楊金葳 林 瑩 通訊作者：郭建鵬

（1.長春金賽藥業(yè)有限責(zé)任公司，吉林 長春130012 2.長白山生物資源與功能分子教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（延邊大學(xué) ））

目前臨床使用朝醫(yī)經(jīng)典方劑千金文武湯（《東醫(yī)四象新編》）用于治療糖尿病（Diabetes mellitus，DM）具有顯著療效。本文以該方劑藥味中共有活性部位總黃酮的提取量為指標(biāo)，優(yōu)選最佳提取工藝。

儀器與試藥

UV-2201型紫外可見分光光度計(jì)（日本島津制作所）；FA2004型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）；蘆?。ㄙ徸灾袊幤飞镏破窓z驗(yàn)所，批號(hào)：818-9401）；藥材為：葛根（Pueraria lobata［willd.］ohwi）、黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi）、山藥（Dioscorea opposita Thunb.）、麥門冬（Ophiopogon japonicus［Thumb.］Ker-Gawl.）、五味子（Schisandra chinesis［Turcz.］Bail）、桔梗（Platycodon grandiflorum［Jacq.］A.DC.）、白芷（Angelica dahurica［Fisch.ex Hoffm.］Benth.et Hook.f.）；水為純水，其他試劑均為分析純。

方法與結(jié)果

1.處方分析：千金文武湯處方由葛根、山藥、黃芩、麥門冬、五味子、桔梗、白芷七味藥組成，具有補(bǔ)肺斂肺、潤燥化痰、生津解表的功效，主要用于太陰人下消，小便不禁等證［1］，目前朝醫(yī)臨床常用其治療DM。方中主藥葛根中黃酮類成分葛根素［2］、黃芩中黃酮類成分黃芩苷［3，4］有明確降血糖或降血脂作用。故以葛根、黃芩為主，結(jié)合其他藥味，選擇總黃酮為該方劑提取的指標(biāo)成分。

總黃酮含量測(cè)定方法學(xué)考察：采用紫外分光光度法，建立總黃酮含量的測(cè)定方法［5］。

2.溶液的配制。

對(duì)照品溶液：精密稱取干燥至恒重的蘆丁5.7mg，用適量水溶解后定容至100ml，即得。

樣品溶液：稱取處方量藥材，加入12倍量水浸泡1h，加熱煎煮提取1h，濾過，再加入10倍量水提取1h，濾過，合并濾液，定容至1 200ml，即得。

供試品溶液：精密吸取樣品溶液1ml于蒸發(fā)皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于恒重干燥箱中，50℃揮干溶劑，轉(zhuǎn)入層析柱，用30 ml石油醚洗脫，棄石油醚，再用30ml甲醇洗脫總黃酮，收集洗脫液，減壓蒸干，殘?jiān)眉状既芤喝芙獠⒍ㄈ葜?5ml即得。

3.線性關(guān)系的考察：精密量取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 ml至10 ml容量瓶中，用水定容，在256nm處測(cè)定吸光度。以吸光度值（Y）對(duì)濃度（X）進(jìn)行回歸，得到其回歸方程。結(jié)果表明，對(duì)照品溶液濃度與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。

4.精密度考察：精密量取上述對(duì)照品溶液，重復(fù)測(cè)定5次，RSD為0.77%，表明儀器精密度良好。

5.穩(wěn)定性考察：精密量取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24h進(jìn)行測(cè)定，RSD為0.91%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

6.重現(xiàn)性考察：精密稱取同一批樣品溶液5份，按供試品溶液項(xiàng)下制備，按上述方法測(cè)定，RSD為0.95%，表明本法重現(xiàn)性良好。

7.加樣回收率考察：精密量取已知含量的樣品溶液共6份，分別精密加入對(duì)照品適量，按供試品溶液項(xiàng)下制備，測(cè)定，計(jì)算回收率。本法平均回收率為97.77%，RSD為1.54%，表明本法準(zhǔn)確度較好，方法可行。

8.樣品濃度與吸光度線性關(guān)系考察：精密量取1ml樣品溶液，用蒸餾水定容至50 ml，分別精吸1、2、3、4、5ml置10ml容量瓶中，用蒸餾水定容，在256nm處測(cè)吸光度值。以吸光度值（Y）對(duì)濃度（X）進(jìn)行回歸，得其回歸方程。結(jié)果表明，樣品濃度與吸光度值呈良好的線性關(guān)系，表明以總黃酮含量作為樣品測(cè)定指標(biāo)合理、可行。

提取工藝優(yōu)化

1.試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)：采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，以樣品中總黃酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選最佳提取工藝。復(fù)方制劑實(shí)際生產(chǎn)中提取次數(shù)一般為2次，所以在提取工藝中，提取時(shí)間、溶劑用量是影響總黃酮提取量的主要因素。因此，選用L4（22）正交設(shè)計(jì)安排實(shí)驗(yàn)。因素水平設(shè)置見表1，正交實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果見表2。

表1 正交設(shè)計(jì)因素水平設(shè)置

表2 正交實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果

結(jié)果分析：以各實(shí)驗(yàn)組總黃酮的含量為指標(biāo)進(jìn)行分析，方差分析結(jié)果見表3。

表3 方差分析結(jié)果

結(jié)果表明，在所選因素的水平范圍內(nèi)，因素A（提取時(shí)間）、B（溶劑用量）對(duì)總黃酮提取量均無顯著性影響。通過正交試驗(yàn)所得結(jié)果進(jìn)行直觀選擇，最佳提取工藝為A2B1，即提取時(shí)間為90min／45min，溶劑用量為12倍／10倍。

2.驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)：按照上述優(yōu)化提取工藝進(jìn)行提取，重復(fù)進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，測(cè)得樣品中總黃酮含量為（3.532±0.05）mg／g，與正交實(shí)驗(yàn)最大值3.635mg／g接近，表明該工藝穩(wěn)定、可行。

討論

本文采用紫外分光光度法作為千金文武湯的含量測(cè)定方法，結(jié)果平均回收率為97.77%，RSD為1.54%，表明此法準(zhǔn)確、可靠，可用于總黃酮的含量測(cè)定。優(yōu)化的最佳提取工藝為：提取時(shí)間為90min／45min，溶劑用量為12倍／10倍。

［1］金海龍.綜述近十年朝醫(yī)藥學(xué)術(shù)進(jìn)展［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2009，15（5）：71-73.

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［3］李玉萍，劉建濤，熊向源，等.黃芩素的制備及抗糖尿病研究概況［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（32）：15648-15654.

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［5］朱華，唐桂興，張可鋒.基于紫外分光光度法的金花茶葉中總黃酮含量的測(cè)定［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（9）：4559-4561.