聚山梨酯80的分析方法研究進(jìn)展

張 勇，趙 鑫，賈衛(wèi)茹

0 引言

聚山梨酯80是一種穩(wěn)定的非離子型表面活性劑、乳化劑、增溶劑、潤濕劑、分散劑和助懸劑，在醫(yī)藥領(lǐng)域中廣泛使用[1-10]。由于聚山梨酯具有較強(qiáng)的親水性和化學(xué)上的不解離性，對(duì)親脂性藥物有較好的助溶作用，能與許多中藥成分配伍，因此在中藥注射劑中，常添加聚山梨酯80以增加有效成分的溶解度。其增溶效果好、乳化能力強(qiáng)，藥物不易析出，在水包油(O/W)型乳化劑中，能使其他物質(zhì)在溶液中均勻分散，形成穩(wěn)定的乳劑。

近年來，聚山梨酯80的安全性愈發(fā)受到關(guān)注[11-12]。研究發(fā)現(xiàn)高濃度時(shí)其具有一定的溶血性，且溶血性受產(chǎn)品合成工藝影響，不同工藝及純化工藝制得的產(chǎn)品差異很大，優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品在正常使用量不會(huì)產(chǎn)生溶血作用[13-15]。對(duì)犬進(jìn)行的藥理研究發(fā)現(xiàn)，其具有促進(jìn)組胺釋放的作用,聚山梨酯80的類過敏反應(yīng)有明顯的種屬差異，犬對(duì)其過敏反應(yīng)比較敏感，猴對(duì)其過敏反應(yīng)不太敏感，食蟹猴后肢靜脈注射5%的聚山梨酯80注射液(劑量為50 mg/kg)，進(jìn)口和國產(chǎn)的聚山梨酯80都未發(fā)現(xiàn)有過敏反應(yīng)[16-21]。

聚山梨酯80是由油酸山梨坦和環(huán)氧乙烷聚合而成的。其結(jié)構(gòu)中存在3個(gè)支鏈，每個(gè)支鏈中聚乙氧基(-CH2CH2O-)的數(shù)量不同，但整個(gè)分子中聚乙氧基(-CH2CH2O-)的數(shù)量為20，使其性質(zhì)存在差別，但其分子量恒定。結(jié)構(gòu)中含有油酸，可以水解產(chǎn)生油酸。分子中不存在共軛雙鍵，故僅有末端的紫外吸收。

由于聚山梨酯80自身的組成成分比較復(fù)雜[22-23]，其安全性與用量成為影響藥品安全性的關(guān)鍵，藥品標(biāo)準(zhǔn)中未形成其檢驗(yàn)方法，使得其檢驗(yàn)方法成為關(guān)鍵,尤其在制劑及體內(nèi)的檢驗(yàn)方法成為研究的重點(diǎn)，本文對(duì)國內(nèi)外聚山梨酯80的檢驗(yàn)方法經(jīng)行了總結(jié)。

1 聚山梨酯80的鑒別

利用聚乙氧基能夠與硫氰酸鈷銨形成藍(lán)色聚合物，該聚合物能夠溶解于氯仿，使氯仿層顯色的原理測(cè)定。閆位娟等[24]研究了中藥注射液中聚山梨酯80的鑒別方法，對(duì)42種常見注射液進(jìn)行研究，采用供試液加硫氰酸鈷銨溶液2 mL，搖勻，加1 mL氯仿?lián)u勻，靜置1.5 h，觀察氯仿層顏色。由于中藥注射液中成分復(fù)雜，會(huì)有干擾。氯仿層出現(xiàn)藍(lán)色為陽性，淺藍(lán)色為弱陽性，綠色為可疑，其他顏色均記為陰性。

2 聚山梨酯80的定量

2.1 分光光度法 閆位娟等[24-25]利用聚山梨酯80與硫氰酸鈷銨反應(yīng)顯色原理，采用分光光度法測(cè)定其含量。取聚山梨酯80 制成系列濃度的對(duì)照溶液，顯色，測(cè)定吸光度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，供試品與硫氰酸鈷銨溶液顯色后，測(cè)定。當(dāng)硫氰酸鈷銨用量足夠時(shí)，供試品溶液吸光度不會(huì)隨硫氰酸鈷銨用量增加而改變。樣品顯色后，吸光度穩(wěn)定，由于中藥注射液中其他成分影響，測(cè)定波長會(huì)有差異。劉燕梅等[26]采用本方法測(cè)定了4家企業(yè)的12批魚腥草注射液及8家企業(yè)的香丹注射液，能夠準(zhǔn)確測(cè)定其中的聚山梨酯80的含量。

2.2 水解法 根據(jù)聚山梨酯80結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，其結(jié)構(gòu)中含有油酸，利用在堿性條件下水解的方法，水解出油酸，聚山梨酯80與水解產(chǎn)物油酸的比例為1∶1。利用高效液相色譜法測(cè)定水解產(chǎn)生的油酸，計(jì)算出聚山梨酯80的含量。Michael等[27-28]取生物樣品300 μL，加入300 mmol/L的氫氧化鈉溶液300 μL，60 ℃放置18 h，進(jìn)行水解。冷卻至室溫，加5 mol/L的氫氧化鈉溶液150 μL和乙腈600 μL，5 mol/L的氫氧化鈉溶液用來使乙腈-水溶液分層。取乙腈層200 μL，加入20 mmol/L磷酸鉀50 μL作為供試品溶液。同法制備對(duì)照品溶液。色譜條件為ODS柱(3.9 mm×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-20 mmol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.8)，檢測(cè)波長為195 nm，流速1 mL/min。該方法使水解后產(chǎn)生的油酸萃取至乙腈層，消除了蛋白對(duì)測(cè)定的影響，在蛋白濃度高至75 mg/mL仍可準(zhǔn)確定量。

李建偉等[29]取復(fù)方苦參注射液樣品2 mL，放入烘箱中烘干后(105 ℃，2～3 h)，依次加入2%(w/v)氫氧化鈉甲醇溶液2 mL，水浴回流30 min，14%(w/v)三氟化硼-甲醇溶液2 mL，水浴回流30 min，正庚烷5 mL回流5 min，放冷，加飽和氯化鈉溶液10.0 mL，振搖15 s，移取正庚烷層(上層)，水洗，加適量無水硫酸鈉脫水，得供試品溶液，用氣相色譜法測(cè)定聚山梨酯80的含量。

2.3 液相色譜-質(zhì)譜連用法 Baker等[30-31]采用液質(zhì)聯(lián)用色譜法測(cè)定血樣中聚山梨酯80，樣品經(jīng)純化后，色譜分離，質(zhì)譜檢測(cè)。方法是取1 mL樣品于裝有7 mL乙腈-正丁基氯(1∶4)的培養(yǎng)管(16×125 mm)中，加入紫杉醇甲醇溶液10 μL(0.01 mM)作為內(nèi)標(biāo)。渦旋混合10 s，震蕩5 min。室溫離心10 min，取上層有機(jī)相轉(zhuǎn)移至硼硅酸鹽玻璃培養(yǎng)管(13×100 mm)，在60 ℃氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)蛹状?水(1∶1)100 μL，渦旋10 s，超聲5 min，再離心8 min，取10 μL注入液相色譜儀。色譜條件為ODS柱(50 mm×2.1 mm，3.5 μm)，柱溫40 ℃，流動(dòng)相為甲醇-水(9∶1)(加0.1%甲酸)，流速0.15 mL/min，質(zhì)譜采用正離子模式，碰撞能量35 eV，錐孔電壓38 V，聚山梨酯80在一級(jí)質(zhì)譜母離子m/z為1 309.8，子離子m/z為419.4；內(nèi)標(biāo)物紫杉醇在一級(jí)質(zhì)譜母離子m/z為854.9，子離子m/z為419.4。碰撞氣為氬氣，壓力為0.002 7 mBar，每個(gè)通道的駐留時(shí)間為0.3 s。

2.4 液相色譜-蒸發(fā)光散色檢測(cè)器法 蒸發(fā)光散色檢測(cè)器能檢測(cè)不含發(fā)色團(tuán)的化合物，為質(zhì)量型檢測(cè)器。Lakshmy等[32]采用C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，Alltech ELSD2000型檢測(cè)器，漂移管溫度40 ℃，氮?dú)饬魉?.5 L/min，流動(dòng)相為甲醇-水，采用梯度洗脫方式，0～4 min，甲醇30%～90%；4～12 min，甲醇90%～30%。流速1.0 mL/min。該條件下，樣品不需要前處理，可以直接進(jìn)樣，聚山梨酯80表現(xiàn)為單峰，保留時(shí)間短。

吳曉燕等[33]采用GF250 柱(250 mm×9.4 mm，4 μm)，柱溫:30 ℃，流動(dòng)相為20 mmol/L醋酸銨溶液-乙腈(90∶10)，流速0.6 mL/min，漂移管溫度110 ℃，空氣流速2.3 L/min。進(jìn)行了79批樣品的檢驗(yàn)，方法準(zhǔn)確可靠。

Vikram等[34]采用Waters生產(chǎn)的Oasis HLB固相提取小柱先對(duì)樣品進(jìn)行凈化，然后采用液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。固相提取小柱用1 mL乙腈洗2次，用1 mL水洗1次，加樣品1 mL，抽干溶液，用1 mL水洗脫2次，洗脫液收集至一個(gè)新的小柱上，加0.5 mL乙腈，抽干，盡可能收集洗脫液作為供試品溶液。采用ODS-3(C18)(150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，0～5 min，乙腈為0%；5～6 min，乙腈為0%～60%；6～8 min，乙腈為60%～80%，并保持5 min；隨后乙腈為0%至平衡。該方法的色譜圖中聚山梨酯80的峰型好，分析時(shí)間合適。

2.5 凝膠色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法 凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法，是根據(jù)分子大小進(jìn)行分離，有利于聚山梨酯80這種大分子與其他藥物分離。尹利輝等[35]采用凝膠色譜柱(8.7×30.0 cm)，柱溫30 ℃，流動(dòng)相為0.02 mol/L醋酸銨溶液-乙腈(90∶10)，流速0.6 mL/min，Alltech ELSD2000ES型檢測(cè)器，漂移管溫度110 ℃，氮?dú)饬魉?.3 L/min。測(cè)定了19種78批中藥注射液樣品，聚山梨酯80與其他物質(zhì)分離良好。對(duì)6種中藥注射液進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，回收率在93.8%～99.2%之間。李櫻紅等[36]測(cè)定79批冠心寧注射液中聚山梨酯80的含量，吳毅等[37]測(cè)定魚腥草注射液、新魚腥草鈉注射液、柴胡注射液中聚山梨酯80的含量，唐登峰等[38]測(cè)定8家企業(yè)30批莪術(shù)油注射液中聚山梨酯80的含量，高文分等[39]測(cè)定醒腦靜注射液中聚山梨酯80的含量，董媛等[40]測(cè)定了247批次血塞通注射液和141批次燈盞花素注射液，曹靜等[41]測(cè)定生脈注射液中聚山梨酯80含量，趙輝等[42]測(cè)定重組人干擾素α2b注射液中吐溫80的含量，證明方法準(zhǔn)確可靠。

3 展望

3.1 國產(chǎn)聚山梨酯80現(xiàn)狀 美國FDA批準(zhǔn)的用量顯示，靜脈注射的給藥途徑時(shí)，注射液中吐溫80最大允許用量為10%，凍干粉中吐溫80可以加至制劑總重量的12%。可見聚山梨酯80在國外被認(rèn)為高安全性的藥用輔料。這是基于國外聚山梨酯80的產(chǎn)品質(zhì)量高，性能安全穩(wěn)定的前提下。我國的聚山梨酯80產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，不同時(shí)期的產(chǎn)品質(zhì)量差異很大，與進(jìn)口產(chǎn)品質(zhì)量相比仍有較大差距[43]。郭志鑫等[44]對(duì)10家生產(chǎn)企業(yè)的21個(gè)批次產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量分析，注射劑廠家提供的吐溫80，均是在2010年版藥典執(zhí)行前生產(chǎn)，按照2005年版藥典檢測(cè)，有一批不合格，不合格項(xiàng)目為粘度和酸值，總體不合格率為5%。但是按照2010年版藥典，不合格的批數(shù)已經(jīng)上升到62%，其不合格項(xiàng)為環(huán)氧乙烷和過氧化值，不合格率分別為38%和57%。孫會(huì)敏等[45]對(duì)全國5個(gè)省市7家企業(yè)的18批吐溫80進(jìn)行質(zhì)量分析，按照2005年版藥典全部產(chǎn)品都合格，但是按照2010年版藥典檢測(cè)，總體不合格率升高至62%。在對(duì)現(xiàn)有產(chǎn)品雙氧水檢查中發(fā)現(xiàn)，7家企業(yè)的產(chǎn)品中均檢測(cè)出殘留，雙氧水含量高的吐溫80靜脈注射后，Beagle犬類過敏反應(yīng)也高。現(xiàn)實(shí)情況是我國制藥企業(yè)大量采購進(jìn)口的注射級(jí)聚山梨酯80來滿足生產(chǎn)需求。

3.2 檢驗(yàn)方法選擇 聚山梨酯80作為增溶劑、乳化劑在注射液中使用廣泛，使許多水溶性差的藥物具有廣闊的開發(fā)前景。隨著人們對(duì)于藥用輔料的研究深入，其安全性備受關(guān)注。使其在藥品中的用量成為檢測(cè)的重點(diǎn)。迫切需要一種簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確的方法測(cè)定其含量。隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷提高，根據(jù)樣品的特點(diǎn)，選擇合適的檢測(cè)方法測(cè)定其含量成為現(xiàn)實(shí)。制劑中的聚山梨酯80建議采用凝膠色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法，該方法經(jīng)過多種制劑檢驗(yàn)驗(yàn)證，方法準(zhǔn)確可靠，便于操作。由于聚山梨酯80分子量為1 309.8，具有長鏈結(jié)構(gòu)，屬于大分子，藥物分子一般都屬于小分子，易于分離。通過凝膠色譜分離，能夠控制產(chǎn)品分子量分布，分子量分布范圍低的產(chǎn)品質(zhì)量更加可靠，安全性高[44]。對(duì)于生物樣品，可以采用固相萃取法或液-液萃取法去除蛋白質(zhì)，再經(jīng)過色譜分離，然后再利用質(zhì)譜的高靈敏度進(jìn)行檢測(cè)。質(zhì)譜具有高分辨率，能夠?qū)⒉煌|(zhì)荷比的物質(zhì)分別測(cè)量，同時(shí)測(cè)量多種物質(zhì)，定性定量準(zhǔn)確。

3.3 質(zhì)量控制要點(diǎn) 在提高聚山梨酯80的含量的同時(shí)，更應(yīng)將質(zhì)量控制的重點(diǎn)放在相關(guān)的雜質(zhì)檢測(cè)上，聚山梨酯80本身雖然具有一定的藥理活性，但是其本身的活性不及雜質(zhì)的活性，雜質(zhì)的活性是其產(chǎn)生不良反應(yīng)的主要原因，應(yīng)重點(diǎn)進(jìn)行監(jiān)控，對(duì)于購入的聚山梨酯80輔料，應(yīng)嚴(yán)格按照現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，并增加脂肪酸組成檢查[46-47],雙氧水檢查[48-50]及殘留溶劑檢查[51]，脂肪酸復(fù)雜的產(chǎn)品一般是由于使用的原料油酸純度不夠高，為了使產(chǎn)品顏色符合規(guī)定，需要添加雙氧水除色，造成雙氧水殘留。在進(jìn)行制劑生產(chǎn)前嚴(yán)格控制其質(zhì)量，以降低不良反應(yīng)發(fā)生的概率，將用藥風(fēng)險(xiǎn)控制在生產(chǎn)前。

參考文獻(xiàn)：

[1] 周恩麗,孟文娟,徐連明,等.芪葛口服液制備工藝[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(5):4-6.

[2] 胡正芳,柳燕,李除夕,等.南五味子總木脂素軟膠囊制備工藝優(yōu)選[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(17):8-12.

[3] 李正明,袁海,張?jiān)婟?等.復(fù)方茵陳注射液處方中增溶劑的選擇[J].中國藥房,2013,24(7):611-613.

[4] 馬鴻雁,叢英,張明令,等.中藥注射劑中吐溫80用量解析[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2010,6(8):17-18.

[5] 劉福和,趙燕敏,馮健,等.聚山梨酯80包裹神經(jīng)毒素-Ⅰ聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒腦內(nèi)動(dòng)力學(xué)研究[J].中草藥,2009,40(11):1760-1763.

[6] 孫考祥,慕宏杰,張小喜,等.人參皂苷Rh2自微乳釋藥系統(tǒng)的制備和評(píng)價(jià)[J].中國藥學(xué)雜志，2008,43(9):683-687.

[7] 陳小新,原素,謝稱石,等.葛根素自微乳給藥系統(tǒng)的制備及其質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].中草藥,2011,42(8):1512-1516.

[8] 宋華,陳建明,梁慧君,等.采用均勻設(shè)計(jì)法研制多西紫杉醇聚山梨酯80/磷脂混合膠束注射液[J].中國藥學(xué)雜志,2008,43(17):1327-1332.

[9] 葉燕斌,沈曉冬,崔升,等.聚山梨酯80/Fe3O4復(fù)合微球的制備、特性及在靶向MRI中的應(yīng)用[J].磁性材料及器件,2011,42(6):57-62.

[10]仲陽,張本善,白卓杰,等.可透過血腦屏障的MRI造影劑的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2012,16(19):167-169.

[11]張少鋒,鄢丹,唐慧英,等.微量量熱法研究増溶性輔料吐溫80對(duì)紅細(xì)胞生理活性的影響[J].化學(xué)學(xué)報(bào),2010,68(20):2119-2124.

[12]李暢,涂家生.聚山梨酯80組分與其溶血性的關(guān)系[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,(3):231-235.

[13]郭玉,楊清敏,王晶翼,等.聚山梨酯80致RBL2H3肥大細(xì)胞脫顆粒的研究[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2008,28(19):1676-1679.

[14]付鴻材,丁元義,章超.聚山梨酯-80是魚腥草注射液不良反應(yīng)的重要誘因[J].九江學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2012,27(1):65-66.

[15]Ema M,Hara H,et a1.Evaluation of developmental neurotoxicity of polysorbate 80 in rats[J].Reproductive Toxicology,2008,25:89-99.

[16]耿興超,宋瑩,張琳,等.不同生產(chǎn)工藝聚山梨酯80的Beagle犬類過敏反應(yīng)研究[J].中國藥事,2011,25(10):982-984.

[17]閆位娟,李連達(dá),張美玉,等.含聚山梨酯80中藥注射劑對(duì)Beagle犬致敏性研究[J].中國新藥雜志,2010,19(15):1369-1372.

[18]鄭豐渠.魚腥草注射液致豚鼠全身主動(dòng)性過敏反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2012,27(7):841-843.

[19]孫偉偉,李貽奎,張金艷,等.魚腥草注射液致食蟹猴類過敏反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)雜志,2011,52(9):773-775.

[20]張海燕,韋迎春,鄔偉魁,等.3種增溶性輔料致大鼠肝腎損傷[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(20):237-241.

[21]?；哿?李慶忠,陳志勇,等.含吐溫80的不同注射劑溶血試驗(yàn)研究[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2012,13(2):108-111.

[22]張銳,王玉,譚力,等.吐溫80的組分分析[J].中國藥學(xué)雜志,2012,47(2):149-154.

[23]李劍,謝俊,黃春玉,等.聚山梨酯80的脂肪酸組成及其精制方法研究[J].藥學(xué)與臨床研究,2010,18(1):46-49.

[24]閆位娟,王建農(nóng),邵立軍.42種中藥注射劑中吐溫80定性定量測(cè)定[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2009,30(21):2366-2369.

[25]張俏,史文靜,曹愛蘭.野菊花注射液中吐溫80含量的測(cè)定[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2012,8(6):39-40.

[26]劉燕梅,蒲旭峰,張良,等.比色法測(cè)定魚腥草注射液中聚山梨酯80含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2008,9(6):434-637.

[27]Michael Adamo,Lawrence W Dick Jr,Difei Qiu,et al.A simple reversed phase high-performance liquid chromatography method polysorbate 80 quantitation in monoclonal antibody drug products[J].J Chromatogr B,2010,878(21),1865-1870.

[28]Hu M,Niculescu M,Zhang XM,et al.High-performance liquid chromatographic determination of polysorbate 80 in pharmaceutical suspensions[J].J Chromatogr A,2003,984(2):233-236.

[29]李建偉,趙瑩,聶磊.GC法測(cè)定復(fù)方苦參注射液中聚山梨酯80的含量[J].藥物分析雜志,2011,31(10):1993-1995.

[30]Baker SD,Zhao M,He P,et al.Simultaneous analysis of docetaxel and the formulation vehicle polysorbate 80 in human plasma by liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J].Anal Biochem,2004,324(2):276-284.

[31]Sparreboom A,Zhao M,Julie R,et al.Determination of the docetaxel vehicle,olysorhate 80,in patient samples by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].J Chromatogra B Analyt Technol Biomed Life Sci,2002,773(2):183-190.

[32]Nair LM,Stephens NV,Vincent S,et al.Determination of polysor-bate 80 in parenteral formulations by high-performance liquid chromatography and evaporative light scattering detection[J].J Chromatogr A,2003,1012(1):81-86.

[33]吳曉燕,郭青,狄留慶.脈絡(luò)寧注射液中聚山梨酯80的含量測(cè)定與安全性分析[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2011,31(7):554-556.

[34]Nayak VS,Tan Z,Ihnat PM,et al.Evaporative light scattering detection based HPLC method for the determination of polysorbate 80 in therapeutic protein formulations[J].J Chromatogr Sci,2012,50(1):21-25.

[35]尹利輝,范可青,朱俐,等.凝膠色譜發(fā)光散射檢測(cè)法檢測(cè)中藥注射劑中吐溫80的含量[J].藥物分析雜志,2012,32(9):1688-1689.

[36]李櫻紅,黃琴偉,祝明,等.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測(cè)定冠心寧注射液中聚山梨酯80的含量[J].藥物分析雜志,2012,32(5):826-828.

[37]吳毅,梁成罡,金少鴻,等.SEC-ELSD法測(cè)定中藥注射液中聚山梨酯80的含量[J].藥物分析雜志,2008,28(1):12-15.

[38]唐登峰,祝明,陳碧蓮,等.HPLC-ELSD測(cè)定莪術(shù)油注射液中聚山梨酯80的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2011,8(5):462-465.

[39]高文分,袁文娟,王梅.HPLC-ELSD法測(cè)定醒腦靜注射液中聚山梨酯80的含量[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2012,33(7):59-60.

[40]董媛,張赟華,劉瑩瑩,等.中藥注射劑中添加聚山梨酯80的快速檢測(cè)[J].2010,25(4):248-249.

[41]曹靜,于健東,鄭笑為,等.生脈注射液中聚山梨酯80含量測(cè)定[J].中國藥師,2013,15(9):1377-1379.

[42]趙輝,李增禮,周樂春,等.HPLC法測(cè)定重組人干擾素α2b注射液中添加吐溫80的含量[J].中國生物制品學(xué)雜志,2012,254(5):623-624,629.

[43]韓榮,李蒙,張海燕,等.差示掃描量熱法評(píng)價(jià)聚山梨酯80質(zhì)量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011,30(11):1481-1484.

[44]郭志鑫,孫會(huì)敏,楊銳,等.藥用輔料聚山梨酯80(吐溫80)質(zhì)量狀況分析[J].2012,30(6):459-461.

[45]孫會(huì)敏,楊銳,欒琳,等.聚山梨酯80質(zhì)量分析與致敏原探究[J].藥物分析雜志,2011,31(10)：1850-1855.

[46]李劍,謝俊,黃春玉,等.聚山梨酯80的脂肪酸組成及其精制方法研究[J].2010,18(1):46-49.

[47]欒琳,趙霞,孫會(huì)敏.聚山梨酯80脂肪酸組成測(cè)定的研究[J].中國藥事,2013,27(7):711-714.

[48]徐秀泉,戴楊葉,宴鶴,等.碘化鉀還原法測(cè)定自然水體中微量過氧化氫的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(22):13641-13643.

[49]陳易暉,劉艷,周建立,等.高效液相色譜-紫外檢測(cè)法測(cè)定食品中的過氧化氫[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2009,26(2):414-417.

[50]楊銳,孫會(huì)敏,袁松,等.過氧化氫酶間接碘量法測(cè)定吐溫80中過氧化氫的含量[J].藥物分析雜志,2012,32(6):1040-1042.

[51]周劼,孫璐,王曉煒,等.頂空氣相色譜法測(cè)定聚山梨酯-80中的溶劑殘留[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(9):489-492.