂蛋白（VLDL）在多聚陰離子及反應(yīng)抑制劑作用下表面被遮蔽。HDL-C與表面活性劑、反應(yīng)促進(jìn)劑在膽固醇酶試劑的作用下參與Trinder反應(yīng)而顯色，吸光度與標(biāo)本中HDL-C濃度成正比。

2.3 產(chǎn)品的預(yù)期用途 本試劑（盒）用于體外定量測(cè)定人血清或血漿中的高密度脂蛋白膽固醇的含量。

3 產(chǎn)品的主要技術(shù)指標(biāo)

本產(chǎn)品的性能指標(biāo)主要參照GB/T26124-2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》、北京市食品藥品監(jiān)督管理局技術(shù)審評(píng)規(guī)范《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)規(guī)范》及《高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑（盒）》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)報(bào)批稿。

3.1 外觀 目測(cè)檢查，符合生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的正常外觀要求。

3.2 凈含量 用通用量具測(cè)量，液體試劑的凈含量應(yīng)不少于標(biāo)示值。

3.3 試劑空白吸光度 用試劑（盒）測(cè)試空白樣本，記錄試劑（盒）參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點(diǎn)主波長(zhǎng)下的吸光度值，試劑空白吸光度應(yīng)＜0.05。（注：空白樣本可以是純水樣本、生理鹽水、零校準(zhǔn)液等。）

3.4 分析靈敏度 用試劑（盒）測(cè)試已知濃度在（1.00～2.00）mmol/L的樣本，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下的吸光度差值。換算為1.00mmol/L的吸光度差值，測(cè)定1.00mmol/L樣本時(shí)，兩點(diǎn)終點(diǎn)法吸光度差值（ΔA）應(yīng)＞0.04；兩點(diǎn)速率法吸光度差值（ΔA/min）應(yīng)＞0.01。

3.5 線(xiàn)性范圍 用超出線(xiàn)性范圍上限的樣品和超出或等于線(xiàn)性范圍下限的樣品，混合成至少5個(gè)稀釋濃度（xi）。分別測(cè)試試劑盒，每個(gè)稀釋濃度測(cè)試3次，分別求出測(cè)定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測(cè)定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線(xiàn)性回歸方程。按公式計(jì)算線(xiàn)性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）：

稀釋濃度（xi）代入求出線(xiàn)性回歸方程，計(jì)算yi的估計(jì)值及yi與估計(jì)值的相對(duì)偏差或絕對(duì)偏差。試劑盒至少在[0.20，2.50] mmol/L的線(xiàn)性范圍內(nèi)分析性能應(yīng)符合如下要求。

3.5.1 線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)不小于0.995。

3.5.2 [0.20，2.50]mmol/L區(qū)間內(nèi)，線(xiàn)性偏差應(yīng)不超過(guò)±0.10mmol/L或不超過(guò)±10%。

3.6 精密度

3.6.1 重復(fù)性 根據(jù)文獻(xiàn)[2]參考值范圍，對(duì)該產(chǎn)品檢測(cè)時(shí)用兩個(gè)水平的血清樣品或質(zhì)控樣品，濃度分別為（0.80±0.20）mmol/L和（1.50±0.50）mmol/L[3]，重復(fù)測(cè)試10次，分別計(jì)算測(cè)量值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）。所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于4%。

3.6.2 批間差 用（1.50±0.50）mmol/L的血清樣品或質(zhì)控樣品分別測(cè)試3個(gè)不同批號(hào)的試劑（盒），每個(gè)批號(hào)測(cè)試3次，分別計(jì)算每批3次測(cè)定的均值（i=1，2，3），按以下公式計(jì)算相對(duì)極差（R）：

3.7 準(zhǔn)確度 試劑（盒）測(cè)試可用于評(píng)價(jià)常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）或其他公認(rèn)的參考物質(zhì)進(jìn)行3次平行測(cè)定，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的均值，以相對(duì)偏差來(lái)表示測(cè)定結(jié)果的不準(zhǔn)確度，按以下公式分別計(jì)算相對(duì)偏差B，如果3次結(jié)果的相對(duì)偏差應(yīng)不超過(guò)±10%，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測(cè)試20次，并分別按照公式計(jì)算相對(duì)偏差，如果大于等于19次測(cè)試結(jié)果的相對(duì)偏差應(yīng)不超過(guò)±10%，即判為合格[4]。B%＝（M－T）/T×100%，式中：M為測(cè)試結(jié)果均值；T為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)示值。［注：型式試驗(yàn)時(shí)，可采用上述方法測(cè)試試劑（盒）的準(zhǔn)確度。出廠檢驗(yàn)時(shí)，根據(jù)企業(yè)實(shí)際質(zhì)量控制情況，生產(chǎn)企業(yè)可以選擇以上檢驗(yàn)方式，也可以使用具有溯源性的企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品或正確度質(zhì)控物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)，但企業(yè)每年應(yīng)以型式檢驗(yàn)的方式對(duì)產(chǎn)品的準(zhǔn)確度進(jìn)行驗(yàn)證。］

3.8 穩(wěn)定性 效期穩(wěn)定性：試劑（盒）在規(guī)定的貯存條件下保存至有效期末，產(chǎn)品的性能應(yīng)至少符合試劑空白吸光度、分析靈敏度、線(xiàn)性、準(zhǔn)確度和重復(fù)性的要求。

3.9 校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（如適用） 若試劑盒配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，應(yīng)提供校準(zhǔn)品溯源性說(shuō)明及質(zhì)控品定值說(shuō)明。（注：校準(zhǔn)品溯源應(yīng)列出溯源圖，并描述不確定度的計(jì)算方法和限制范圍。質(zhì)控品定值應(yīng)采用不同實(shí)驗(yàn)室賦值的方式。）

4 產(chǎn)品的臨床要求

試劑（盒）按照《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（試行）、《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》及《北京市第二類(lèi)體外診斷試劑臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則》進(jìn)行臨床試驗(yàn)。執(zhí)行的基本原則至少包括以下幾個(gè)方面。

4.1 在兩家省級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生單位完成臨床研究。

4.2 “已有同種批準(zhǔn)上市”的試劑（盒）應(yīng)與已批準(zhǔn)上市產(chǎn)品針對(duì)臨床樣本進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。

4.3 臨床樣本的要求：綜合不同地區(qū)人種、流行病學(xué)背景、病原微生物的特性等因素選擇研究單位，癥狀典型和非典型的，一般臨床研究的總樣本數(shù)至少為200例。

4.4 如果申報(bào)的試劑產(chǎn)品同時(shí)適用于血清、血漿樣本。血清（或血漿）的試驗(yàn)例數(shù)按照《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》要求的例數(shù)進(jìn)行；同時(shí)，還要進(jìn)行血清、血漿檢驗(yàn)結(jié)果一致性的比對(duì)。

4.5 異常樣本、正常樣本應(yīng)均勻分布，異常樣本量應(yīng)不少于80例。

5 試劑（盒）說(shuō)明書(shū)、標(biāo)簽、包裝標(biāo)識(shí)

5.1 試劑（盒）說(shuō)明書(shū) 試劑（盒）說(shuō)明書(shū)應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求，需要注意以下內(nèi)容。

5.1.1 產(chǎn)品名稱(chēng) 通用名稱(chēng)：如高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑盒（直接法－選擇抑制法）；商品名稱(chēng)：與企業(yè)聲稱(chēng)一致。英文名稱(chēng)：high density lipoprotein cholesterol Assay Kit。

5.1.2 應(yīng)說(shuō)明試劑（盒）的包裝規(guī)格 不得多于企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中所列的包裝規(guī)格。

5.1.3 預(yù)期用途 本試劑（盒）用于體外定量測(cè)定人血清或血漿中的高密度脂蛋白膽固醇的含量。

5.1.4 臨床意義 高密度脂蛋白（HDL）具有抵御斑塊形成的作用，是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白，它的含量與動(dòng)脈管腔狹窄程度呈負(fù)相關(guān)[1]。（注：生產(chǎn)企業(yè)可根據(jù)自身產(chǎn)品情況編寫(xiě)，如有新的臨床意義，應(yīng)提供相應(yīng)依據(jù)。）

5.1.5 檢驗(yàn)原理 企業(yè)應(yīng)根據(jù)自身產(chǎn)品的方法學(xué)，簡(jiǎn)要說(shuō)明反應(yīng)原理或以化學(xué)方程式表達(dá)，內(nèi)容至少包括主要反應(yīng)物、主波長(zhǎng)數(shù)以及酶促反應(yīng)等相關(guān)信息。

5.1.6 主要組成成分 對(duì)于產(chǎn)品中包含的試劑組分應(yīng)有名稱(chēng)、數(shù)量、每一組分中的主要成分在反應(yīng)體系中的比例或濃度，如果對(duì)于正確的操作很重要，應(yīng)提供其生物學(xué)來(lái)源、活性及其他特性；對(duì)于試劑盒中含有校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，說(shuō)明主要組成成分及其生物學(xué)來(lái)源，注明校準(zhǔn)品的定值及其溯源性，注明質(zhì)控品的允許范圍。

5.1.7 應(yīng)說(shuō)明貯存條件及有效期。

5.1.8 應(yīng)說(shuō)明可適用儀器的名稱(chēng)及型號(hào)。

5.1.9 應(yīng)說(shuō)明對(duì)樣本的要求，包括樣本采集過(guò)程中的注意事項(xiàng)，為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護(hù)劑，已知的干擾物、能夠保證樣本穩(wěn)定的貯存、處理和運(yùn)輸?shù)姆椒ā?/p>

5.1.10 說(shuō)明 應(yīng)說(shuō)明檢驗(yàn)方法，至少包括試劑配制、試驗(yàn)條件、校準(zhǔn)程序、校準(zhǔn)間隔、質(zhì)量控制程序、試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算。

5.1.11 應(yīng)有參考值范圍，并簡(jiǎn)要說(shuō)明確定的依據(jù)，如健康成年男性：1.16～1.42mmol/L；健康成年女性：1.29～1.55mmol/L。參考值范圍參考《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版），并經(jīng)過(guò)對(duì)120例臨床樣本驗(yàn)證獲得，并注明各臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考范圍區(qū)間。

5.1.12 應(yīng)有檢驗(yàn)結(jié)果的解釋?zhuān)f(shuō)明可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素。

5.1.13 應(yīng)說(shuō)明檢驗(yàn)方法的局限性。說(shuō)明該檢驗(yàn)方法由于哪些原因會(huì)使測(cè)量結(jié)果產(chǎn)生偏離，并給出含有各干擾物質(zhì)的最大量。如血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。若超出線(xiàn)性范圍可稀釋后測(cè)定，應(yīng)明確最大稀釋比例。

5.1.14 應(yīng)說(shuō)明產(chǎn)品性能指標(biāo)，并符合注冊(cè)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的要求。

5.1.15 應(yīng)說(shuō)明必要的注意事項(xiàng)，如本品僅用于體外診斷；應(yīng)該嚴(yán)格按照樣本要求進(jìn)行操作，若該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源的物質(zhì)時(shí)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告說(shuō)明等[2]。

5.1.16 注明引用的參考文獻(xiàn)。

5.1.17 注明生產(chǎn)企業(yè)，包括企業(yè)名稱(chēng)、生產(chǎn)/注冊(cè)地址、聯(lián)系方式。

5.1.18 注明醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證編號(hào)。

5.1.19 注明醫(yī)療器械注冊(cè)證書(shū)編號(hào)。

5.1.20 注明產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)。

5.1.21 注明說(shuō)明書(shū)批準(zhǔn)日期及修訂日期。

5.2 外包裝標(biāo)簽

5.2.1 生產(chǎn)企業(yè)名稱(chēng)和地址。

5.2.2 試劑（盒）名稱(chēng)。

5.2.3 批號(hào)：如試劑（盒）包含不同批號(hào)的組件時(shí)，外包裝的批號(hào)應(yīng)該能夠保證每個(gè)組件的批號(hào)可從生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)記錄中溯源。

5.2.4 規(guī)格：應(yīng)包含體積或復(fù)溶后的體積。

5.2.5 預(yù)期用途：如試劑（盒）名稱(chēng)不能反映試劑（盒）的預(yù)期用途，應(yīng)提供簡(jiǎn)要的預(yù)期用途說(shuō)明。

5.2.6 體外診斷用途。

5.2.7 儲(chǔ)存和處置條件。應(yīng)提供在未開(kāi)封狀態(tài)下可保證試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控物質(zhì)的穩(wěn)定狀態(tài)的必要儲(chǔ)存條件；應(yīng)規(guī)定影響穩(wěn)定性的其他條件（如適用）；應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品處置時(shí)所采取的所有其他特殊措施（如適用）。

5.2.8 失效期。應(yīng)明示在規(guī)定儲(chǔ)存條件下的失效期；失效期應(yīng)以年、月，適當(dāng)時(shí)以日表示；如僅給出年月，失效期應(yīng)為指定月的最后一天；外包裝標(biāo)簽上明示的失效期應(yīng)為最早到期組件的失效期。

5.2.9 警告和預(yù)防措施。如體外診斷試劑（盒）被認(rèn)為有危險(xiǎn)性（如化學(xué)，放射性或生物危害性），外包裝應(yīng)標(biāo)示有適當(dāng)?shù)木疚ｋU(xiǎn)的文字或符號(hào)說(shuō)明，YY/T 0316的要求適用；對(duì)于化學(xué)危害，如試劑（盒）沒(méi)有隨帶含有適當(dāng)?shù)奈ｋU(xiǎn)和安全性說(shuō)明的使用說(shuō)明，則應(yīng)在外包裝的標(biāo)簽上進(jìn)行說(shuō)明[2]。

5.3 初始包裝標(biāo)簽 如初始包裝同時(shí)也是外包裝，規(guī)定對(duì)外包裝標(biāo)簽的要求也適用。初始包裝標(biāo)簽上應(yīng)提供如下信息：小標(biāo)簽規(guī)定。如瓶標(biāo)簽上可利用的空間太小以致于不能包括下述所需全部信息，則5.2.5、5.2.6和5.2.7項(xiàng)的信息可省略或刪除。①生產(chǎn)企業(yè)名稱(chēng)或等同的商標(biāo)或標(biāo)志。②產(chǎn)品名稱(chēng)。③批號(hào)。④規(guī)格。如質(zhì)量，體積，復(fù)溶后的體積。⑤體外診斷用途。⑥儲(chǔ)存和處置條件。⑦失效期。⑧警告和預(yù)防措施。

6 其他相關(guān)要求

6.1 注冊(cè)單元?jiǎng)澐值脑瓌t 試劑（盒）的注冊(cè)單元應(yīng)為單一試劑（盒），一個(gè)注冊(cè)單元可以包括不同的包裝規(guī)格。

6.2 出廠檢驗(yàn)原則 每批試劑（盒）出廠檢驗(yàn)至少進(jìn)行以下幾項(xiàng)內(nèi)容：外觀、裝量、試劑空白吸光度、準(zhǔn)確度、批內(nèi)重復(fù)性。

7 結(jié)語(yǔ)

本規(guī)范主要依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例》、《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（試行）、《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》進(jìn)行編寫(xiě)。產(chǎn)品的主要技術(shù)指標(biāo)參考了GB/T 26124-2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》及《高密度脂蛋白膽固醇》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)報(bào)批稿，在規(guī)范的制定過(guò)程中征求了如北京醫(yī)院、安貞醫(yī)院、煤炭總醫(yī)院等眾多臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域的專(zhuān)家意見(jiàn)，還征求了包括北京九強(qiáng)、利德曼、中生北控等生產(chǎn)企業(yè)的意見(jiàn)。

本文所介紹的規(guī)范已經(jīng)用于指導(dǎo)和規(guī)范北京市高密度脂蛋白膽固醇產(chǎn)品的技術(shù)審評(píng)工作，幫助審評(píng)人員更深入地理解和掌握該類(lèi)產(chǎn)品的反應(yīng)原理、性能指標(biāo)、包裝標(biāo)識(shí)等內(nèi)容，把握技術(shù)審評(píng)工作的基本要求和尺度，對(duì)產(chǎn)品安全性、有效性做出更全面的系統(tǒng)評(píng)價(jià)。同時(shí)，規(guī)范的實(shí)施也更有利于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)的注冊(cè)申報(bào)工作，促進(jìn)產(chǎn)品安全有效上市。